右美托咪定在大鼠蛛网膜下腔出血后对海马神经元炎性细胞因子的影响

梁兆俊，冯娅妮，石 强

(中国医科大学附属第一医院，1.麻醉科，2.神经外科, 辽宁 沈阳 110001)

右美托咪定(dexmedetomidine，Dex)是一种高选择性的α2肾上腺素能受体激动剂，具有镇静、镇痛、抑制交感、抗焦虑、抑制呼吸轻、减轻炎症反应等作用。目前关于Dex抗炎作用成为研究热点之一。Jiang等[1]就关于Dex对脑缺血损伤的保护作用做了一个Meta分析发现其可以减轻炎性介质的释放。近期发现，Dex通过TLR4/NF-κB 途径降低 NOD 样受体NLRP3(NOD-like receptor protein 3， NLRP3) 以及炎症因子的表达，对大鼠急性胰腺炎起到保护作用[2]。本研究拟探讨Dex对蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage，SAH)后的保护作用及对海马神经元的炎症反应的影响。

1 材料与方法

1.1 试剂、仪器及分组

1.1.1试剂 盐酸右美托咪定(中国江苏恒瑞医药股份有限公司，180130BP)，兔抗鼠NLRP3(美国NOVUS公司，MAB7578-SP)，兔抗鼠IL-1β(ab205924)、兔抗鼠IL-18(ab191860)(均购自美国Abcam公司)。

1.1.2仪器 电泳仪电源(DYY-6C,中国北京市六一仪器厂)，发光仪成像系统(ChemiDoc MP ,美国Bio-Rad公司)。

1.1.3分组 ♂ SD大鼠45只，体质量(280～320) g，由中国医科大学实验动物中心提供。随机分3组：假手术+生理盐水(Sham+saline)组、蛛网膜下腔出血+右美托咪定(SAH+Dex)组和蛛网膜下腔出血+生理盐水(SAH+saline)组。行神经功能、SAH评分、脑水含量及Western blot检测。

1.2 SAH大鼠模型建立采用枕大池二次注血法[3]制作SAH大鼠模型。

1.3 评价指标采用 Garcia神经功能评价标准评估大鼠神经功能[4]； 黄巍[5]SAH评分方法对大鼠进行SAH评分；脑组织含水量/%=(湿重-干重)/湿重×100%[6]；Western blot检测大鼠海马组织中NLRP3、IL-1β、IL-18蛋白的表达[5]。

2 结果

2.1 神经功能和SAH评分比较神经功能评分：SAH+Dex、Sham+saline与SAH+saline组比较行为学明显改变，推测腹腔注射25 μg·kg-1的Dex后改善大鼠的神经功能，差异有统计学意义(P<0.05);SAH评分：SAH+Dex组与SAH+saline组比较没有差异，无统计学意义(P>0.05)。见Tab 1。

Tab 1 Comparison of Neurological score and SAH score in the 3

*P<0.05vsSham+saline group;#P<0.05vsSAH+Dex group

2.2 大鼠脑组织含水量比较Sham+saline、SAH+Dex和SAH+saline组脑组织含水量分别为(47.29±2.39)%、(48.28±3.96)%、(82.55±1.99)%。可以看出Dex能明显减少大鼠蛛网膜下腔出血后脑水含量，缓解脑水肿。

2.3 大鼠海马神经元中NLRP3、IL-1β和IL-18蛋白表达水平比较SAH+Dex组与SAH+saline组比较，炎性细胞因子明显减少，差异有统计学意义(P<0.05)，见Tab 2。

Tab 2 Comparison of NLRP3, IL-1β and IL-18 aftersubarachnoid hemorrhage in the 3

*P<0.05vsSham+saline group;#P<0.05vsSAH+Dex group

3 讨论

Dex主要作用于蓝斑核 α2受体，产生镇静作用，成为临床中常用的药物。基础研究中Dex通过减轻炎症反应减轻脑损伤[7]。肝再生中，腹腔注射25 μg·kg-1的Dex可有效抑制TLR4/NF-κB信号通路中NLRP3炎性小体的活化,从而进一步减少炎性细胞因子IL-1β和IL-18[8-9]，虽然这个剂量高于人的用量(1 μg·kg-1)，但对大鼠起到良好的镇静效果。本实验通过腹腔注射Dex(25 μg·kg-1)可以有效减少炎性因子的表达，并能改善大鼠神经功能以及缓解脑水肿。

SAH后的患者在早期脑损伤期间干预治疗成为一个主要目标，早期治疗能有效降低患者的死亡率和对海马神经元的损害[10]。大多数学者关注的是自噬、细胞凋亡等，并无NLRP3的相关报道，而我们的实验正好弥补了空缺。但是我们只是验证了炎性体对海马神经元的损伤，并未进一步研究细胞凋亡及对以后认知功能的影响。

Dex可以改善SAH早期脑损伤对海马神经元的损害，降低脑水肿，并能降低海马神经元中炎性体的表达。本实验为Dex的抗炎作用提供了依据，为以后临床研究提供良好的理论基础，为临床应用提供了一定的经验。