野生何首乌组织培养研究

农艳丰 韦宗雪 李健

摘 要：选用广西百色当地野生何首乌为试验材料，以茎段为外植体，探究其最适宜的组织培养方案。结果表明：75%乙醇30s配合0.1%HgCl2消毒12min，可明显控制外植体的污染率，是茎段分段灭菌中最适宜的方案;初代培养中，诱导腋芽选择MS+6-BA 2.0mg/L+KT 1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L培养基进行培养，诱导率、总芽数及平均芽高均最高;无菌芽增殖时，添加50mL/L的椰汁配合6-BA 2.0mg/L，可得到最好的增殖率和芽数;生根培养以1/2MS+NAA 0.2mg/L+IBA 0.1mg/L为最适宜生根配方;高山土是野生何首乌组培苗适宜的移栽基质。

关键词：何首乌;组织培养;茎段

Abstract： In this study， the local wild Polygonum multiflorum in Guangxi was used as the research material， and the stems were used as explants to explore its most suitable tissue culture technology. The results showed that： 75% ethanol 30s with 0.1% HgCl2 disinfection for 12min could significantly control the contamination rate of explants， which was the most suitable scheme for segmental sterilization of stem segments; the selection of axillary buds in primary culture with MS+6-BA2.0mg/L+KT1.0mg/L+sucrose30g/L+agar 7g/L medium，which made the highest induction rate， total bud number and average bud height; 6-BA 2.0mg/L was added during sterile bud proliferation，The best growth rate and number of shoots were obtained with coconut milk 50mL/L; rooting culture with 1/2MS+NAA 0.2mg/L+IBA 0.1 mg/L was the most suitable rooting formula. The alpine soil was a suitable transplanting substrate for the wild Polygonum multiflorum tissue culture seedlings.

Key words： Polygonum multiforum; Tissue culture; Stem

何首烏（Polygonum multiforum Thunb.），又名首乌、夜交藤等，属蓼科多年生缠绕藤本植物。何首乌块根是我国传统大宗中药材，含有蒽醌类化合物、二苯乙烯苷类等多种成分，以及人体必需的多种氨基酸、微量元素。国内外医学研究[1-4]发现，何首乌具有降低血脂、提高血液循环等多种功效，对促进消化系统的代谢功能、调节内分泌肠道平衡有较大的益处[5-6]。梅雪[7]、王子璐[8]等研究表明，何首乌具有与肾上腺皮质激素具有同等作用的化学成分，可减少机体对脂质的吸收，抑制胆汁酸的合成，促进胆汁的下泄作用。何首乌可提高人体造血能力[9-10]。除此之外，何首乌的多糖成分对免疫功能的调节也有较好的效果[11-12]。

随着社会的快速发展，人们对补药的需求越发重视。由于何首乌具有延缓衰老、治疗脱发、白发、促进心脑血管的血液循环等多种突出效果，使得人们对何首乌的需求日益增多。国内外市场的巨大需求，导致野生何首乌乱挖滥采的现象越来越多，野生资源日渐枯竭，产量降低，引起市场的供求关系紧张，使得何首乌逐渐成为市场的紧俏货。何首乌以传统的种子、块根、扦插繁殖为主要栽培模式，而组织培养技术的应用推广范围依旧很窄，年供比达不到市场的需求量。张宗珍[13]、曾文丹[14]等研究表明，改变何首乌传统栽培方式具有必要性和紧迫性。当前，何首乌组织培养技术在我国的研究应用仍较少，曾文丹等[15]选用栽培何首乌嫩茎进行快繁技术探究，筛选出芽体灭菌的最佳时间8min，不定芽增殖激素选择是TDZ和NAA配合;袁红霞等[16]对块根诱导愈伤组织进行研究，得出块根消毒搭配是70%乙醇+0.1%升汞;MS+2，4-D2.0mg/L+6-BA0.5mg/L为最适诱导培养基。

本研究在前人研究的基础上，以野生何首乌茎段为外植体，探究不同因子对其组织培养的影响，为进行大规模种植，加快工业化生产，增加种苗来源提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料 本试验选用广西百色野生的何首乌，茎段均在试验时采摘的新鲜材料，藤蔓和叶片均无病害，符合试验选材要求。

1.2 试验方法

1.2.1 预处理及灭菌 选择健康无病害、病斑的野生何首乌枝条，流水冲洗干净，用手术剪将枝条剪成带腋芽的茎段。茎段分成3个部分，芽尖最上部分3～5个节间点为顶端部分、依次中部、下部，倒入洗衣粉溶液浸泡10min，流水冲洗15min，备用。在超净工作台上使用0.1%升汞配合75%乙醇对外植体灭菌，设置升汞灭菌时间6～12min。每个处理分别接种40管，每管接种1个，7d后观察统计茎段污染率。

1.2.2 茎段初代培养 选择MS为基本培养基，固定KT浓度、添加不同浓度6-BA激素探究诱导腋芽的效果。每处理分别接种40管，每管接种1个，30d后统计诱导率和出芽数。

参考文献

[1]俞捷，林佩，陆建美.何首乌活性成分二苯乙烯苷对肝细胞脂质合成分解及转运的调节作用研究[J].中国药学杂志，2014，49（23）：2077-2082.

[2]赵雨晴.何首乌的本草考证研究[J].哈尔滨医药，2019，39（02）：190-191.

[3]王娅，闫丽娜，孙甜甜，等.何首乌多糖的结构表征及其免疫调节活性研究[J].中草药，2019，50（10）：2290-2295.

[4]李敏，敬小莉，谈文林.何首乌中二苯乙烯苷类物质的分离纯化及抗氧化活性研究[J].生物化工，2019，5（02）：17-22.

[5]王浩，杨健，周良云，等.何首乌化学成分与药理作用研究进展[J].中国实验方剂学杂志，2019，25（13）：192-205.

[6]毕倩.基于肠道微生态调节的制何首乌干预胰岛素抵抗作用及机制研究[D].昆明：云南中医学院，2018.

[7]梅雪，余刘勤，陈小云，等.何首乌化学成分和药理作用的研究进展[J].药物评价研究，2016，39（1）：122-131.

[8]王子璐.制何首乌活性成分体内外代谢性质研究[D].北京：中国人民解放军军事科学院，2016.

[9]覃瑶，黄畅，林圣云.中药治疗再生障碍性贫血作用机制研究进展[J].浙江中西医结合杂志，2016，26（10）：970-973.

[10]田晨，张新雪，张丰丰.补肾益髓生血法再障大鼠含药血清对大鼠造血祖细胞增殖分化及其机制的影响[J].世界科学技术：中医药现代化，2014（5）：1076-1082.

[11]李艳菊.基于中药信息学对三种中药免疫调节作用的实验研究[J].辽宁中医杂志，2007，361（06）：834-835.

[12]张庆.何首乌多糖分离鉴定与免疫调节活性研究[D].重庆：重庆大学，2017.

[13]张宗珍，张友忠，马爱华.何首乌人工栽培技术[J].安徽农业，2001（03）：31-31.

[14]曾文丹，陆柳英，谢向誉.何首乌繁殖技术研究进展[J].中国热带农业，2016（03）：66-68.

[15]曾文丹，严华兵，曹升，等.何首乌离体快繁技术体系的建立[J].南方农业学报，2018，49（12）：2494-2499.

[16]袁红霞，王金虎，陈德燕.传统中药何首乌组織培养的初步研究[J].中国野生植物资源，2006，25（3）：56-58.

（责编：张宏民）