BAP1、Ki-67表达与老年肺腺癌患者肿瘤侵袭及预后的关系

安晓颖 李晓霞 陈宁 邸红芹 朱桂云 张彦坤

肺腺癌（Lung adenocarcinoma，LAC）是一种非小细胞肺癌，多起源于支气管粘膜上皮，多发于老年群体，且发病率随着人口老龄化增加逐渐升高[1]。LAC的早期诊断对患者预后改善具有重要意义，但患者发病早期缺乏典型症状，其诊断及治疗仍缺乏较为准确的评估标准[2]。近年来研究发现，Ki67是一种细胞增殖状态的重要标记物，在多种恶性肿瘤患者体内呈异常高表达，有助于恶性肿瘤的早期诊断和病情评估[3-4]。此外，乳腺癌1号基因相关蛋白1（Breast cancer gene 1-associated protein-1，BAP1）属于直接与遗传性乳腺癌有关的抑制基因。研究指出，BAP1基因的突变有数百种之多，与人体其他多种癌症都有密切关系[5-6]。但关于两者在肺腺癌诊断中的价值鲜有报道。基于此，本研究尝试分析BAP1、Ki-67表达与老年LAC患者肿瘤侵袭及预后的关系，旨在为临床诊断LAC 提供参考。报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取本院2018年1月至2019年2月296例老年LAC患者作为研究组，其中男114例，女182例；年龄60～82岁，平均（67.45±3.72）岁；体质量46～80 kg，平均（63.57±8.21）kg；居住地：187例城市，109例农村。另选取同期292例良性肺部肿瘤患者作为对照组，其中男105例，女187例；年龄60～80岁，平均（66.63±3.31）岁；体质量48～83 kg，平均（64.85±8.42）kg；居住地：179例城市，113例农村。对比两组年龄、性别、体质量、居住地，差异无统计学意义（P>0.05），具可比性。

纳入标准：①符合LAC 诊断标准[7]，并经术后病理诊断确诊；②年龄≥60岁；③检测前未接受相关治疗；④无沟通交流障碍；⑤均行手术治疗；⑥患者及家属知晓本研究，已签署同意书。排除标准：①合并其他恶性肿瘤者；②血液系统疾病患者；③严重感染性疾病患者；④心脑肝肾功能严重障碍者；⑤传染性疾病患者；⑥精神疾病患者。

1.2 方法

取所有研究对象术后肺组织标本，由专业检测师采用免疫组织化学法测定BAP1、Ki-67阳性表达率，具体操作：常规行固定、脱水、石蜡包埋处理，4～6 μm 连续切片后脱蜡、脱水、抗原修复，羊血清封闭10 min 后滴入一抗，于4℃下保存、过夜，采用聚丁二酸丁二醇酯缓冲液代替一抗作为阴性对照，PBS 缓冲液洗涤3次后加入二抗，常温下静置10 min，再次以PBS 缓冲液洗涤3次，加入二氨基联苯胺显色液显色，采用苏木素复染后封片。高倍显微镜下观察，每张切片随机选取5～10个高倍视野，每个视野计数100个瘤细胞，计数阳性细胞百分比。按着色细胞百分比分级，＜10%为阴性（-），≥10%为阳（+）。

1.3 观察指标

①两组BAP1、Ki-67表达情况。②探究BAP1、Ki-67与老年LAC发生的关系。③探究BAP1、Ki-67与老年LAC患者肿瘤侵袭的关系。④随访1年，统计研究组预后情况，对比不同预后患者BAP1、Ki-67表达情况。⑤采用卡普兰-迈耶曲线分析不同BAP1、Ki-67表达情况老年LAC患者的生存情况。

1.4 统计学方法

数据处理采用SPSS 22.0软件，计数资料以n（%）表示、采用χ2检验，采用KM 曲线分析生存情况，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组BAP1、Ki-67表达情况

研究组BAP1阳性表达率低于对照组，Ki-67阳性表达率高于对照组（P＜0.05），见表1。

表1 两组BAP1、Ki-67表达情况比较[n（%）]Table1 Comparison of BAP1、Ki-67 expression between the two groups[n（%）]

2.2 BAP1、Ki-67与老年LAC发生的关系

Logistic回归分析发现，BAP1、Ki-67与老年LAC发生显著相关（P＜0.05），见表2。

2.3 BAP1 与肿瘤侵袭相关性

BAP1、Ki-67与老年LAC患者年龄、性别、肿瘤直径、大体类型、分化程度无明显相关性（P>0.05）；BAP1与老年LAC患者TNM 分期、淋巴结转移、胸膜侵犯显著相关（P＜0.05），见表3。

2.4 研究组不同预后患者BAP1、Ki-67阳性表达率

随访1年，失访8例（其中BAP1阳性表达者3例，Ki-67阳性表达者2例）。根据预后情况分为生存者、死亡者。死亡者BAP1阳性表达率较生存者低，死亡者Ki-67阳性表达率高于生存者（P＜0.05），见表5。

表2 BAP1、Ki-67与老年LAC发生的关系Table2 Relationship between BAP1、Ki-67 and LAC in old age

表3 BAP1、Ki-67与肿瘤侵袭相关性[n（%）]Table3 Correlation between BAP1 and tumor invasion[n（%）]

表5 研究组不同预后患者BAP1、Ki-67阳性表达率比较[n（%）]Table5 Comparison of positive expression BAP1、Ki-67 patients with different prognosis in the study group[n（%）]

2.5 生存分析

KM 曲线分析，BAP1阳性表达者1年生存率较阴性表达者高，Ki-67阳性表达1年生存率较阴性表达者低（χ21=21.580，P1＜0.001；χ22=134.200，P2＜0.001），见图1。

3 讨论

肺癌为临床最常见恶性肿瘤之一，5年生存率极低，2018年的统计数据为18%，是癌症患者致死的主要病因[8]。LAC 的发生率约占肺原发肿瘤的40%，早期隐匿性更强，具有高度浸润和破坏性生长特征，且易侵犯血管和淋巴管壁，多数患者确诊时已出现血行及淋巴转移，预后极差[9]。因此，越来越多的研究致力于探求LAC 的早期诊断指标。

近期研究指出，BAP1可影响肿瘤细胞周期与增殖能力，其基因突变和缺失被认为参与肿瘤的发生发展[10]。BAP1属于泛素羧基末端水解酶家族成员，具有去泛素化酶活性，定位于细胞核内，可与乳腺癌1号基因相互作用，发挥抑制肿瘤细胞增殖、侵袭及迁移能力的作用[11]。马晶晶等[12]通过对41例成年慢性粒-单核细胞白血病患者的研究发现，其BAP1阳性表达率仅为31.70%。Kim SH 等[13]针对局限性肾细胞癌的研究也发现BAP1阳性表达率显著降低。此次针对老年LAC患者的研究得出了与上述文献报道相近的结果，且发现BAP1与老年LAC患者TNM 分期、淋巴结转移、胸膜侵犯显著相关，提示BAP1在多种恶性肿瘤及老年LAC 体内呈异常低表达状态，且参与肿瘤的增殖、侵袭及迁移。BAP1能够去除底物蛋白质的泛素化修饰，使底物逃逸“泛素-蛋白酶体”降解途径，增强其稳定性，或影响底物的功能活性，从而调控相关信号传导；同时能调控细胞转录、表观遗传、DNA 损伤修复等；而BAP1表达缺失则使上述作用减弱，最终引起肿瘤发生、进展[14]。此外，有学者认为，细胞核相关抗原Ki-67 的检测可指导非小细胞肺癌患者术后是否需要进一步开展辅助治疗[15]。Ki-67是一种与增殖细胞相关的核蛋白质，由MKI-67基因编码，与核糖体RNA 转录有关。Ki-67 失活可导致核糖体RNA 合成受限，其可以作为反映细胞增殖的标记物，同时可用于判断肿瘤恶性程度及侵袭力[16]。Yuan X 等[17]研究指出，Ki-67 存在于细胞周期G0期以外的所有阶段（细胞增殖的G1、S、G2和M 期），具有半衰期短的特性，脱离细胞周期后会被迅速降解，在反映肿瘤细胞增值率方面的可靠性较高。已有大量研究证实Ki-67与多种恶性肿瘤的发生发展、肿瘤恶性生物学行为及预后有关[18]。本研究进一步通过随访研究发现通过检测BAP1及Ki-67 的阳性表达情况，可能用于老年LAC患者预后评估，有可能成为老年LAC患者治疗的新靶点。

综上可知，BAP1阳性表达率降低及Ki-67阳性表达率升高均参与老年LAC 的发生发展，且与LAC 肿瘤侵袭存在密切相关性，早期检测有助于老年LAC 的诊断和预后评估；它们作为肿瘤的潜在标志物，将会成为推动老年LAC 研究进展的新动力。