衢州两种花叶变异柑橘的差异性研究

吴 群 程慧林 陈 骏 陈健民⋆

（1.浙江省衢州市经济特产站 衢州 324000； 2.浙江省衢州市农业科学研究院果树所）

衢州是有名的柑橘之乡，有1400多年悠久历史。据统计，衢州市柑橘栽培面积最多时 3.8×104hm2，产量最高时达91万 t。栽培品种以椪柑居多，胡柚、温州蜜柑次之，其他优质杂柑也开始陆续发展[1]。“衢州椪柑”、“常山胡柚”获国家地理标志产品认证。鸡尾葡萄柚（Cocktail grapefruit） 是由1950年前后杂交于美国加州大学河滨校区[2]暹罗甜柚（Siamese sweet pummelo） 和弗鲁亚橘（Frua mandarin） 的杂交得到品种，2013年初衢州地区从中国农科院柑橘研究所引入无病毒接穗，并以枳为基砧开展苗木繁育。2019年 7月先后在柯城区华墅乡园林村一株10多年树龄椪柑和衢江区周家乡相对村一株 4年生嫁接苗上发现花叶枝变（叶片边缘部分黄化），此时果实基本转色，而同一株树上未发生枝变的叶片、果实仍是绿色。

1 材料和方法

1.1 试验材料

供试样品分别采集自衢州市柯城区华墅乡园林村宇发家庭农场发生枝变椪柑的正常果实和花叶果实（11月22日采，样品1）；衢州市衢江区周家乡相对村碧岭丹地家庭农场发生枝变的鸡尾葡萄柚正常果实和花叶果实（11月23日采，样品 2）。

1.2 仪器设备

叶绿素仪（日本柯尼卡美能达SPAD-502Plus）、游标卡尺、高速组织捣碎机（转速10000～12000转/min，时间 10～20 s）、UV-1800紫外/可见分光光度计（日本岛津公司）、848型自动电位滴定仪（瑞士Metrohm中国有限公司）、色差仪（日本柯尼卡美能达CR-10）。

1.3 测定方法

1.3.1 叶片叶绿素含量SPAD值。选取完整干净的春梢正常叶片 3张和变异叶片 3张，用叶绿素仪夹取每张叶片正面的叶柄、叶中、叶尖、左叶缘中、右叶缘中 5个位点测定SPAD值。

1.3.2 单果重、纵横径和可食率的测定。取柑橘样品果，精密天平测单果重（g），游标卡尺测纵横径（mm），可食率=果实可食部分质量/全果质量×100%。

1.3.3 果实果皮色差的测定。取柑橘样品果，用色差仪测果实果皮光亮度值、红绿色差值、黄蓝色差值。

1.3.4 果实维生素 C含量。取样品柑橘可食部分，用高速组织捣碎机打浆，转速10000～12000转/min，时间 10～20 s，制成柑橘样品。取10ml柑橘样品，用50g/L三氯乙酸（TCA）溶液定容至100ml，提取15min，过滤后取 2ml提取液，分别加入 2ml浓度50g/L的三氯乙酸（TCA）溶液，2ml无水乙醇，1ml0.4%的磷酸-乙醇溶液，2ml浓度 5g/L邻菲罗啉和1ml浓度 0.3g/L的三氯化铁-乙醇溶液，30℃下反应60min，采用紫外分光光度计测定510nm处吸光值。

图1 两种花叶变异柑橘叶片SPAD值比较

1.3.5 果实总酸含量。取柑橘可食部分，用高速组织捣碎机打浆，转速10000～12000转/min，时间10～20 s，制成柑橘样品，采用全自动滴定仪，用标定过的NaOH滴定至pH8.2，记录消耗NaOH容积。

1.3.6 果实可溶性固形物（TSS）含量。取柑橘可食部分，用高速组织捣碎机打浆，转速10000～12000转/min，时间10～20 s。制成柑橘样品，取样品直接用折光率仪测定。

1.3.7 果实固酸比。果实固酸比=果实可溶性固形物（TSS）含量/果实总酸含量。

1.4 数据分析

数据采用Excel 2007进行统计，应用Duncan’s multiple rangetest 方法进行差异显著性分析。

2 结果与分析

2.1 两种花叶变异柑橘叶片叶绿素含量SPAD值的差异

从图 1可以看出，花叶椪柑、花叶鸡尾葡萄柚叶片SPAD值都低于对照正常叶，其中花叶椪柑叶片SPAD值极显著低于正常叶片，而花叶鸡尾葡萄柚的叶片SPAD值也显著低于正常叶片。

2.2 两种花叶变异柑橘果实单果重、纵横径和可食率的对比

表1 两种花叶变异柑橘果实与正常果实平均单果重、纵横径和可食率测定

从表 1可以看出，花叶椪柑、花叶鸡尾葡萄柚果实平均单果重、纵横径、可食率与对照果实无明显差异。

2.3 两种花叶变异柑橘果实色差的对比

从表 2中可以看出，花叶椪柑、花叶鸡尾葡萄柚果实光亮度都高于正常果实，果面色度偏白。果实红绿色差上花叶椪柑果实偏绿。果实黄蓝色差上花叶果实都比正常果实更偏黄。

表2 两种花叶变异柑橘果实果皮色差值测定

表3 两种花叶变异柑橘果实内在品质比较

2.4 两种花叶变异柑橘果实维生素 C含量、总酸含量和可溶性固形物含量对比

从表 3中可以看出，两种花叶变异柑橘果实维生素 C含量低于正常果实的含量。总酸含量、可溶性固形物含量和固酸比上差异不明显。

3 小结与讨论

在果树上，芽变选种这手段简便，收效快，果农容易掌握这门技术[3]。衢州地区柑橘栽培历史长，面积大，品种资源丰富，芽变材料在田间时有发生，广大果农和基层技术人员对新奇特的变异兴趣浓厚。作为技术推广人员应广泛收集保存变异资源，观察变异的稳定性。变异材料可以用来作为芽变研究的资源，一些有利变异的资源经过鉴定后可以直接作为品种投入到生产中[4]。

柑橘品种选育的实际工作中，可通过表型观察将芽变品种和普通品种区别开来，从而选育出新品系或品种。但柑橘遗传背景高度杂合，加之芽变是基因组的微小变化，常见的分子标记无法有效地区分芽变品种。转座子跳跃是引起芽变的主要原因之一，运用TD技术来研究不同转座子在柑橘芽变品种中的多态性，是柑橘芽变研究的一个较好的切入点[5]。据推测，衢州地区发现的这两个柑橘品种的变异可能就是基因组的微小变化表现出黄化的症状。因叶片也伴随出现黄化，初步推断此变异应与叶片叶绿素合成基因缺失或者突变密切相关，这需要进一步深入基因水平检测，而该变异性状是否稳定还需后续高接继续观察。如果该花叶性状能够稳定遗传，这两个变异品种也可作为较好的观赏柑橘品种进行繁育。