复方黄柏液涂剂体外抑菌效果研究

孙绪丁，刘振勋，樊 苗，闫 斌

（1.山东汉方制药有限公司，山东 济南 250101；2.山东汉方生物科技有限公司，山东 济南 250101；3.山东中医药大学，山东 济南 250355）

金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌等是引起医院内感染的常见致病菌[1，2]。然而，抗生素的不合理使用加剧了细菌耐药性的产生，使常用抗生素对致病菌的作用不断减弱，引起多种药源性疾病，给人类健康造成潜在威胁[3]。开发新型具有抗菌活性的化合物周期长、难度大；我国中药资源丰富，研究发现，传统中药具有显著的抗菌作用，毒副作用小，且不易产生耐药性[4]。因此，中药抑菌作用的药理学研究受到越来越多研究者的关注。

复方黄柏液涂剂由连翘、黄柏、金银花、蒲公英和蜈蚣五味药组成。具有清热解毒，消肿祛腐等功效，用于治疗溃疡性结肠炎、疮疡溃后、外伤感染等。临床上在皮肤疾病[5]、外科感染[6]、肛肠疾病[7]、妇科疾病[8]、泌尿系统疾病[9]等相关疾病的治疗中，均取得了满意的疗效，并成功进入2018版国家基本药物目录。本研究选用常见的5种致病菌作为实验菌，进行体外抑菌实验，观察复方黄柏液涂剂及各组方提取物的抑菌作用，为其在感染性疾病中的应用提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 中药材

复方黄柏液涂剂（山东汉方制药有限公司，批号：16010811）；连翘提取物（山东汉方制药有限公司，批号：150730）；黄柏提取物（山东汉方制药有限公司，批号：150919）；金银花提取物（山东汉方制药有限公司，批号：150828）；蒲公英提取物（山东汉方制药有限公司，批号：151116）；蜈蚣提取物（山东汉方制药有限公司，批号：151118）。

1.1.2 菌种与培养基

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC(B)26003]，铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa）[CMCC(B)10104]，大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC(B)44102]，肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）[CMCC(B)46117]，变形杆菌（Proteus sp）[CMCC(B)49027]，以上菌种均由山东中医药大学微生物教研室提供。MH(B)肉汤培养基购于北京奥博星生物技术有限公司，按说明配制后，于121℃高压灭菌20 min备用。

1.2 方法

1.2.1 菌液的制备

将菌种接种至灭菌M H（B）肉汤培养基中培养18～24小时，用无菌生理盐水溶液以比浊管调整菌液浓度为1×106CFU/mL。

1.2.2 复方黄柏液涂剂及各组方提取物MIC测定

采用微量稀释法测定MIC，参照NCCLS标准进行。在96孔板中每孔加入培养基100 μL，然后在第1行中加入100 μL药液，从第1行中吸取100 μL混合液加入第2行，依次类推至第6行，得到2、4、8、16、32、64倍稀释药物梯度。第7行每孔加入庆大霉素10μl为阳性对照，第8行直接加入菌液作为阴性对照。同时设立药物稀释梯度和培养基空白作为对照，每个药物重复三次。分别加入各菌液10 μL，37℃孵育24 h，观察结果。

2 结 果

复方黄柏液涂剂及各组方提取物对5种CMCC标准菌株均有良好的抑制作用。结果见表1。

表1 复方黄柏液涂剂及各组方提取物抗菌试验结果

3 讨 论

试验结果证实复方黄柏液对多种细菌具有良好的抑制作用。在3.16 mg/mL浓度下，对铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、变形杆菌表现出较强的抑制效果，对大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌几乎无效。复方黄柏液组方之一黄柏药材提取物对上述五种菌种的抑制强度较弱，连翘药材提取物对上述五种菌种的抑制强度中等，蒲公英及金银花药材提取物对变形杆有较强的抑制活性（6.25 mg/mL），对大肠埃希菌抑制活性中等（50 mg/mL），对其他三种细菌抑制活性较弱。蜈蚣药材提取物对铜绿假单胞菌（0.75 mg/mL）、金黄色葡萄球菌（0.75 mg/mL）、变形杆菌（0.75 mg/mL）、肺炎克雷伯菌（0.75 mg/mL）抑制活性较强。

复方黄柏液涂剂对多种细菌有确切的抑制效果，其中各组方药材不同目标细菌的抑制活性有所不同。如蒲公英对变形杆菌有较强的抑制活性，而蜈蚣对铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、变形杆菌和肺炎克雷伯菌均有显著的抑制活性。由此证明复方黄柏液涂剂有良好的抑菌作用。复方黄柏液涂剂改变了传统的中药外用剂型，克服了传统中药外用膏剂、散剂等剂型中含汞和砷等剧毒品的缺陷。集中西医外用药之长，避其所短，颗粒微细，易于吸收，引流通畅，抗菌生肌值得在临床上推广使用。