不同采收期对绞股蓝抗氧化活性的影响研究

◎王珊 许海燕 侯敏娜 刘艳红 王青

绞股蓝为葫芦科绞股蓝属植物绞股蓝（Gynostemma pentaphyllum（Thumb。）Makino 的干燥全草，又名五叶参、七叶参，有“南方人参”和“第二人参”的美誉，是一种新的药食两用植物资源。绞股蓝具有清热解毒、化痰止咳、益气健脾、养阴生津、养心安神等功效。绞股蓝的主要活性成分为皂苷类、黄酮类、多糖、氨基酸和微量元素等成分类。研究发现，绞股蓝皂苷是主要活性成分之一，具有保护心脑血管、抗肿瘤、增强免疫、降血糖、调血脂、保肝、抗氧化、抗溃疡以及抗衰老等多种活性。现代研究发现绞股蓝具有较好的抗氧化活性，广泛的应用于保健食品和化妆品，因此比较评价不同采收期的绞股蓝抗氧化活性强弱对于后期扩大绞股蓝的开发性研究具有重要的意义。

一、材料

T6-新世纪紫外分光光度计（北京普析通用股份有限公司）；十万分之一电子天平（METTLER-XP-205，深圳市盛美仪器有限公司）。

DPPH（1，1-二苯基-2-三硝基苯肼，购于：日本东京化成工业株式社会）；ABTS（2，2'氨基-二（3-乙基-苯并噻唑啉磺酸-6）铵盐购于：日本东京化成工业株式社会）；TPTZ（2，4，6– 三吡–啶基 1，3，5-三嗪购于：日本东京化成工业株式社会）。

绞股蓝样品均为2019 年从道地产区直接收集，经陕西国际商贸学院雷国莲教授鉴定为为葫芦科绞股蓝属植物绞股蓝（Gynostemma pentaphyllum（Thumb.）Makino 的干燥全草。

二、方法

1.工作液的配制。

准确称取DPPH 适量，用无水乙醇溶解并配制成200 μmol L-1的工作液，置于4℃备用，即得。

准确称取适量ABTS 和过硫酸钾用水溶剂并配置成浓度分别为7 mmol L-1和2.45 mmol L-1的备用溶液，再将两者等体积混匀，于室温下避光放置15 h，即得ABTS 储备液。使用前用甲醇稀释至光密度为0.7±0.003 得ABTS 工作液。

准确称取适量醋酸钠、TPTZ 及FeCL3.6H2O，用水溶解并配置成浓度分别为0.3 mmol L-1、10 mmol L-1及20 mmol L-1，再将三者按照为10：1：1 体积比混匀，即得TPTZ 工作液，该溶液要现配现用。

2.供试品的配置。

分别称取5、6、7、8、9 五个不同采收期绞股蓝药材干燥粉末（过20 目筛）约1g，加石油醚适量，超声处理两次每次30 min，弃去石油醚，加60%乙醇50 mL，超声处理两次，每次45min，过滤，合并滤液，蒸干即得不同采收期绞股蓝醇提取物。

称取不同采收期绞股蓝的醇提取物约0.2 mg（平行三份），精密称定，加25 mL 60%乙醇，超声处理30 min，所得溶液用60%乙醇稀释至一系列浓度，备用。

3.样品的测定。

（1）DPPH 实验 取3ml 供试品溶液与3 ml 200 μmol L-1DPPH 工作液于室温反应40 min，并于517 nm 处测定吸光度，重复测定3 次。根据清除率的计算公式计算DPPH 清除率。

清除率（%）=[1-（Ai-Aj）/A0]×100%（a），公式中，Ai表示3ml DPPH 溶液与3 mL 供试品溶液的吸光度；Aj表示3 mL 无水乙醇溶液与3mL 供试品溶液的吸光度；A0为3 ml DPPH 溶液与3mL空白试剂的吸光度。实验结果以清除DPPH 自由基的IC50值表示样品的抗氧化活性。

（2）ABTS 实验 取0.5 mL 供试品溶液与3 mL ABTS 工作液混匀，于室温下反应40 min，并于734 nm 下测定吸光度，重复测定3 次。实验结果根据公式（a）计算ABTS 清除率，同时实验结果以清除ABTS 自由基的IC50值表示样品的抗氧化活性。

（3）FRAP 实验 取0.5 mL 供试品溶液与3 mL FRAP 工作液混匀，反应60min，在734 nm 处测定吸光度，重复测定3 次，以FeSO4为标准物质绘制标准曲线，计算回归方程，样品的抗氧化能力用FRAP 值表示：1FRAP 单位相当于1 mmol L-1FeSO4。

三、结果与讨论

通过对不同采收期绞股蓝醇提取物的抗氧化活性研究发现，不同采收期对绞股蓝抗氧化的活性影响较大。通过实验结果可以发现，在三种体外抗氧化模型的检测中5 个采收期的绞股蓝醇提取物的抗氧化活性结果基本相似，其中7 月份采收的绞股蓝的抗氧化活性最好。实验结果如表1、2 和3 所示。该研究对绞股蓝的产地采收加工和绞股蓝的进一步开发性研究提供一定的理论依据。

表1 不同采收期绞股蓝醇提取物清除DPPH 活性实验结果

表2 不同采收期绞股蓝醇提取物清除ABTS 活性实验结果

表3 不同采收期绞股蓝醇提取物清除FRAP 活性实验结果