野生红菇子实体提取液的抗运动性疲劳作用*

刘 楠

（河南中医药大学体育教研部学院，河南 郑州 450046）

红菇（Russula vinosa Lindblad）其内所含营养较高，味道非常鲜美，具备较好的滋阴、补血、清凉解毒的作用且能够食用。我国历史上很早就将红菇入药，例如变绿红菇能够发挥散内热、明目、泻肝火的效果[1]；而革质红菇、全绿红菇具备抗风湿的临床作用；一些红菇因为具备良好的抑菌活性，可以用于抗感染治疗[2]。

野生红菇的发生和植物群落之间的关联性较大，并且往往生长区域是针叶林、阔叶林及混交林，但一些红菇只会在特定树木林区生长[3]。比如，福建闽北松林区域会生长烟色红菇，而落叶林及混交林区域往往会生长红色红菇。大部分的红菇能够和其他植物共生，例如鳞盖红菇能够和冷杉、松、栗、云杉、黄杉、桦、椎、鹅耳枷等形成共生关系[4]。红菇是一种典型的外生根菌，其分布及生长情况可以体现宿主种类、基质土壤营养情况、温度、pH、水分等，这些都会对其生长及分布产生极大的影响[5]。通常来说，温带冷灰壤、红壤、山地红棕壤中有机质含量相对较高，而若是土壤具备良好的保水性及透气性，生长红菇的几率相对较高[6]。红菇生长需要偏酸性的环境，pH以4.2～6.5为宜，红菇最适宜生长温度范围是25℃～27℃，而适宜湿度范围是80%～100%，土壤含水量也应超过40%[7]。借助不同技术获得红菇子实体干品的提取液，分析红菇子提取液的抗疲劳效果。

1 材料及方法

1.1 试验材料

雄性昆明小鼠，购于郑州大学实验动物中心，4周龄，重量为19.5 g～20.0 g。红菇子实体干品，采自容县浪水乡的山岭上，红菇喜欢长在树根下。

1.2 关键试剂及仪器

1.2.1 试剂

葱酮、CHCl3、浓H2SO4、乙酸、75%乙醇、柠檬酸三钠、SOD试剂，南京建成科技有限公司生产，上述试剂的等级均为分析纯。

1.2.2 仪器及器具

小鼠游泳水池（50 cm×50 cm×40 cm）、电磁炉、电子天平（型号YP 102 N），购自上海精密科学有限公司；高速万能粉碎机，型号是FW 100型，购自天津市泰斯特仪器有限公司；石英秒表、加样器、玻璃组织匀浆器、数显电热恒温水浴锅，型号为HH-S2型双孔，购自江苏金坛市医疗仪器厂；全自动生化分析仪（借用玉林第二人民医院）、全自动细胞分析仪、L420台式低速自动平衡离心机，购自长沙湘仪离心机仪器有限公司；抗凝管（借用玉林市第二人民医院）、721型可见分光光度计，购自上海精密科学仪器厂。

1.3 试验小鼠分组与处理

以适应性培养的方式培养40只昆明小鼠，培养时间为1周，如此能够让小鼠在试验环境中适应下来。动物房中进行严格的温湿度控制，湿度及室温分别控制是43%～67%、16℃～23℃，并且根据自然规律进行照明时间的控制。在第6天把昆明雄性小鼠放在水池内，并且在小鼠的尾部绑上重量为小鼠重量5%的锡纸，让小鼠进行游泳运动，水池深度为40 cm，水温范围（25±1）℃，将游泳时长低于300 s的小鼠排除，最终结果显示4只小鼠的游泳时长低于300 s，将剩下36只小鼠分成对照组（12只）、高剂量组（12只）、低剂量组（12只）[8]。对照组采用0.5 mL蒸馏水灌胃处理，高剂量组、低剂量组采用0.5 mL相应浓度提取液的灌胃处理。灌胃频次是1次/d，灌胃时间是早上9∶00～10∶00，以常规饲料让小鼠自由进食，并且换水频次为2 d换水1次。

1.4 红菇子实体提取液的制备（水浴浸提法）

在80℃环境下进行菇体的烘干粉碎，并且根据料液比1∶20的方式，在90℃环境下进行4 h的水浴处理，以4 000 r·min-1进行15 min的离心处理，之后以提取液中的上清液进行后续操作，以水浴蒸发方式完成浓缩处理，并因此获得对应浓度的红菇子实体提取液（100 mg·kg-1、200 mg·kg-1）。

1.5 负重游泳力竭时间

对小鼠采取21 d灌胃处理，在第21天灌胃0.5 h后，每组选择小鼠6只，都依照小鼠重量的5%进行荷重处理，旨在将小鼠放置在25℃～27℃的水池中，让小鼠进行游泳运动，1个水池中同时游泳小鼠为4只。分析小鼠各自游泳的具体情况，将小鼠由入水到力竭，10 s内小鼠不浮出水池表面的时长详细记录下来，这段时间就是游泳力竭的实际时长[9]。

1.6 对运动后小鼠外周血象及血清内乳酸脱氢酶等参数的影响试验

在第21天灌胃处理0.5 h后，每组选择6只小鼠，将小鼠放置在30℃的水池内，并且让小鼠进行90 s的游泳运动。若是小鼠力竭，就可以将小白鼠眼球拔出并且进行眼部血液的采集，在较短的时间内将全血存储到收集管中，并且以离心的方式获得血清，针对相关指标进行检测。考虑到研究数据应该具备可比性，并且为了降低系统误差，借助全自动生化分析仪对乳酸脱氢酶含量水平进行检测，详细记录相关指标值，并且展开t检验。

1.7 肝糖原含量的测量

在第21天灌胃处理0.5 h后，每组选择6只小鼠，将水池温度控制在30℃，让小鼠进行90 s的游泳运动后进行眼球拔除，然后血液采集，以较短的时间内完成解剖操作，得到肝脏，以生理盐水对肝脏进行漂洗处理，并用滤纸将肝脏上的水分吸干。以万分之一天平进行肝脏的称量，精密称定1 g，并且添加TCA5%的三氯乙酸8 mL，利用玻璃组织匀浆器完成捣碎处理，随后采取3 000 r·min-1离心15 min，取上清液，以葱酮法针对肝糖原水平进行检测[10]。

1.8 统计学处理

2 结果分析

2.1 提取液对试验小鼠负重游泳力竭时长的影响

小鼠接受不同剂量红菇子实体提取液的灌胃处理后，红菇提取液对小鼠负重游泳至力竭死亡时间的影响见表1。

表1 红菇提取液对小鼠负重游泳至力竭死亡时间的影响Tab.1 Effect of Russula vinosa extract on the death time of mice from weight-bearing swimming to exhaustion

如表1所示，当低剂量组体重控制在25.34 g～34.76 g时，至小鼠游泳力竭的时间是164.21 min～213.34 min，当高剂量组体重控制在29.68 g～35.90 g时，至小鼠游泳力竭的时间是142.82 min～192.23 min，高剂量组、低剂量组都出现负重游泳时长显著提升的结果，而低剂量组及对照组间存在明显差异（P＜0.05），高剂量组和对照组间的差异不明显（P＞0.05）[11]。

2.2 提取液对试验小鼠乳酸脱氢酶及肝糖原含量的影响

小鼠接受不同剂量红菇提取液灌胃处理后，其乳酸脱氢酶及肝糖原含量水平见表2。

如表2所示，红菇提取液可使小鼠肝糖原水平得到提升，而高剂量组和对照组肝糖原含量间的差异更具有极显著差异（P＜0.01），低剂量组和对照组间的差异不存在统计学价值（P＞0.05）。高剂量组、低剂量组的小鼠乳酸脱氢酶水平都明显升高（P＜0.05）。

表2 提取液对试验小鼠乳酸脱氢酶和肝糖原含量的影响Tab.2 Effect of extract on lactate dehydrogenase and liver glycogen content in mice

3 结论

疲劳的机制非常复杂，通常是指机体生理上的功能不能始终维持在特定水平或是程度，并因此使得运动强度受到限制，生理上及心理上产生疲倦的状态，工作能力及效率也因此显著降低[12]。疲劳形成的关键性原因包括能源消耗、代谢堆积[13]。

运动耐力的强化能够显著反映抗疲劳能力的提升，游泳时长能够体现动物运动疲劳的实际情况。在红菇水提液对小鼠游泳时长的实际影响试验中，低剂量组小鼠负重游泳时长显著延长（P＜0.05），明显优于对照，但高剂量组小组的游泳时长并无明显延长（P＞0.05）。

红菇不仅是中国天然药物及中草药领域中的关键物种，也是现今分析及研制抗癌药剂的关键种[14]。红菇具备抗癌作用，并且其中含有的菌多糖与蛋白多糖，能够对抗体水平产生干预，并因此使得免疫功能得到提升[15]。

糖原含量会对运动能力产生极大影响，高剂量、低剂量组肝糖原水平都明显优于对照组（P＜0.01），这就表示红菇水提液可以由提升能量物质含量的方式，使得机体获得足够的能量，并因此发挥抗疲劳的效果。

机体在运动过程中，若是仅借助氧化的方式，能量供应达不到相应的要求。所以在无氧条件下，肌肉通过糖原酵解的方式不但能够获得能量，还能够形成乳酸，而乳酸在肌肉内若是大量堆积，就极为容易形成疲劳感，乳酸脱氢酶对乳酸代谢非常关键，在很大程度上影响糖原无氧代谢通道[16]。所以能够借助乳酸脱氢酶对抗疲劳功能性食物进行评估。肌肉内的乳酸若能在较短时间内到血液中去，并且导致血乳酸水平提升，如此肌乳酸和血乳酸水平处于平衡状态[17]。这个步骤共进行5 s～15 s的时间，而相对于对照组而言，高、低剂量组的乳酸脱氢酶水平明显较低，差异存在统计学研究价值（P＜0.05），这就表示红菇水提液可以对肌乳酸的形成发挥抑制效果，进而缓解疲劳。

针对连续性灌胃小鼠的血乳酸脱氢酶水平、浮水时长、肝糖原水平等指标进行检测后可知，红菇水提液能够使得小鼠疲劳得到缓解，具备抗疲劳效果。