甘肃永登产黄芪与陇西产黄芪主要成分对比分析

高克立 王永昌 夏小军 雷旭东 李娟 段赟

1.甘肃省医学科学研究院/甘肃省肿瘤医院，甘肃 兰州730050

黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.var.mongholicus（Bge.）Hsiao 或 膜 荚 黄芪Astragalus membraneceus（Fisch.）Bge.的干燥根［1］。始载于《神农本草经》，有补气升阳、固表止汗、利水消肿、生津养血、行滞通痹、托毒排脓、敛疮生肌之功效，被广泛应用于临床［2］。黄芪中的主要活性成分为黄芪黄酮（astragalus isoflavones）、黄芪皂苷（astragalus saponins）和黄芪多糖（astragalus polysaccharides）［2-4］。药理学研究表明，黄芪具有调节机体免疫功能、强心、降血糖、抗衰老、抗疲劳、抗病毒、抗肿瘤、镇静、镇痛、利尿等作用。本实验测定了甘肃永登产黄芪和陇西产黄芪水提取物中总黄酮、总皂苷和总多糖含量，对比分析两产地黄芪主要活性成分含量差异，报告如下。

1 实验材料

1.1 仪器 UV-240 型紫外分光光度计（岛津）；SHZ-D（Ⅲ）型循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；DHG-9030 型电热恒温鼓风干燥箱（上海精密实验设备有限公司）；METTLER AE260 型电子分析天平（瑞士）；CP2250 型电子分析天平（德国）；KQ-250 型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；TDL-20B 型低速大容量多管离心机（上海安亭科学仪器厂）等。

1.2 材料 永登产黄芪由甘肃润枫源农牧生态科技有限公司提供；陇西产黄芪购自陇西文峰药材交易城，经石长栓副研究员鉴定均为豆科植物为蒙古黄芪或膜荚黄芪的根。黄芪甲苷（批号：MUST-11092002，成都曼思特生物科技有限公司提供）；芦丁（批号：MUST-16111111，成都曼思特生物科技有限公司提供）；D（+）-葡萄糖及其他试剂均为市售分析纯；水为双蒸水。

2 方法与结果

2.1 黄芪的处理 取适量黄芪于40℃～80℃条件下烘干，粉碎成粗粉（过1 号筛），待用。

2.2 黄芪供试品的制备 分别称取永登产黄芪和陇西产黄芪粗粉3 份，每份100.0g，加10 倍量的水，浸泡半小时，水煎煮提取3 次，每次同倍溶剂提取1 小时，压榨过滤，滤液水浴浓缩至稠浸膏，稠浸膏于60℃～80℃烘干，粉碎称量，计算平均值，即为黄芪水煎膏得率。结果永登产黄芪与陇西产黄芪的水煎膏得率分别为30.78%和29.78%。干浸膏粉置干燥器中备用。

2.3 亚硝酸钠-硝酸铝法测定总黄酮［5］

2.3.1 芦丁对照品溶液的制备。精密称定芦丁对照品10.03mg，加甲醇溶解，转入50mL 容量瓶中，加甲醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，即得每mL 中含芦丁0.2006mg 的对照品溶液。

2.3.2 总黄酮标准曲线的绘制。精密吸取芦丁对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 和3.0mL 分别置于10mL 比色管中，加水至3mL，加5%亚硝酸钠溶液0.5mL，混匀，放置6min，加10%硝酸铝溶液0.5mL，混匀，放置6min，再加4%氢氧化钠5mL，加水至刻度，摇匀放置15min，以未加对照品试剂为空白，在200～700nm 进行扫描，在506nm 处有最大吸收，以吸光度（A）为纵坐标（y1），浓度（μg/mL）为横坐标（x1），绘制总黄酮的标准曲线。实验结果，见表1，总黄酮标准曲线见图1。

表1 芦丁不同浓度下显色后溶液的吸光度结果

图1 总黄酮标准曲线

根据图表，得回归方程y1=0.011x1+0.001，R12=1.0，浓度在10.03～60.18μg/mL 范围内线性关系良好。

2.3.3 精密度实验。精密吸取0.5mL 芦丁对照品溶液，按照2.3.2 项下方法显色，在506nm 处连续测定6 次吸光度，记录结果，计算RSD 为0.30%。表明仪器精密度良好。

2.3.4 重复性实验。精密吸取供试品溶液6 份，每份1.0mL。按照2.3.2 项下方法显色，在506nm 处测定吸光度，记录结果，计算RSD 为1.51%，结果表明该方法重复性良好。

2.3.5 稳定性实验。精密吸取供试品液1.0mL，按照2.3.2 项下方法显色，每隔5min 测定一次吸光度，持续100min，RSD 为1.40%，说明供试品溶液显色后在60min内稳定。

2.3.6 加样回收率实验。精密吸取已知含量的供试品液6 份，每份2.0mL，每2 管精密加入芦丁对照品溶液0.8mL、1.0mL 和1.2mL，按照2.3.2 项下方法显色，测定吸光度，计算浓度，得回收率。结果果见表2。

2.4 香草醛-高氯酸法测定总皂苷［1］

2.4.1 黄芪甲苷对照品溶液的制备。精密称定黄芪甲苷对照品0.0104g，加甲醇定容至10mL 容量瓶中，摇匀，即得含黄芪甲苷1.04mg/mL 的对照品溶液。

表2 总黄酮加样回收率实验结果（n=6）

2.4.2 总皂苷标准曲线的绘制［6-7］。精密吸取黄芪甲苷对照品溶液0.10mL、0.15mL、0.20mL、0.25mL、0.30mL、0.35mL、和0.40mL 分别置于10mL 比色管中，水浴蒸干，放置室温，分别加入5%香草醛乙酸溶液0.2mL，再加入0.8mL 高氯酸，混匀，于70℃水浴中放置15min，取出放置室温，加冰醋酸至刻度，摇匀，以未加对照品试剂为空白，在585nm 处有测定吸光度，以吸光度（A）为纵坐标（y2），浓度（μg/mL）为横坐标（x2），绘制总皂苷的标准曲线。实验结果见表3，总皂苷标准曲线见图2。

根据表3 数据绘制标准曲线，见图2，得回归方程y2=0.016x2-0.005，R22=0.998，浓度在10.4～41.6μg/mL 范围内线性关系良好。

2.4.3 精密度实验。精密吸取0.10mL 黄芪甲苷对照品溶液，按照2.4.2 方法在585nm 处，连续测定6 次，记录结果，计算RSD 为0.10%。表明仪器精密度良好。2.4.4 重复性实验。精密吸取供试品溶液6 份，每份0.5mL。按照2.4.2 项下方法显色，在585nm 处测定吸光度，记录结果，计算RSD 为0.42%，结果表明该方法重复性良好。

表3 黄芪甲苷不同浓度下溶液的吸光度结果（n=7）

2.4.5 稳定性实验。精密量取供试品液0.5mL，按照

2.4.2 项下方法显色，每隔5min 测定一次吸光度，持续100min，RSD 为0.22%，说明供试品溶液显色后在60min内稳定。

2.4.6 加样回收率实验。精密吸取已知含量的供试品液6 份，每份0.1mL，每2 管精密加入黄芪甲苷对照品溶液0.12mL、0.15mL 和0.18mL，按照2.4.2 项下方法显色，测定吸光度，计算回收率，结果见表4。

2.5 苯酚-硫酸法测定总多糖的含量［8］

2.5.1 葡糖糖对照品溶液的制备。精密称取105℃烘至恒重的D（+）-葡糖糖0.01015g，用水溶解定容至50mL容量瓶中，摇匀，即得每1mL 中含葡萄糖0.2030mg 的对照品溶液。

2.5.2 总多糖标准曲线的绘制。精密吸取葡萄糖标准液0，0.1mL，0.2mL，0.3mL，0.4mL，0.5mL，0.6mL 和0.7mL，用水定容至10mL 比色管中，分别精密吸取1.0mL，加入10mL 比色管中，加5%苯酚溶液2.0mL 摇匀，迅速加入浓H2SO4 溶液7.0mL，摇匀放置5min，置沸水浴中加热15min 后，取出冷却至室温，于490 nm 处以试剂空白为参比测定吸光度［8，9］。以吸光度（A）为纵坐标（y3），浓度（μg/mL）为横坐标（x3），绘制多糖的标准曲线。结果见表5。

图2 黄芪总皂苷标准曲线

表4 总皂苷加样回收率实验结果（n=6）

表5 葡萄糖不同浓度下溶液的吸光度结果

图3 总多糖标准曲线

根据所得数据制作散点图，绘制总多糖标准曲线，结果见图3，得回归方程为y3=0.062x3-0.036，R32=0.997，在2.03μg/mL～12.18μg/mL 范围内线性关系良好。

2.5.3 精密度实验。精密吸取0.10mL 葡萄糖对照品溶液，按照2.5.2 方法在490nm 处，连续测定6 次，记录结果，计算RSD 为0.12%。表明仪器精密度良好。

2.5.4 重复性实验。精密吸取供试品溶液6 份每份1.0mL，按照2.5.2 项下方法显色，在490nm 处测定吸光度，记录结果，计算RSD 为1.37%，结果表明该方法重复性良好。

2.5.5 稳定性实验。精密量取供试品液1.0mL，按照2.5.2 项下方法显色，每隔5min 测定一次吸光度，持续100min，RSD 为2.21%，说明供试品溶液显色后在60min内稳定。

2.5.6 加样回收率实验。精密吸取已知含量的供试品液6 份，每份1.0mL，每2 份精密加入20.3μg/mL 葡萄糖对照品溶液1.2mL、1.4mL、1.6 mL，按照2.5.2 项下方法显色，测定吸光度，计算回收率，结果见表6。

2.6 供试品含量测定。精密称取永登产黄芪干浸膏和陇西产黄芪干浸膏各1.0g，用适量水溶解，加甲醇定容至50mL，放置数分钟，各吸取上清液3 份，每份1.0mL，加入10mL 比色管中，分别按总黄酮、总皂苷和总多糖含量测定方法要求测定，计算平均值。按公式计算供试品中总黄酮、总皂苷和总多糖的百分含量。

表6 黄芪多糖加样回收率实验结果（n=6）

其中a%：黄芪水煎供试品中的活性成分的百分含量；供试品溶液各测定项下实际测定的吸光度A 值，代入标准曲线公式计算出的浓度；黄芪供试品的配制浓度。结果见表7。

表7 不同产地黄芪中总黄酮、总皂苷和总多糖实验结果（g/g，n＝3）

3 讨论

黄芪为甘肃的地道药材之一，多地均有栽培，甘肃陇西产黄芪质优量大，被誉为“中国黄芪之乡”。不同产地黄芪由于受品种、生态地理环境、土壤因子、生长年限以及栽培加工技术等多种因素影响，使得不同地域生长的黄芪生物活性成分含量差异很大［10-11］。

黄芪中总黄酮、总皂苷和总多糖的含量测定已有大量报道［7，9，12］，总黄酮、总皂苷和多糖含量用紫外分光光度法测定简单易行，多被采用。由于黄芪多以复方随证入药，临床又以水煎剂使用为多，故本实验以两产地黄芪水煎提液的干浸膏得率和干浸膏中主要活性成分的含量为指标进行比较，初步发现甘肃永登产黄芪与陇西产黄芪中中总黄酮、总皂苷和总多糖含量存在差异，永登产黄芪水煎膏得率比陇西产黄芪高出1 个百分点，水煎膏中总皂苷、总多糖的含量永登产黄芪高于陇西产黄芪，总黄酮的含量永登产黄芪低于陇西产黄芪。