上调Caprin-1对胶质瘤细胞恶性行为的影响

张 珩 阴金波 余 辉 李其平 李 想 周 政

胶质瘤是颅内最常见的恶性肿瘤，手术扩大切除结合放疗和化疗是当前的主要治疗手段[1]。由于胶质瘤存在肿瘤相关基因异质性及肿瘤易感性，目前尚无十分有效的治疗措施，因此较高的不良预后和复发使其成为颅内肿瘤的一大难题[2-3]。胶质瘤的发生是多基因、多步骤、多阶段性的演变过程，在其癌变过程中涉及到许多基因的表达异常[4]。细胞周期相关蛋白-1(cell cycle associated protein 1，Caprin-1)为一种RNA 结合蛋白(RNA-binding protein，RBP)，与肿瘤的药物耐受、增殖、迁移、转移密切相关[5-6]。Capirn-1可选择性结合多种与细胞生长、分化和迁移有关的基因，包括cyclin D2、c-MYC等，促进细胞快速进入分裂期，缩短细胞分裂间期时间，从而促进细胞生长、增殖[7-8]。肝癌衍生生长因子(hepatoma-derived growth factor，HDGF)在胶质瘤中高表达，可介导PI3K/Akt和TGF-β等相关通路的调控，从而促进细胞的增殖、侵袭和迁移[9-10]。本文具体探讨了上调Caprin-1对胶质瘤细胞恶性行为的影响，希望为阐明胶质瘤发生发展与预测预后提供一个新的思路，现总结报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

2014年2月至2019年2月选择在阆中市人民医院神经外科收治的胶质瘤患者78例的病灶组织与癌旁组织(癌组织边缘外≥2 cm组织)。纳入标准：年龄40～80岁；所有病例术前均未接受化疗、放疗及生物治疗；临床与随访资料完整；随访过程得到了患者或家属的知情同意；医院伦理委员会批准了此次研究；病理确诊为胶质瘤。排除标准：合并其它肿瘤；临床与随访资料缺乏者。

1.2 调查资料

收集患者的年龄、性别、肿瘤大小、病理类型、临床分期、局部侵袭、体重指数等参数。

1.3 免疫组化方法

严格按照所用抗体说明书进行染色，所有病理组织的染色均在同一条件下进行，用PBS代替一抗设立阴性对照。

免疫组化具体过程：病理组织常规脱蜡水化、烘片、抗原修复、阻断、加入一抗(按1∶5000稀释抗Caprin-1抗体和抗Caprin-1抗体，4 ℃冰箱过夜)、加入二抗(室温孵育30 min)、DAB显色、苏木精复染与封片，在免疫镜下观察。

Caprin-1和HDGF的表达主要位于细胞核中，以细胞核出现棕黄色或棕褐色为阳性染色。细胞染色百分率：0分：无阳性细胞，1分：1%～25%阳性细胞，2分：26%～50%阳性细胞；3分：51%～75%阳性细胞，4分：≥75%阳性细胞；细胞染色强度：0分：未染色，1分：弱染色(浅棕黄色)，2分：中等染色(棕黄色)，3分：强染色(棕褐色)。以细胞染色百分率×细胞染色强度为染色记分，强阳性(9～12分)，弱阳性(4～8分)，阴性(0～3分)，(强阳性+弱阳性)/本组例数×100.0%=阳性率。

1.4 统计学方法

应用SPSS 22.00统计软件完成数据分析，计量资料用均数±标准差表示，计数数据以样本率、阳性率示，计量资料的对比采用t检验，计数数据的对比采用四格表资料的确切概率法或χ2检验，相关性分析采用Spearman相关分析，检验水准为α=0.05，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Caprin-1和HDGF表达阳性率对比

病灶组的Capirn-1和HDGF表达阳性率为85.9%和80.8%，显著高于癌旁组的24.4%和28.2%(P<0.05)。见表1。

表1 胶质瘤患者不同组织的Capirn-1和HDGF表达阳性率对比(例，%)

2.2 Caprin-1和HDGF表达阳性率与临床特征的相关性

在78例患者中，不同性别、年龄、体重指数、病理类型胶质瘤患者的Capirn-1和HDGF表达阳性率对比差异无统计学意义(P>0.05)，而不同肿瘤大小、临床分期、是否局部侵袭胶质瘤患者的Capirn-1和HDGF表达阳性率对比差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

2.3 Caprin-1表达与HDGF表达的相关性

在78例患者中，Spearman相关分析显示Caprin-1表达与HDGF表达呈显著正相关性(γ=0.543,P=0.000)。见表3。

3 讨论

胶质瘤是我国癌症相关死亡的主要原因之一，虽然该病的治疗方法比较多，但是其预后生存率一直比较低，1年生存率不到20%，5年生存率不到10%[11]。并且部分患者首次诊断时已是局部晚期或转移性疾病，失去了根治性手术切除的机会[12-13]。胶质瘤的侵袭性比较强，其中细胞恶性增殖和肿瘤血管形成是胶质瘤发生与发展的基础，特别是胶质瘤是个血供丰富的肿瘤，为此了解胶质瘤血供发生的机制具有重要的价值[14]。

胶质瘤的发生由多重因素引起，小RNA 基因、癌基因、抑癌基因在其中起着重要的作用[15]。Capirn-1的基因位于11号染色体上，编码709个氨基酸，可促进原位癌的生长、肺部转移，其也可与其他的RBPs 结合来影响相应的靶向基因，抵抗肿瘤对放疗和化疗作用，也可诱导形成应激颗粒，从而与肿瘤的发生、发展以及药物耐受密切相关[16]。而在非小细胞肺癌中，Capirn-1通过启动β-catenin信号通路，从而促进细胞的生长和肿瘤生成作用[17]。Capirn-1通过与NF-kB p50的N端结合，进而调控NF-k p50在细胞核的聚集和转录活性，从而促进胶质瘤细胞的增殖[18]。HDGF分子量约为40 kD，有240个氨基酸残基组成，其N-末端和C-末端在促进细胞增殖分裂活动中分别发挥特殊的作用；C-末端区域在刺激DNA合成，负责调控细胞有丝分裂活动发挥重要作用；N-末端主要负责促进HDGF转录进入细胞内[19]。已有研究证实HDGF在多种肿瘤组织中表达上调，并可作为一个预后预测因素，同时HDGF的过度表达与肿瘤的复发、大小、血管和淋巴管浸润、分化程度、浸润深度、局部侵袭等显著相关[20]。本研究病灶组的Capirn-1和HDGF表达阳性率为85.9%和80.8%，显著高于癌旁组的24.4%和28.2%。不同性别、年龄、体重指数、病理类型胶质瘤患者的Capirn-1和HDGF表达阳性率对比差异无统计学意义，而不同肿瘤大小、临床分期、局部侵袭胶质瘤患者的Capirn-1和HDGF表达阳性率对比差异有统计学意义。当前也有研究显示Capirn-1可选择性结合c-Myc，并参与p21、Ras 信号通路，可加速细胞进入S期，促进细胞增殖[21]。

胶质瘤是指起源于神经上皮组织来源的肿瘤，虽然该病的治疗方法比较多，但是胶质瘤患者复发率和死亡率依然比较高，而基因靶向治疗可能是治疗胶质瘤的一种行之有效的方法[22-23]。本研究Spearman相关分析显示胶质瘤患者的Caprin-1表达与HDGF表达呈显著正相关性(γ=0.543,P=0.000)。当前也有研究显示在体外或体内过量表达Caprin-1 能促进肿瘤细胞生长和侵袭能力，有助于肿瘤在缺氧的微环境中生存和增殖[24-25]。本研究也存在一定的不足，没有从细胞与实验动物模型水平分析Capirn-1与HDGF相互作用，将在后续研究中进行分析。

表3 胶质瘤患者Caprin-1表达与HDGF表达的相关性/例

总之，Caprin-1在胶质瘤组织中呈现高表达状况，也可影响HDGF的表达，与胶质瘤细胞的恶性行为显著相关。