离子色谱法测定富马酸贝达喹啉中二甲胺的含量

马平平,周君安,孙 琳

(江苏豪森药业集团有限公司 江苏 连云港 222000)

富马酸贝达喹啉(Bedaquiline fumarate)由美国Jhonson&Jhonson 公司开发，可通过抑制ATP合成酶，来抑制结核分枝杆菌。该药与2013年获得美国FDA批准，用于治疗对多种药物耐药的成人结核患者[1-4]。根据ICH指导原则及中国药典四部通则相关指导原则要求[5]，本实验建立了富马酸贝达喹啉中二甲胺含量的检测方法。

1 仪器与试剂

仪器：电子分析天平，梅特勒XS105；Thermo 公司DIONEX ICS-2100离子色谱仪，Thermo 公司CHROMELEON 6.8工作站；色谱柱：Dionex IonPac CS12A 4×250mm。试剂：甲磺酸为色谱纯，来自MERCK公司；盐酸二甲胺均为分析纯，来自国药集团化学试剂有限公司；水来源于杭州娃哈哈有限公司。

2 试验过程与结论

2.1 色谱条件

照离子色谱法(中国药典2015年版)测定，用阳离子交换色谱柱(Dionex IonPac CS12A 4×250mm或柱效类似的色谱柱)和保护柱(Dionex IonPac CG12A 4×50mm或适合色谱柱的保护柱)；以10mmol/L甲磺酸溶液为流动相，流速为1.0mL/min；柱温为30℃；检测器为电导检测器，检测方式为抑制电导检测，检测器温度为35℃。理论板数按二甲胺峰计算不得低于3000。

2.2 试验溶液配制

取本品约120mg，精密称定，置20mL量瓶中，加水适量超声5分钟后稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，作为供试品溶液；另取盐酸二甲胺约55mg，精密称定，置100mL量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1mL置100mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.3 系统适用性试验

量取对照品溶液25μL ，注入离子色谱仪，记录图谱。从实验图谱看出，理论板数按二甲胺峰计算不低于3000。

2.4 线性关系试验

精密称取盐酸二甲胺18.09mg(约相当于二甲胺10mg)，置100mL量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取此溶液0.1,1.0,2.0,3.0,5.0,10.0mL至100mL量瓶中，用稀释溶液稀释制成每1mL中分别含二甲胺0.1,1.0,2.0,3.0,5.0,10.0μg的溶液，精密量取上述溶液各25μL注入液相色谱仪中，记录色谱图，量取峰面积 。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，线性回归方程为：A=0.1427C - 0.0016，相关系数r=1.0000，说明二甲胺在0.10～9.99μg/mL范围内线性良好。

2.5 检测限与定量限

在本试验条件下，配制不同浓度的二甲胺对照品，检测限以S/N≥3计，定量限以S/N≥10计，分别进样确定二甲胺的检测限和定量限，实验结果见表1。

表1 二甲胺的检测限和定量限

2.6 系统精密度

取“2.7含量测定精密度”项下第六份溶液，连续6针进样试验结果见表2。

表2 系统精密度试验结果

由结果可见，重复6次测定的平均峰面积为0.3736，RSD=0.43%，表明该方法进样精密度很好。

2.7 含量测定精密度

取本品约120mg，精密称定，置20mL量瓶中，加水适量超声5min后稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，作为供试品溶液，平行六份；另精密称取盐酸二甲胺适量，用水溶解并定量稀释制成每1mL含二甲胺约3μg的溶液，作为对照品溶液。按上述色谱条件，连续六针进样对照品溶液，记录色谱图，计算峰面积的相对标准偏差RSD。连续6针进样试验结果见表3。

表3 含量测定精密度试验结果

六份测定的平均值为0.0002%，RSD=0.00002(n=6)，表明该测定含量的方法在本色谱条件下精密度很好

2.8 回收率

精密称取盐酸二甲胺54.19mg置100mL量瓶中，用水溶解稀释至刻度，摇匀，精密量取4.0mL至100mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为二甲胺含量母液备用。

以二甲胺含量限度(0.05%)的浓度为基准100%，分别精密量取上述母液1.0 ，2.5，5.0mL和7.5mL，置含基质样品的20mL量瓶中，加水适量超声5分钟后稀释至刻度，摇匀，过滤，分别配制成限度为20%,50%,100%和150%的溶液各三份，作为供试品溶液。另精密称取盐酸二甲胺适量，用水溶解并定量稀释制成每1mL含二甲胺约3μg的溶液，平行两份，作为二甲胺含量对照品溶液，样品配制过程见表3.2.S.4.3.4-7分别精密量取上述溶液各25L注入离子色谱仪，记录色谱图，测量峰面积，采用外标法计算回收率(其中供试品需要扣除样品基质中相对应的二甲胺含量)计算回收量和回收率。平均回收率为99.6%，RSD为2.3%(n=12)，说明本分析方法检测富马酸贝达喹啉中杂质二甲胺含量准确、可靠。

3 讨论

用离子色谱法测定富马酸贝达喹啉中二甲胺的含量专属性良好；对线性关系、系统精密度、回收率进行测定，发现本方法均能满足上述实验的要求，对富马酸贝达喹啉中二甲胺的含量进行准确定量，能满足对富马酸贝达喹啉中二甲胺的含量的控制。