胡家硕 上海楷达生物科技有限公司 上海市 200030
由上海崴环进出口有限公司提供。人体口服推荐量为每日3次,每次1 粒,成人体重按60kg计算,折合剂量为0.013g/kg●bw。
SPF级雄性SD大鼠50只及饲料由长沙市天勤生物技术有限公司提供,实验动物生产许可证号为SCXK(湘)2009-0012。实验条件为屏障环境,实验期间实验环境温度22°C~24°C,湿度50%~56%。实验动物使用许可证号为SYXK(湘)2010-0011 o
Beckman-Coulter au680全自动生化分析仪;血清总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)试剂盒从上海复星长征医学有限公司购买;HDL-C和LDL-C试剂盒从宁波美康生物技术有限公司购买。
在维持饲料中添加20.%蔗糖、15%猪油、1.2%胆固醇、0.2%胆酸 钠,适量的酪蛋白等。
釆用混合型高脂血症动物模型:
(1)剂量分组及受试样品给予时间:设全葡萄提取物(含白藜芦醇)三个剂量组分别为 0.065g/kg ●bw^ 0.130g/kg ●bw、0.390g/kg●bw (分 别 相 当于人体推荐剂量的5倍、10倍、30倍),同时设空白对照组和模型对照组。低、中、高剂量受试液配制时,分别取样品1.30g、2.60g、7.80g加蒸馅水定容至200ml,空白对照、模型对照组给予等体积蒸馅水,分别给予受试动物灌胃,灌胃体积为1.0ml/100g.bw,每日一次,连续30 天;
(2)实验步骤:于屏障系统下大鼠喂饲维持饲料观察5至7天,适应期结束时,体重 达180g~220g,按体重随机分成2两组,10只大鼠给予维持饲料作为空白对照组,40 只给予模型饲料作为模型组。每周称体重一次。一周后,不禁食取尾血,用BECKMAN COULTER AU680全自动生化分析仪测定TC、TG、HDL-C、LDL-C。根据TC水平将模型组动物随机分为四组即模型对照组和三个剂量组。分组后,空白对照组继续给予维持饲料,模型对照组及三个剂量组继续给予模型饲料,同时按1.5.1剂量设计给各组受试动物灌胃;
(3)指标测定:每周称体重一次,于实验结束时不禁食釆血,测定血清TC、TG、 HDL-C>LDL-C 水平。
数据由Excel和SPSS软件提供分析了。首先,对数据进行方差齐性检验,如果方差是齐次的,则采用单变量方差分析进行总体比较。然后用Dunnett法计算多剂量组和模型对照组的平均值比较。如果方差不是齐次的,原始数据应作相应的变换。方差齐性检验后,用转换后的数据进行统计;如果变量转换后的方差齐性目的没有达到,则采用区间汇总检验的统计量,用T检验比较模型控制组和盲税组。
(1)辅助降血脂功能结果判定:①各剂量组与模型对照组比较,任一剂量组血清总胆固醇或低密度脂蛋白胆固醇降低,且任一剂量组血清甘油三酯降低,差异均有显著性。②同时各剂量组血清高密度脂蛋白胆固醇不显著低于模型对照组,可判定该受试样品辅助降低血脂功能动物实验结果阳性。
(2)辅助降低甘油三酯结果判定:①各剂量组与模型对照组比较,任一剂量组血清甘油三酯降低,差异均有显著性,②同时各剂量组血清总胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇不显著高于模型对照组,血清高密度脂蛋白胆固醇不显著低于模型对照组,可判定该受试样品辅助降低甘油三酯功能动物实验结果阳性。
(3)辅助降低血清总胆固醇结果判定:①各剂量组与模型对照组比较,任一剂量组血清总胆固醇或低密度脂蛋白胆固醇降低,差异均有显著性,②同时各剂量组血清 甘油三酯不显著高于模型对照组,各剂量组血清高密度脂蛋白胆固醇不显著低于模 型对照组,可判定该受试样品辅助降低胆固醇功能动物实验结果阳性。
见表1所列,实验后模型对照组动物增重明显高于空白对照组(P<0.05),各剂量组动物初、中、末期体重及增重与模型对照组比较,差异无显著性(P>0.05)。
表1 样品对大鼠体重的影响
表3 实验前后各组大鼠血清TG水平
表4 实验前后各组大鼠血膏HDL-C水平
表 5 实 验 前 后各 组 大鼠 血 清 LDL-C水平
见表2~5所列,模型对照组和空白对照组比较,血清甘油三酯、血清总胆固醇及低 密度脂蛋白胆固醇明显升高,差异均有显著性(P<0.05),表明造模成功。实验后, 高剂量组大鼠血清甘油三酯和总胆固醇水平显著低于模型对照组(P<0.05),各剂量组血清高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平与模型对照组无显著性差异(P>0.05)。
本 实 验 室 条 件 下,以0.065g/kg●bw>0.130g/kg●bw、0.390g/kg,bw剂量的全葡萄提取物(含白藜芦醇)给饲模型饲料的SD大鼠灌胃30天,与模型对照组比较,0.390g/kg●b、w剂量组大鼠血清甘油三酯和总胆固醇水平显著降低(P<0.05),但对血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平无明显影响(P>0.05),提示全葡萄提取物(含白藜芦醇)对动物具有辅助降血脂功能。