利格列汀对2型糖尿病大鼠心肌病变的保护作用

荆 红

(山东医学高等专科学校附属医院，山东 临沂 276000)

利格列汀可以抑制DPP-4，减少胰高血糖素样肽-1和抑胃肽的分解代谢，从而降低血糖浓度，因此最初作为一种新型降糖药被广泛运用于临床。近年来的研究表明，DPP-4抑制剂在心血管保护方面也具有重要作用[1-3]，具有抗氧化应激的功能，通过降低慢性心肌梗死大鼠心肌的氧化应激水平，改善心率变异性和左心室功能；还可通过减少巨噬细胞浸润、降低炎性因子CD11b和CD11c的水平，从而达到心血管保护作用[4-7]。但有关利格列汀对糖尿病心肌病变的作用研究较少，本文进行了相关探讨。

1 材料与方法

1.12型糖尿病大鼠心肌病变模型创建 4周龄的雄性SPF大鼠60只，体质量100～120 g，由济南蓬月实验动物育种有限公司[SCXK(Lu)20140007]提供，其中20只给予基础饮食(正常对照组)，其他40只给予添加20%蔗糖和20%猪油制备的高糖、高脂饮食。8周后，高糖、高脂的大鼠中观察到胰岛素抵抗，然后腹膜内注射链脲佐菌素，40 mg/kg。72 h和7 d后测量空腹血糖，两次测量空腹血糖值≥11.6μmol/L作为糖尿病大鼠。所有动物均按照《保养和使用指南》进行处理，所有实验均已获得动物保护和使用委员会批准。

1.2指标测定 正常对照组在基础饮食的同时用生理盐水灌胃。20只糖尿病大鼠在高脂、高糖饮食的基础上用生理盐水灌胃(模型对照组)，另20只糖尿病大鼠在高脂、高糖饮食基础上用利格列汀灌胃(利格列汀组)，50 mg/kg。各组共进行2周后处死大鼠，取其心脏组织200 mg，加0.9 mL生理盐水用冰浴匀浆，1500×g离心30 min后取上清液，-80℃冻存待检。采用酶联免疫吸附法检测其中TNF-α、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量；采用Western及IP细胞裂解液提取其中蛋白，采用聚丙烯酰胺凝胶蛋白电泳检测Drp1S616表达。

2 结果

2.1SOD活性MDA及TNF-α含量 三组SOD活性、MDA和TNF-α含量比较均有统计学意义。两两比较显示：正常对照组及利格列汀组SOD活性均高于模型对照组(q=6.54，5.83；P<0.05)，MDA和TNF-α含量低于模型对照组(q=3.23～6.41，P<0.05)。正常对照组与利格列汀组之间SOD、MDA及TNF-α含量比较无统计学意义(q=0.71～2.38，P>0.05)。见表1。

表1 各组SOD、MDA及TNF-α含量的比较

2.2Drp1S616的表达 正常对照组、利格列汀组心肌组织中Drp1S616明显低于模型对照组(P<0.05)。见图1。

图1 Drp1S616的表达

3 讨论

现已证明，在心肌损伤诱发和促发阶段均有自由基参与。各种因素和促进因素通过各自的转化途径，终使自由基水平增加。MDA是自由基代谢的产物，其含量可反映机体内脂质过氧化物和自由基产生的程度。SOD是生物体内清除自由基的首要物质，可对抗与阻断自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞，其在生物体内的水平高低意味着衰老与死亡的直观指标。TNF-α是由巨噬细胞和活化T细胞分泌的具有多种生物学活性的细胞因子，在机体的炎症及免疫应答等防御机制中起着重要作用，正常情况下，TNF-α浓度较低，适量TNF-α对机体的保护反应是必需的，但过量则对机体产生损伤反应，还可以促进某些细胞过度生长。近年来的研究表明，心脏线粒体分裂融合的动态平衡状态在维持心脏线粒体正常生理状态中具有重大的作用，在心肌缺血再灌注损伤、心力衰竭、高血压、糖尿病心肌病、动脉粥样硬化等多种心血管疾病的发生发展中，线粒体分裂融合的动态平衡紊乱起了至关重要的作用。心肌损伤过程伴发着Drp1S616的大量释放，其水平的高低说明了心肌损伤的程度。本研究结果显示，利格列汀组SOD含量高于模型对照组，MDA、TNF-α及Drp1S616含量低于模型对照组；各指标水平与正常对照组持平。提示利格列汀能通过抗氧化、抑制线粒体损伤来更好地发挥保护心肌细胞的作用。

总之，利格列汀对糖尿病大鼠心肌损伤有较好的保护作用，展示其较好的应用前景。