抗核抗体对鼻咽癌的诊断价值

曹令仪　陈英杰　李仲笑

【摘要】 目的：探讨间接免疫荧光法测定抗核抗体诊断鼻咽癌的可能性。方法：收集2018年6月-2019年10月江门市中心医院收治的129例鼻咽癌，77例健康体检标本作为对照组，通过间接免疫荧光法检测血清中抗核抗体。结果：抗核抗体阳性率分别为Ⅰ～Ⅱ期鼻咽癌组52.9%，Ⅲ～Ⅳ期鼻咽癌组62.1%，对照组18.2%，三组比较差异有统计学意义（字2=11.809，P=0.003）;Ⅰ～Ⅱ期鼻咽癌组与Ⅲ～Ⅳ期鼻咽癌组分别与对照组比较，差异有统计学意义（字2=9.972、8.015，P=0.002、0.005）;Ⅰ～Ⅱ期鼻咽癌组和Ⅲ～Ⅳ期鼻咽癌组比较，差异无统计学意义（字2=0.874，P=0.310）。抗核抗体核荧光核型比较，两组均以抗细胞核抗体为主，鼻咽癌组比对照组多了周期蛋白型、着丝点型和纺锤体型。抗核抗体荧光滴度比较，滴度1∶100，鼻咽癌组46.1%，对照组78.6%，差异有统计学意义（字2=5.003，P=0.025）;滴度1∶320，鼻咽癌组38.2%，对照组21.4%，差异无统计学意义（字2=1.444，P=0.229）;滴度≥1∶1 000，鼻咽癌組15.8%，对照组无。结论：鼻咽癌患者血清的抗核抗体不同于健康者生理性自身抗体，抗核抗体对鼻咽癌的诊断提供了一定的依据。

【关键词】 抗核抗体 间接免疫荧光法 鼻咽癌

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2020.15.028 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2020）15-00-03

Diagnostic Value of Antinuclear Antibody in Nasopharyngeal Carcinoma/CAO Lingyi， CHEN Yingjie， LI Zhongxiao. //Chinese and Foreign Medical Research， 2020， 18（15）： -67

[Abstract] Objective： To investigate the possibility of diagnosis of nasopharyngeal carcinoma by antinuclear antibody indirect immunofluorescence assay. Method： A total of 129 cases of nasopharyngeal carcinoma admitted to the Jiangmen Central Hospital from June 2018 to October 2019 were collected， and 77 healthy physical examination specimens were used as the control group. Determined antinuclear antibody by indirect immunofluorescence assay. Result： The positive rates of antinuclear antibodies were 52.9% in group Ⅰ-Ⅱ nasopharyngeal carcinoma， 62.1% in group Ⅲ-Ⅳ nasopharyngeal carcinoma， and 18.2% in control group. The difference among the three groups was statistically significant （字2=11.809， P=0.003）. The difference between the Ⅰ-Ⅱ nasopharyngeal carcinoma group and the Ⅲ-Ⅳ nasopharyngealcarcinoma group and the control group was statistically significant （字2=9.972， 8.015; P=0.002， 0.005）. There was no statistical difference between the Ⅰ-Ⅱ nasopharyngeal carcinoma group and the Ⅲ-Ⅳ nasopharyngeal carcinoma group （字2=0.874， P=0.310）. The anti-nuclear antibody fluorescence titer was 1∶100， 46.1% in the nasopharyngeal carcinoma group and 78.6% in the control group， the difference was statistically significant

（字2=5.003， P=0.025）. The titer was 1∶320， 38.2% in the nasopharyngeal carcinoma group and 21.4% in the control group， the difference was not statistically significant （字2=1.444， P=0.229）. The titer was ≥1∶1 000， 15.8% in the nasopharyngeal carcinoma group， and 0 in the control group. Compared with the nuclear nucleus of antinuclear antibody， both groups were mainly anti-nuclear antibodies， and the nasopharyngeal carcinoma group had more cyclin， centromere and spindle type than the control group. Conclusion： The anti-nuclear antibodies in the serum of patients with nasopharyngeal carcinoma are different from the healthy self-antibody antibodies， and anti-nuclear antibodies provide a basis for the diagnosis of nasopharyngeal carcinoma.

[Key words] Antinuclear antibody Indirect immunofluorescence Nasopharyngeal carcinoma

First-authors address： Jiangmen Central Hospital， Jiangmen 529000， China

鼻咽癌是我国常见的恶性肿瘤，早期（Ⅰ～Ⅱ期）鼻咽癌患者经过治疗5年生存率可以高达90%[1-2]。由于早期症状不典型，鼻咽解剖位置深导致期发病隐匿，70%患者发现鼻咽癌时已达中晚期（Ⅲ～Ⅳ期）。中晚期鼻咽癌治疗效果欠佳，5年生存率仅为40%[3]。EB病毒抗体检测作为鼻咽癌的筛选实验存在较高的假阳性，敏感性和特异性有待提高[4]。CT、核磁共振、病理活检和鼻咽内镜检查等是诊断鼻咽癌的主要方法，但创伤损伤和高昂的费用限制了其临床应用。抗核抗体（anti-nuclear antibody，ANA）是以真核细胞内所有抗原成分为靶抗原的器官非特异性自身抗体，主要用于輔助诊断自身免疫性疾病，观察疾病活动度和治疗反应。近年来研究表明，ANA高频率出现于恶性肿瘤不同阶段的患者血液中，它是恶性肿瘤早期诊断的潜在生物标志物[5]。国内学者对乳腺癌、肺癌研究表明，ANA作为肿瘤标志物能提高肿瘤的早期检出率[6-7]。本研究将用间接荧光法比较健康者和鼻咽癌患者血清的自身抗体，分析ANA与鼻咽癌的相关性，以探讨ANA作为鼻咽癌早期诊断指标的可能性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

江门市中心医院2018年6月-2018年9月收治鼻咽癌患者129例，年龄24～79岁，中位年龄51岁，男104例，女25例。纳入标准：患者必须经病理组织活检确诊为鼻咽癌及符合鼻咽癌的临床指征，没有自身免疫病临床表现。健康体检者既往身体健康，无慢性疾病史，无自身免疫病临床表现。按照UICC8版分期标准：Ⅰ期8例，Ⅱ期23例，Ⅲ期57例，Ⅳ期41例。按照WHO鼻咽癌组织学分型标准（2005年版）：非角化性癌117例，角化性鳞癌12例。选择同期健康体检者77例对照，年龄24～76岁，中位年龄50岁，男58例，女19例。两组年龄、性别比较差异无统计学意义（P>0.05）。

1.2 间接免疫荧光法检测ANA

清晨空腹状态下，抽取研究对象肘静脉血液3 ml，3 000 r/min分离血清零下20 ℃低温保存备用。检测试剂购自德国欧蒙诊断公司，严格按照说明操作。首次PBS稀释液将血清按1∶100稀释，取25 μl滴加于反应板，将贴有生物薄片载片倒扣反应板凹槽，室温放置30 min。PBS冲洗载片后，PBS浸泡5 min，取出晾干。滴加20 μl荧光素标记二抗于反应板，重复上述步骤后封片。ZISS荧光显微镜判读结果，以抗体滴度≥100为阳性。阳性标本者进一步1∶320和1∶1 000稀释。

1.3 统计学处理

用SPSS 25.0统计软件分析数据，计量资料以（x±s）表示，采用t检验。组间的百分率比较用字2检验，P<0.05为差异有统计学意义;当P<0.05，三组进行两两比较时，检验水准α=0.05/3=0.017。

2 结果

2.1 对照组和鼻咽癌Ⅰ～Ⅱ期组、Ⅲ～Ⅳ期组ANA的结果

77例体检对照组检出ANA阳性14例，阳性率18.2%;34例Ⅰ～Ⅱ期鼻咽癌患者组检出ANA阳性18例，阳性率52.9%;95例Ⅲ～Ⅳ期鼻咽癌患者组检出ANA阳性59例，阳性率62.1%，三组的阳性率差异有统计学意义（字2=11.809，P=0.003）。与对照组比，Ⅰ～Ⅱ期组和Ⅲ～Ⅳ期组的阳性率的差异有统计学意义（字2=9.972、8.015，P=0.002、0.005）。Ⅰ～Ⅱ期组与Ⅲ～Ⅳ期组比，阳性率的差异无统计学意义（字2=0.874，P=0.310），见表1。

2.2 对照组和鼻咽癌组的ANA的结果及荧光模式

对照组和鼻咽癌患者组ANA比较，阳性率分别为18.2%和58.9%，差异有统计学意义（字2=32.51，P=0.00）。鼻咽癌患者组7种荧光模式阳性，对照组只有4种荧光模式阳性，鼻咽癌组荧光模式更加丰富，见表2。

2.3 对照组和鼻咽癌组ANA阳性标本荧光滴度比较

ANA阳性标本，滴度1∶100，对照组阳性率78.6%，鼻咽癌组阳性率46.1%，两者差异有统计学意义（字2=5.003，P=0.025）;滴度1∶320，对照组阳性率21.4%，鼻咽癌组阳性率38.2%，两者差异无统计学意义（字2=1.444，P=0.229）;滴度1∶1 000，对照组未检出，鼻咽癌组阳性率15.8%。对照组以低滴度1∶100为主，鼻咽癌组各个滴度都有分布，以中低滴度为主，见表3。

2.4 对照组和鼻咽癌患者组ANA阳性标本在细胞内定位比较

ANA阳性标本中，对照组和鼻咽癌患者组在细胞内均以抗细胞核抗体为主，占71.5%和72.4%，两组间抗细胞核抗体和抗细胞浆抗体的比例差异无统计学意义（字2=0.233、0.082;P=0.630、0.775）。鼻咽癌组抗细胞分裂期蛋白抗体占抗核抗体阳性2.6%，对照组未检出，见表4。

3 讨论

早期诊断是治疗鼻咽癌，降低死亡率，提高患者生活质量的关键。目前，临床上以检测EB病毒抗体筛选早期鼻咽癌。但超过90%的人曾经感染EB病毒，部分正常的人体内存在潜伏感染状态的EB病毒。EB病毒感染存在于传染性单核细胞增多症等多种疾病。部分鼻咽癌患者EB病毒感染阴性。寻找新的血清标志物单独或联合EB病毒抗体诊断早期鼻咽癌是当今肿瘤研究的热门[8]。肿瘤在发生发展的过程中，恶性转化的细胞过量表达正常的成分、合成新的成分或者对自体蛋白翻译后俢饰、错误折叠产生肿瘤相抗原。肿瘤相抗原已经广泛应用于临床辅助诊断肿瘤。肿瘤早期，肿瘤相抗原浓度低，在血液存在时间短或集中的局部不能进入循环系统，常规方法难以检测。肿瘤抗原刺激机体免疫系统产生自身抗体[9]，自身抗体的产生放大了检测的生物信号，在肿瘤产生的早期就达到抗体检测的血清水平。自身抗体能够稳定地存在循环血液中，便于收集检测。自身抗体出现在临床症状前数月甚至数年的患者血液中，而且易于检测。相对于低浓度的肿瘤相关抗原，自身抗体能够更早辅助诊断恶性肿瘤[10-11]。自身抗体是诊断早期肿瘤十分有前景的肿瘤标志物。

間接免疫荧光法检测ANA是临床检查自身抗体实验室检测的推荐方法[12]。本研究中，鼻咽癌组患者ANA阳性率高于对照组，差异具有统计学意义，显示患者体内存在针对鼻咽癌组织的自身抗体，和童永清[13]研究相符。对照组ANA以1∶100低滴度为主，鼻咽癌患者组以1∶100和1∶320中低滴度为主，还有一部分对照组未检出的1∶1 000高滴度。咽癌组患者组和对照组都是以抗细胞核抗体为主，荧光模式比健康者丰富。Ⅰ～Ⅱ期组和Ⅲ～Ⅳ期患者阳性率差异无统计学意义，ANA与肿瘤转移关系不大。生理状态下，健康者能产生少量自身抗体，建立独特性和抗独特性网络，抑制自身免疫的出现发挥生理调节的作用。少部分健康者血清能检出低滴度的自身抗体。鼻咽癌肿瘤细胞恶变产生了新的蛋白质，或者某些蛋白质被过度表达，从而引起免疫应答产生自身抗体。肿瘤抗原的自身抗体增加了患者血清的阳性率，提高免疫荧光的滴度。鼻咽癌是一个多因素、多阶段、多基因参与的恶性肿瘤。肿瘤细胞恶变形成不同的肿瘤抗原，经免疫应答产生不同的自身抗体。鼻咽癌患者血清比健康者有更多不同种类的自身抗体，在ANA检测中显现更多的荧光核型。比较对照组和鼻咽癌患者组ANA分布的细胞定位和荧光模型，两组均以抗细胞核抗体为主。周期蛋白型、着丝点型和纺锤体型的荧光模式只出现在患者血清中，核仁型也比对照组高。前三种荧光核型自身抗体对应的靶抗原都是细胞有丝分裂分裂期出现的蛋白质[14]。核仁含有丰富的核糖体蛋白，与细胞增殖生长密切相关。核仁型行对应的靶抗原可能是某些与细胞增殖或生物合成有关的蛋白质。这提示了鼻咽癌患者体内ANA相应的靶抗原可能是某些与细胞分裂或细胞内生物合成有关的蛋白质。这就为ANA早期诊断鼻咽癌，甚至治疗鼻咽癌提供了理论上的可能性。

间接免疫荧光法检测ANA能对靶抗原所在的细胞成分进行荧光染色，显现出特征性的荧光模式。荧光模式初步区分不同的ANA，但不能确认靶抗原的本质。利用蛋白质微阵列，血清学筛选cDNA表达文库等技术[15-16]分析特征性荧光核型，明确其靶抗原的本质。研究靶抗原在鼻咽癌发生发展的分子机制，为鼻咽癌的诊断与治疗提供理论支持。筛选靶抗原对应的自身抗体，寻找对鼻咽癌特异性的自身抗体或自身抗体谱以补充或者验证ANA对鼻咽癌的早期诊断。

综上所述，鼻咽癌患者和健康者ANA的差异为鼻咽癌的早期诊断提供了一定的依据。

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（收稿日期：2019-02-03） （本文编辑：张亮亮）