水质粪大肠菌群多管发酵法样品培养温度对结果的影响

王朝霞

（辽宁省生态环境监测中心，辽宁沈阳 110161）

1 引言

粪大肠菌群是在44.5 ℃条件下能发酵乳糖产酸产气的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌［1］，是当前国内外环境监测部门评价水体污染程度的公认指标和主要监测项目之一，具有广泛的卫生学意义［2］。样品培养温度的控制是保证粪大肠菌群检测精确、可靠的必要条件，对于水质粪大肠菌群的监测具有重要意义。

2 实验部分［3］

2.1 实验原理

将样品加入含乳糖蛋白胨培养基的试管中，37 ℃初发酵富集培养，大肠菌群在培养基中生长繁殖分解乳糖产酸产气，产生的酸使溴甲酚紫指示剂由紫色变为黄色，产生的气体进入倒管中，指示产气。44.5 ℃复发酵培养，培养基中的胆盐三号可抑制革兰氏阳性菌的生长，最后产气的细菌确定为粪大肠菌群。通过查MPN 表得出粪大肠菌群浓度值。

2.2 水样采集

距水面10～15 cm 处采样，采集样品盛装于灭菌的采样瓶中。

2.3 试剂

单倍乳糖蛋白胨培养液；三倍乳糖蛋白胨培养液；EC 培养液。

2.4 实验步骤

根据水样污染程度，确定水样接种量。将水样接种到乳糖蛋白胨试管中，在37±0.5 ℃下培养24±2 h进行初发酵。轻微振荡在初发酵实验中产酸产气或只产酸未产气的试管，用火焰灼烧灭菌冷却后的接种环，将培养物分别转接到装有EC 培养基的试管中，在44.5±0.5 ℃下培养24±2 h。培养后立即观察，倒管中产气证实为粪大肠菌群阳性。最后根据阳性管数查MPN 表换算样品中粪大肠菌群数。

3 实验结果与讨论

对培养箱进行校准后，分别在43.5±0.5 ℃，44.5±0.5 ℃，45.5±0.5 ℃条件下，对标准样品、污水处理厂出口水、大伙房水库水、浑河鸟岛断面水和沈阳市郊农户地下井水5 个不同来源的样品进行原样、10-1、10-2、10-3浓度的接种，每个浓度接种5 根试管，每根试管接种1 mL，24 h 培养。

标准样品培养实验结果见表1。

表1 标准样品培养实验结果

由图1 可见，随着培养温度的升高，标准样品培养实验结果呈现先升后降的趋势，且变化显著。

图1 标准样品培养实验结果

污水处理厂出口水培养实验结果见表2。

表2 污水处理厂出口水培养实验结果

由图2 可见，随着培养温度的升高，污水处理厂出口水培养实验结果呈现先升后降的趋势，且变化显著。

图2 污水处理厂出口水培养实验结果

大伙房水库水培养实验结果见表3。

表3 大伙房水库水培养实验结果

由图3 可见，随着培养温度的升高，大伙房水库水培养实验结果呈现先升后降的趋势，且变化显著。

图3 大伙房水库水培养实验结果

浑河鸟岛断面水培养实验结果见表4。

表4 浑河鸟岛断面水培养实验结果

由图4 可见，随着培养温度的升高，浑河鸟岛断面水培养实验结果呈现先升后降的趋势，且变化显著。

图4 浑河鸟岛断面水培养实验结果

沈阳市郊农户地下井水培养实验结果见表5。

表5 沈阳市郊农户地下井水培养实验结果

由图5 可见，随着培养温度的升高，沈阳市郊农户地下井水培养实验结果呈现先升后降的趋势，且变化显著。

图5 沈阳市郊农户地下井水培养实验结果

4 结论

对实验结果进行比对可以看出，不同来源的水质随着培养温度的变化呈现相似的变化趋势，且变化显著。由此可见，温度差异对MPN 结果的影响非常明显，因此，要严格控制培养温度，在实验前一定要对培养箱进行温度校正，在要求的44.5±0.5 ℃进行培养，使每次测得的结果具有一定的可比性。