液质联用色谱法测定化妆品中对羟基苯乙酮的含量

方怡琳 龙秋仪 李秋英 李 成 林锦雄

（广州艾蓓生物科技有限公司 广东广州 510850）

1 前言

对羟基苯乙酮（C8H8O2）是天然等同化合物，存在于Lampaya hieronymi（草药，原产于拉丁美洲）和Rubus chamaemorus（云莓，生长于高山带）中，常被用作胆囊炎及急、慢性黄疸型肝炎治疗的辅助药品。此外，C8H8O2常被用作香料的合成原料[1]，是化妆品中具有防腐功效的新型原料[2]。本文采用高效液相色谱-三重四级杆质谱联用仪（HPLC-TQMS）对化妆品中C8H8O2的含量进行分析，为C8H8O2的测定分析提供参考。

2 实验部分

2.1 仪器、试剂和材料

C8H8O2标准物质（CAS:99-93-4，美国 CATO）；甲醇（CH3OH）（色谱纯，美国霍尼韦尔）；Agilent Ultivo三重四极杆质谱仪（安捷伦科技（中国）有限公司）；MISTRAL EVO氮气发生器（优莱博技术（北京）有限公司）；Mini-Plus H2O-MA-UV-T超纯水机、SECURA 225D-1CN分析天平（德国赛多利斯）；KQ5200DE超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；TDL-80-2B离心机（上海安亭科学仪器厂）；0.22 μm过滤头。

2.2 检测条件

2.2.1 色谱条件

色谱柱:ZORBAX Eclipse Plus C18柱（2.1 mm×50 mm 1.8-Micron）；柱温:25℃；进样体积:1.0 μL；流速:0.2mL/min；流动相:A为CH3OH、B为水；等梯度洗脱程序:0～3 min，90%A+10%B。

2.2.2 质谱条件

质谱条件优化:将C8H8O2标准储备液用CH3OH稀释成1 μg/mL的对照溶液，通过直接进样法进行质谱条件优化。利用Agilent MassHunter Acquisition Optimizer软件获得MS离子对，以确定最佳母离子和子离子、碎裂电压和碰撞能量。选择2～3个特征碎片离子作为检测离子，用于化合物的定性判断依据，详见图1。

离子源:电喷雾离子源（ESI（-）），温度 350℃；检测方式:质谱多反应监测（MRM）；干燥气:氮气（N2），流速 7.0 L/min；雾化气压力:15psi（约 0.1 Mpa）；毛细管电压:3 500 V；离子驻留时间:100 ms；相应的监测离子对质荷比（m/z）、裂解电压和碰撞能量参数详见表1。

图1 C8H8O2标准溶液的提取离子色谱图

表1 化合物监测条件

2.3 标准系列溶液的制备

用分析天平准确称取C8H8O2标准物质0.025 g（精确至0.000 01 g）于25 mL容量瓶中，用CH3OH定容，配制成1 000 μg/mL C8H8O2标准储备液Ⅰ，备用；准确移取标准储备液Ⅰ 0.25 mL于25 mL容量瓶中，用CH3OH定容，配制成10 μg/mL C8H8O2标准储备液Ⅱ，备用；准确移取C8H8O2标准储备液Ⅱ 0.025、0.05、0.125、0.25、0.5、0.625 mL 于 25 mL 容量瓶中，用 CH3OH 定容，配制成 10、20、50、100、200、250 μg/L的标准系列溶液，摇匀，备用。

2.4 样品预处理

称取样品 0.1 g（精确 0.000 01 g）于 100 mL容量瓶中，加CH3OH定容，振摇，涡旋混匀，超声提取15 min。转移至10 mL刻度离心管中，以4 000 r/min离心5 min，上清液经0.22 μm滤膜过滤，即得样品溶液，待检。必要时，可将样品溶液做稀释处理，经0.22 μm滤膜过滤后，上机检测。

2.5 制作标准曲线

在“2.2 检测条件”下，将 10～250 μg/L C8H8O2标准系列溶液分别进样，进行质谱分析，得到标准溶液的MRM色谱图（图2）。对标准系列溶液进行液相色谱质谱联用（LC-MS）分析，建立标准曲线，结果显示，在 10～250μg/L 范围内，Y=999.723783X（r2=0.998）线性关系良好，方法检出限为1 μg/L，详见图3。

图2 C8H8O2标准溶液MRM色谱图

2.6 样品中C8H8O2含量的计算

在“2.2检测条件”下，将“2.4样品预处理”制得的样品溶液进行质谱分析，采用保留时间和特征离子对丰度比定性，以待测组分相对离子峰面积定量，以标准曲线法计算含量。按公式（1）计算样品中C8H8O2的含量:

其中:w—C8H8O2的质量分数，%；p—样品溶液中C8H8O2的浓度，μg/L；v—样品定容体积，mL；f—稀释因子；m—样品取样量，g。

图3 C8H8O2标准曲线

3 结果和讨论

3.1 方法重现性测试及加标回收试验

在相同的检测条件下，将“2.4样品预处理”制得的样品溶液重复进样6次，分别计算样品溶液中的C8H8O2的含量。同时，选取4个化妆品样品，分别加标，再按“2.4样品预处理”配制样品溶液，在相同检测条件下进样，依据上述标准曲线公式，计算加标回收率，详见表2、表3。

表2 重现性测试样品溶液中C8H8O2浓度

表3 加标回收检测结果

3.2 精确度及重复性

取同一样品，依照样品预处理平行配制10份样品溶液，在相同检测条件下进样，检测结果详见表4。

表4 重复性结果

3.3 不同化妆品样品中C8H8O2含量检测结果

不同化妆品样品中C8H8O2含量检测结果详见表5。

4 结论

本方法基于LC-MS技术，建立了化妆中C8H8O2的定性和定量检测方法。该方法专属性强，分析时间短；检出限为1 μg/L，灵敏度高；平均加标回收率为96.6%；相对标准偏差RSD为0.7%。检测范围囊括了化妆品中C8H8O2添加量的范围，适合含C8H8O2化妆品的检测分析。

表5 不同化妆品样品中C8H8O2含量检测结果