冷冻胚胎解冻后过夜培养增殖与否对移植结局的影响

黄芬 杨冠群

（柳州市人民医院 广西 柳州 545006）

近年来，随着人类辅助生殖技术的不断发展，冷冻胚胎移植技术（frozen-thawed embryo transfer，FET）得以广泛应用[1]。研究表明，提前解冻过夜培养有助于评价胚胎的发育潜能，改善冻融周期妊娠结局[2]。本研究回顾性分析在我院进行的195例冻融胚胎移植周期的临床资料，旨在探讨D3 卵裂期胚胎提前解冻行过夜培养，胚胎有无卵裂球增殖对移植结局的影响，现报道如下。

1.资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2019 年1 月—10 月195 例在我科进行冻融胚胎移植周期的临床资料，均为玻璃化冷冻，解冻后胚胎完全复苏，患者年龄22 ～48 岁，平均（36.42±5.81）岁。按过夜培养后有无卵裂球增殖划分为A 组（有增殖组）161 周期，和B 组（无增殖组）34 周期。

1.2 方法

1.2.1 冷冻胚胎的选择 胚胎冷冻前进行形态学评分，选择正常受精、D2 发育至2 ～4 细胞胚胎且D3 天持续发育到6 ～8细胞碎片较少的胚胎进行冷冻[3]。

1.2.2 胚胎解冻方法 采用日本玻璃化解冻液套装（KITAZATO Corporation），严格按照说明书步骤进行解冻操作。将冷冻载杆从液氮中取出后迅速插入由二甲基亚砜、乙二醇和蔗糖组成的解冻液(TS 液、DS 液、WS1 液、WS2 液)中，先置于TS液中，38℃热台上保持1min，然后将胚胎移入DS 液室温下保持3min，再移入WS1 液中室温下保持5 min，最后移入WS2 液38℃热台上保持5min，解冻完成后充分洗涤，将胚胎放入已平衡好的盖油G2 培养液中过夜培养。

1.2.3 胚胎分级标准及胚胎完全复苏标准 胚胎分级标准[4]：Ⅰ级：卵裂球大小均匀，形状规则，透明带完整，胞质均匀清晰，没有颗粒现象；碎片在0%～5%；Ⅱ级：卵裂球大小略不均匀，形状略不规则，胞质有颗粒现象；碎片在6%～20%；Ⅲ级：卵裂球大小明显不均匀，形状不规则，胞质有粗大的颗粒；碎片在21%～50%；Ⅳ级：卵裂球大小严重不均匀，胞质可有严重颗粒现象；碎片在50%以上。以解冻后复苏胚胎的卵裂球无形态学可观察到的损伤作为胚胎完全复苏的标准。

1.2.4 移植子宫内膜准备方案 对于月经规律和正常排卵患者，选择自然周期。如果月经缺少规律性，且排卵障碍，则选择人工周期。

1.2.5 移植及妊娠判定 B 超引导下施行胚胎移植术，术后予以黄体支持，在移植后11 ～14 天，行血清HCG 检查，判断是否妊娠；若血清HCG 为阳性，继续黄体支持，在移植28 ～35 天超声检查见孕囊、胚芽或胎心搏动确定为临床妊娠。

1.3 统计学方法

2.结果

195 例周期中，40 例采用自然周期，155 例人工周期；完全复苏胚胎375 枚，移植胚胎370 枚，每例患者移植胚胎为（1.89±0.39）枚。

2.1 两组患者基本资料比较

A 组161 个周期，B 组34 个周期，两组间一般情况比较差异均无统计学意义（P ＞0.05）。见表1。

表1 两组患者一般情况比较

2.2 增殖影响

有增殖的A 组的临床妊娠率与种植率均高于没有增殖的B组，差异具有统计学意义（P ＜0.05），见表2。

表2 增值影响[%（n/N）]

3.讨论

影响FET 结局的因素复杂，除患者年龄、子宫内膜容受性等原因外，移植胚胎的发育潜能是其中一个重要影响因素。本研究提示，冻融胚胎复苏后过夜培养，卵裂球进一步增殖的胚胎具有较好的发育潜能，临床妊娠率及胚胎种植率均优于未增殖的胚胎。表明提前解冻过夜培养观察复苏后胚胎的进一步发育情况对胚胎技术人员及临床医生选择高质量的胚胎提供有价值的参考。有研究发现，随着胚胎复苏后卵裂求数目的进一步增加，临床妊娠率似有逐渐升高的趋势[5]。

冻融胚胎经过一段时间体外培养卵裂球未发生增殖的胚胎大多数存在染色体异常。而此类胚胎进行移植，会影响临床着床率，即使着床成功，也会因为染色体异常而发生流产[6]。LAVERGE[7]等对复苏后无生长的胚胎进行荧光原位杂交，发现这类胚胎大多数有单倍体、三倍体、四倍体甚至六倍体和嵌合体的发生，仅有20%左右的胚胎表现为正常二倍体，因此建议不要移植此类胚胎。

可见冻融胚胎提前解冻行过夜培养，观察卵裂球的增殖情况有助于评价胚胎的种植潜能，为胚胎的选择提供可靠依据，也有利于临床医生对患者妊娠结局进行预判。