脑卒中患者MTGFR及MTRR基因多态性与Hcy水平的相关性分析

徐红强 王艳玲 王 锐

新乡市第一人民医院 新乡医学院第五临床学院，河南 新乡 453000

脑卒中是脑血管突发破裂或阻塞引起的脑组织损伤，具有很高的致残率和致死率[1-2]。脑卒中发生与发展受遗传基因、高血压、高血脂等多种危险因素的影响，其中高同型半胱氨酸(Hcy)血症为脑卒中的独立危险因素。亚甲基四氢叶酸还原酶(MTGFR)、蛋氨酸合成酶还原酶(MTRR)能够介导叶酸代谢过程，MTGFR基因677和1298位、MTRR基因66位是最常见的突变位点[3]。研究发现，MTGFR及MTRR基因不同位点突变均会提升血清Hcy水平，但上述基因突变是否与脑卒中发生有关仍未完全阐明。亦有研究显示，不同地区、不同民族的MTGFR基因677和1298位点基因型分布存在差异[4]。本研究分析新乡市第一人民医院神经内科收治的脑卒中患者MTGFR及MTRR基因多态性特点及与血清Hcy水平的关系，旨在为本地区脑卒中患者的防治提供参考。

1 对象与方法

1．1研究对象选取2018-03—2019-06新乡市第一人民医院神经内科收治的脑卒中患者184例为脑卒中组。入选标准：符合中华医学会2016年颁布的中国脑血管诊治指南与共识中的脑卒中诊断标准，并经影像学检查确诊。排除标准：合并血液系统疾病、动脉瘤、恶性肿瘤的患者。其中男98例，女86例；年龄52～80(64.28±9.41)岁；脑卒中病程<7 d，合并高血压144例，糖尿病76例，高脂血症94例。收集同期体检的健康志愿者280例为对照组，男151例，女129例；年龄50～76(63.51±8.63)岁。2组患者性别、年龄间差异无统计学意义(P>0.05)。具有可比性。

1．2方法

1．2．1 MTGFR及MTRR基因多态性检测：采集2组口腔黏膜上皮脱落细胞，使用DNA提取试剂盒(吸附柱法)提取基因组DNA，试剂盒购于上海伯易生物科技有限公司。PCR反应体系共10 μL：浓度为20 ng/μL的基因组DNA 1 μL，ABI TaqMan Universal 预混液5 μL，0.5 μL MGB探针，3.5 μL去离子水。反应条件：95 ℃ 10 min，92 ℃ 20 s，60 ℃ 2 min，共40个循环。使用QuantStudioTMDx实时荧光定量PCR仪读取PCR扩增产物的终点荧光，通过系统自带的软件进行SNP分型，包括：MTGFR基因677位点的野生型(CC)、突变型(TT)、杂合型(CT)；MTGFR基因1298位点的野生型(AA)、突变型(CC)、杂合型(AC)；MTRR基因66位点的野生型(AA)、突变型(GG)、杂合型(AG)。

1．2．2 血清Hcy水平检测：抽取2组空腹外周静脉血3 mL，1 h内上离心机，3 000 r/min离心10 min，收集血清，酶联免疫吸附法测定血清Hcy水平，试剂盒购于上海仁捷生物科技有限公司，操作严格按说明书进行。当Hcy>15 μmol/L时为高同型半胱氨酸血症。

2 结果

2．1 2组患者MTGFR基因677位点多态性分析脑卒中组与对照组MTGFR基因677位点等位基因分布情况间差异有统计学意义(P<0.05)，脑卒中组TT型比例明显上升，CC型比例明显下降。脑卒中组等位基因T的频率明显高于对照组，差异无统计学意义(P<0.05)。见表1。

2．2 2组患者MTGFR基因1298位点多态性分析脑卒中组与对照组MTGFR基因1298位点等位基因分布情况间差异无统计学意义(P>0.05)；等位基因频率在脑卒中组与对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

2．3 2组患者MTRR基因66位点多态性分析脑卒中组与对照组MTRR基因66位点等位基因分布情况间差异有统计学意义(P<0.05)，脑卒中组GG型比例明显上升，AG型比例明显下降。等位基因频率在脑卒中组与对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

2．4 MTGFR及MTRR各位点不同基因型患者血清Hcy水平比较MTGFR基因677位点基因型CC、TT、CT患者的血清Hcy水平间差异有统计学意义(P<0.01)，其中基因型TT患者的Hcy水平明显高于CC型和CT型患者。MTRR基因66位点基因型AA、AG、GG患者的血清Hcy水平间差异有统计学意义(P<0.05)，其中基因型GG患者的Hcy水平明显高于AA型和AG型患者。MTGFR基因1298位点不同基因型患者的血清Hcy水平间差异无统计学意义(P>0.05)。见表4。

表1 2组患者MTGFR基因677位点多态性分析 [n(%)]Table 1 Polymorphism analysis of MTGFR gene locus 677 in the two groups [n(%)]

表2 2组患者MTGFR基因1298位点多态性分析 [n(%)]Table 2 Polymorphism analysis of MTGFR gene 1298 in the two groups [n(%)]

表3 2组患者MTRR基因66位点多态性分析 [n(%)]Table 3 Polymorphism analysis of MTRR gene 66 in the two groups [n(%)]

表4 MTGFR及MTRR各位点不同基因型患者血清 Hcy水平比较Table 4 Comparison of serum Hcy levels in MTGFR and MTRR patients with different

3 讨论

人类编码MTGFR基因定位于染色体1p36.3，存在多种突变类型，能够降低酶的活性[5-8]。MTGFR基因的主要功能是将5，10-亚甲基四氢叶酸转化为有活性的5甲基四氢叶酸，当发生基因突变时会造成Hcy复甲基化障碍，提升血清Hcy浓度，引发多种疾病[9-10]。MTGFR基因多态性与脑卒中的相关性是目前研究热点之一，但已有研究报道的结论存在差异。部分研究认为，MTGFR基因在脑卒中发生、发展中具有重要作用[11-13]；但有研究显示，MTGFR基因突变与脑卒中的发生无明显关联[14-19]。本研究显示，脑卒中组MTGFR基因677位点的TT基因型比例明显高于对照组，CC基因型比例明显低于对照组，且等位基因T的频率明显高于对照组。提示MTGFR基因677位点基因突变会提升脑卒中的发生风险，其中主要表现为等位基因T频率升高。脑卒中患者MTGFR基因677位点的TT基因型的血清Hcy水平明显高于CC基因型和CT基因型，提示MTGFR基因677位点基因突变能够降低亚甲基四氢叶酸还原酶活性，提升血清Hcy水平，且为脑卒中发生的危险因素。但MTGFR基因 1298位点的各基因型与脑卒中及血清Hcy水平之间无明显关联。

MTRR能够催化无活性的蛋氨酸合成酶转化为有活性的酶，在蛋氨酸代谢中发挥重要作用[20-23]。MTRR基因突变是导致酶活性降低或丧失的主要原因，以66位点突变最为常见，会提升血浆Hcy水平[24-26]。本研究显示，脑卒中组MTRR基因66位点的GG基因型比例明显高于对照组，AG基因型比例明显低于对照组，提示MTRR基因66位点GG基因型会提升脑卒中的发生风险。同时MTRR基因66位点GG基因型患者的Hcy水平明显高于AA基因型和AG基因型患者，说明MTRR基因66位点突变能够提升血清Hcy水平。相关研究显示，外周血Hcy水平升高会影响凝血系统，促进血小板活化，是缺血性脑卒中发病的独立危险因素[27-28]。结合本研究结论可推测MTRR基因66位点基因突变以及MTGFR基因677位点基因突变能够通过提升外周血Hcy水平促进脑卒中的发生与发展。但考虑到本研究样本量较少，可能存在实验偏差，今后研究中仍需进一步扩大样本量来明确MTGFR基因和MTRR基因与高Hcy水平和脑卒中的关系。