杏鲍菇多糖的抗疲劳活性研究*

陈津津，冯嘉诚

（天津理工大学，天津 300384）

杏鲍菇（Pleurotus eryngii）又名刺芹侧耳，富含多种营养成分，在食用菌中占据重要地位[1]。杏鲍菇干品富含蛋白质，含量超过21%，灰分含量超过7%，游离氨基酸和甘露醇含量均超过2%，杏鲍菇菌丝体和子实体富含维生素C；此外，杏鲍菇富含多种矿物质，其中包括钙、锌、铜、镁等[2]；同时，杏鲍菇具备一定的药用价值，有养胃润肠、抗癌、增强免疫力、降血脂的功效，经常食用还可以起到美容护肤的作用。杏鲍菇多糖，简称PEP，其主要功效包括抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、抑菌、增强免疫力、清除自由基等[4]。杏鲍菇多糖在磺化之后抗氧化和抑菌的功效均有大幅度提升，抑菌效果最明显的是作用于金黄色葡萄球菌CMCC26003和大肠杆菌ATCC25922[5]。杏鲍菇含有一种新型蛋白质，有明显的抗癌效果[6]。通过对杏鲍菇多糖的抗疲劳效果进行研究，以期为杏鲍菇多糖的利用提供基础数据。

1 材料准备和试验过程

1.1 试验动物

准备24只性别为雄性且身体健康的CL级KM种小鼠，小鼠体重约为20 g；统一安排进行动物室喂养，室内温度保持在24℃左右，相对湿度不得低于45%，不高于65%，按照规定时间喂水和食物，喂养1周之后便可投入试验使用[7]。

1.2 试剂

研究需要的试剂主要有5%三氯乙酸、95%乙醇溶液、葡萄糖（分析纯）、硫酸（分析纯）、硫脲（分析纯）、蒽酮（分析纯） 以及生理盐水。蒽酮试剂配制选用72%浓硫酸，蒽酮的掺入比例为0.05%，硫脲的掺入比例为1%，将配制好的蒽酮试剂放入冰箱冷藏。

1.3 杏鲍菇多糖

选用吉林省图们市石观镇延边深山源生物技术有限公司生产的新鲜杏鲍菇4 kg，用切片机切成厚度适中的片状，杏鲍菇和70%乙醇溶液体积按照1∶20的比例放入真空浓缩煎药机中煎3 h，倒取液体经过浓缩处理之后保留2 000 mL过滤；过滤好的液体加入95%乙醇溶液，再次过滤留取滤渣加入蒸馏水1 000 mL，提取上层液体与乙醇混合；沉淀物烘干之后研末，按照不同的浓度要求加入适量蒸馏水混匀。

1.4 试验过程

将小鼠分为对照组和给药组，其中给药组按照杏鲍菇多糖的给药剂量分为高剂量、中剂量、低剂量3个组，每组随机分6只小鼠。为给药组的3组小鼠分别灌入剂量为 10 mg·kg-1d-1、20 mg·kg-1d-1、50 mg·kg-1d-1杏鲍菇多糖，而对照组的小鼠只需灌入同等剂量的蒸馏水，连续灌喂1周，以此来研究杏鲍菇多糖的抗疲劳功效。

最后1次给小鼠灌胃之后的30 min，测定小鼠的爬杆时间，记录小鼠在爬杆上持续的时长，记录3次之后的累计时长就是爬杆时间。

最后1次给小鼠灌胃之后30 min，将小鼠放入规格为 0.9 m × 0.45 m × 0.45 m 的游泳箱内，深度0.35 m，水温25℃左右。每只小鼠尾部都捆绑其体重5%的铅皮在游泳箱内自由泳。小鼠从进入游泳箱内直至死亡的这段时间就是小鼠的力竭性游泳时间。

在试验过程中小鼠体重测量时间间隔3 d，共测量3次，对照组和给药组的小鼠经过解剖测定各脏器重量，计算脏器与体重的比值，也就是脏器系数。

通过蒽酮法绘制葡萄糖标准曲线，配制6种不同浓度的标准葡萄糖溶液，浓度从 0～2.5 mg·mL-1，每种浓度相差0.5 mg·mL-1，体积均为100 mL，取不同浓度的标准葡糖糖溶液2 mL与蒽酮试剂10 mL共置试管中，放入沸水中15 min，冷却后放置在波长为620 nm的可见光下测定吸光度。

小鼠力竭性游泳时间测定后将其解剖，取肝脏和后肢肌肉放入生理盐水清洗之后用滤纸吸干水分；称取100 mg肝脏和后肢肌肉加入8 mL的5%三氯乙酸研磨成糊状。将上清液和4 mL的95%乙醇溶液混合，放置一夜之后沉淀出多糖，3 000 r·min-1离心15 min；去除上清液，10 min后在糖原中加入蒸馏水2 mL，溶解后的糖原加入试管中，在另一试管中加入等量蒸馏水，每个试管中加入蒽酮试剂10 mL，放入沸水中15 min，在波长为620 nm的可见光下测定吸光度。通过吸光度用标准方程式计算肝糖原和肌糖原含量 （P，mg·100-1g-1）[8]，其公式为：

式中：OD表示试管吸光度；2表示试管内蒸馏水体积（mL）；V表示试管内液体体积（mL）；m表示肝脏和后肢肌肉组织的重量（g）；0.9表示葡萄糖和糖原转换系数。

1.5 统计方法

试验中的数据结果统计可以采用SPSS 16.0软件分析。

2 试验结果分析

2.1 小鼠脏器系数的试验结果分析

杏鲍菇多糖对小鼠脏器系数的影响见表1。

表1 杏鲍菇多糖对小鼠脏器系数的影响Tab.1 Effect of Pleurotus eryngii polysaccharide on the organ coefficient of mice

从表1结果可以看出，对照组和给药组的小鼠脏器系数并无明显差异；说明在一定时间段内适量的杏鲍菇多糖不会影响小鼠的脏器系数，也就是说定时定量的杏鲍菇多糖不会损伤小鼠脏器[9]。

2.2 小鼠爬杆时间试验结果

杏鲍菇多糖对小鼠爬杆时间的影响见表2。

表2 杏鲍菇多糖对小鼠爬杆时间的影响Tab.2 Effect of Pleurotus eryngii polysaccharide on rod climbing time in mice

从表2可以看出，对比对照组，杏鲍菇多糖高剂量、中剂量、低剂量3组给药组小鼠爬杆时间均更长，高剂量组比中、低剂量组小鼠爬杆时间又更长，且差异显著。这也就表明，杏鲍菇多糖摄入量越多，小鼠的爬杆时间越长。说明杏鲍菇多糖对小鼠运动有促进作用。

2.3 小鼠力竭性游泳时间试验结果

杏鲍菇多糖对小鼠游泳时间的影响见表3。

表3 杏鲍菇多糖对小鼠游泳时间的影响Tab.3 Effect of Pleurotus eryngii polysaccharide on useful time in mice

从表3可以看出，与对照组相比，3组给药组小鼠力歇性游泳时间更长，而高剂量组比中剂量、低剂量组小鼠力歇性游泳时间又更长，且差异显著。

2.4 小鼠肝糖原储备量试验结果分析

杏鲍菇多糖对小鼠肝糖原储备量的影响见表4。

表4 杏鲍菇多糖对小鼠肝糖原储备量的影响Tab.4 Effect of Pleurotus eryngii polysaccharide on liver glycogen reserve in mice

从表4可以看出，与对照组相比，3组给药组肝糖原储量都要高，高剂量组比中剂量、低剂量组小鼠肝糖原储量更高，且差异显著。

2.5 小鼠肌糖原储备量试验结果

对比对照组，3组给药组小鼠肌糖原储量更高，高剂量组比中剂量组、低剂量组小鼠肌糖原储量更高，且差异显著。这也就表明，杏鲍菇多糖摄入量越多，小鼠的肌糖原储量越高，杏鲍菇多糖为小鼠运动提供了一定能量。

3 讨论

运动耐力是通过爬杆时间和力歇性游泳时间测定，时间越长说明运动耐力越强。此次实验对比了对照组和给药组的小鼠爬杆时间和力歇性游泳时间，结果发现给药组小鼠爬杆时间和力歇性游泳时间更长，尤其是给药组中高剂量组的小鼠爬杆时间和力歇性游泳时间明显高于其他组，也就表明杏鲍菇多糖有利于小鼠运动耐力的增强。肌肉活动主要依靠糖类供给能量，血糖、肝/肌糖原是人体主要糖类。血糖可以直接为人体提供能量，人体长时间剧烈运动会消耗大量血糖，影响中枢神经为人体提供能量，因此人体会感觉疲劳[10]。血糖不足的情况下，肝糖原和肌糖原分解之后会通过血液继续为人体输送能量，如果人体继续保持高强度运动状态，肝糖原和肌糖原不足无法继续为肌肉提供能量，人体会因血糖不足感觉疲劳，所以运动耐力的强弱也是由肝糖原和肌糖原含量决定的。此次试验将对照组和给药组的小鼠力歇性游泳后肝糖原和肌糖原含量做对比，结果显示，给药组比对照组的小鼠肝糖原和肌糖原储量更高，高剂量组比效果更明显，且差异显著。杏鲍菇多糖摄入量越多，小鼠的肝糖原和肌糖原储量越高，这也就说明了杏鲍菇多糖具备抗疲劳的作用。