母犬发情周期临床外观及阴道内部形态变化规律的研究

熊 前，王春亮，余 盼，吴 衍，李川武

（1.公安部 南昌警犬基地，南昌 330100；2.江西省警犬良种繁育与行为科学研究重点实验室，南昌 330100）

母犬性成熟后，其行为、卵巢、生殖道等会发生诸多生理变化，并表现出周期性的变化规律，即发情周期。根据母犬的发情征候和行为特点，发情周期一般分为发情前期（持续时间为5～20 d，平均9 d）、发情期（持续时间为5～15 d，平均9 d）、发情后期（持续时间为45～70 d，平均60 d）、休情期（持续时间为80～240 d，平均150 d）。犬发情周期不同阶段主要生殖激素水平不同，受生殖激素作用的影响，其阴道上皮细胞、阴道黏膜及外阴部特征均会产生变化，并呈现一定的变化规律［1］。可以通过母犬阴道临床外观及阴道内部形态观察对发情阶段进行有效判断。试验通过对母犬不同发情阶段阴道外观及内部形态进行观察，探讨母犬发情周期规律性变化，以准确判断犬发情周期的不同阶段，为确定母犬最适交配期及提高配种母犬受胎率和窝产仔数提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物

3～5岁德国牧羊犬6头，公安部南昌警犬基地2019年11月份发情并经同期发情的健康母犬。犬只严格按照《公安部警犬繁育工作规则》《警犬饲养管理操作规程》等要求统一开展饲养管理及疾病防治［2］。

1.2 试验器材

犬用TCI内窥镜系统，购自宁波智光机电科技有限公司；EOS7D相机，佳能（中国）公司；Beckman AccessTM全自动化学发光检测系统，购自美国贝克曼库尔特有限公司；开膣器、无添加剂一次性使用真空采血管、医用棉签、医用超薄乳胶手套等。以上器材由江西省警犬良种繁育与行为科学研究重点实验室提供。

1.3 测定项目

1.3.1 临床外观观察 自母犬外阴部出现血样分泌物开始，每天由饲养员牵犬并使其背向下成半直立状态，试验人员用温湿毛巾对母犬外阴部周围进行清洁，一只手托住母犬臀部，用拇指和食指将阴门分开，触摸阴唇，判断外阴肿胀及阴唇柔软程度；用食指和拇指将阴门张开，暴露阴道腹侧壁，观察阴道内壁颜色、毛细血管充血程度，以及阴门分泌物的量、黏稠度及颜色；触摸外阴部，观察尾根的偏移情况，同时由试验助手对外阴部进行拍照。

1.3.2 阴道内部形态观察 由饲养员牵犬保定，用开膣器将母犬阴门分开，用TCI内窥镜系统探头与水平方向呈约60°角插入阴道，再水平插入阴道深处，直达子宫颈口。通过图像传感器获取阴道内壁褶皱、黏膜颜色、光滑度及子宫颈口等内部形态图像。

1.3.3 生殖激素的测定 以母犬外阴部开始出现血样分泌物作为第1天，早晨空腹状态下采集前肢内侧静脉血5 mL，在37℃水浴锅内静置20 min，3 600 r／min离心10 min，收集血清，并将其分为两份，一份用于检测雌二醇激素（E2）浓度，另一份于－20℃低温保存。E2采用Beckman AccessTM全自动化学发光检测系统检测，具体操作步骤按照试剂盒说明书进行。

2 结果与分析

2.1 临床外观观察结果

通过发情母犬外阴部拍照（结果见图1）进行观察可知，发情前期母犬外阴部肿胀明显，触摸阴唇发硬，排出血样分泌物颜色较深，外阴内壁充血，触摸尾根无明显偏尾现象。进入发情期后，母犬外阴部肿胀程度达到最大，阴唇柔软，出现皱横现象，分泌物颜色逐渐变为淡黄色。将外阴暴露，内壁泛白发亮，尾根出现偏尾现象。此时采用试情法，母犬愿意接受交配。而进入发情后期，母犬外阴部逐步收缩，阴唇变柔软，皱纹变得明显，外阴偶见少量黑褐色分泌物排出。休情期母犬外阴完全收缩，无充血、肿胀，阴道内也无分泌物排出。

2.2 阴道内部形态观察结果

见图2。

母犬阴道内部形态观察结果表明，发情前期母犬阴道内壁有圆形褶皱，褶皱黏膜水肿，表面光滑但无光泽，呈粉红色，子宫颈口微张，有明显血样分泌物排出。进入发情期后，阴道内壁圆形褶皱萎缩变小，褶皱顶部形成尖锐角度，褶皱黏膜水肿，表面光滑，有强光泽和滑润感，呈粉红色；子宫颈口松弛、开张，分泌物颜色变淡，为淡黄色。而进入发情后期，阴道褶皱为扁平、不光滑状态，黏膜呈红色，色泽变淡，子宫颈口开始闭合，偶见无色、黏稠分泌物排出。休情期母犬阴道内壁褶皱呈不光滑的平扁状态，无光泽，子宫颈口闭合，无分泌物排出。

2.3 生殖激素检测结果

见图3。

由图3可以看出：发情期间E2浓度呈上升趋势，从刚开始的较低水平（53.63±11.75）pmol／L增加到最高峰值（220.42±15.35）pmol／L，此时为第9天；之后迅速下降，直到第14天后降至仪器可检测的最低临界值（18.35 pmol／L）。

3 分析与讨论

1）犬生殖激素主要包括E2、孕酮（P4）和促黄体素（LH），变化较复杂，但仍有一定的规律性，可为犬的繁殖计划提供理论参考。P.N.Olson等［3］、王新蕾等［4］的研究表明，E2是母犬发情周期分泌的重要生殖激素，其变化伴随母犬发情的临床症状（阴道壁、外阴的肿胀及血性分泌物的发生）。P.W.Concannon等［5］研究发现，E2在母犬发情前期会持续升高，由18.35～36.70 pmol／L升高到最高值（165.15～440.40 pmol／L），其峰值一般出现在LH峰值前的1～3 d，即在LH脉冲式波动出现前的0.5～2.0 d。本试验结果也表明，母犬发情前期E2浓度在第9天达到峰值，其后迅速下降至仪器可检测的最低临界值；母犬E2浓度变化伴随外阴部及阴道内部结构均发生一定的变化，E2浓度变化规律与前人研究结果基本一致，但个体之间存在较大差异。因此对母犬的生殖激素进行监测，可为提高无明显发情症状母犬的发情鉴定准确率提供参考。

2）正常母犬在进入发情前期时，E2浓度上升导致母犬外阴渐肿胀、变大，并伴有血样分泌物排出。分泌物组成包括由子宫中渗出的完整或溶解的红细胞浆液及血红蛋白［6］。本试验结果表明，母犬发情前期阴道外部充血、肿胀，阴唇逐渐增大、变硬；进入发情期后外阴肿胀程度达到最大，阴唇变软；到发情后期外阴肿胀逐渐消退，阴唇仍然柔软，皱纹现象明显；直到休情期外阴完全收缩、无肿胀。外阴流出的分泌物颜色由发情前期暗红色逐渐变浅，进入发情期逐渐变为淡黄色，甚至明亮无色，发情后期、休情期基本无分泌物排出。分泌物的量在发情前期先增多后减少，进入发情期继续逐渐减少，直到发情后期、休情期基本无分泌物流出。这与范泉水等［7］的研究结果基本一致，说明德国牧羊犬品种与其他品种在发情周期中的临床症状一致，发情周期中不同阶段具有不同的临床症状特征变化，可以根据这些变化规律来判断母犬所处的发情阶段。

3）本试验通过内窥镜系统对母犬阴道内部形态进行观察，揭示了不同发情阶段阴道内部形态的变化规律，为犬的人工授精及阴道检查提供了有效依据。研究表明，母犬生殖激素的变化与行为及生理活动之间存在一定的关系［8］，但对生殖道内部形态的变化机制还有待于进一步研究。

4）在实际工作中，母犬发情鉴定更多的是依据外阴部的变化来判断；生殖激素检测和阴道内部形态观察法主要用于辅助发情鉴定。由于品种和个体差异较大，特别对于发情异常或外阴部观察难以准确判断的犬，采取与生殖激素检测及阴道内部形态观察法相结合的方法进行综合判断具有很好的效果。