南方地区樱桃砧木吉塞拉6号的组培快繁技术

张益，王琳，郑佳铌，王云冰*，洪莉，董军

(1.台州科技职业学院 农业与生物工程学院，浙江 台州 318020； 2.台州市农业科学研究院 果树研究所，浙江 台州 371000)

甜樱桃砧木吉塞拉6号产自德国，是酸樱桃与灰毛叶樱桃杂交培育的品种。吉塞拉系列甜樱桃砧木适应性广，矮化性强，表现突出，抗病能力强[1-2]，但南方甜樱桃对气候有极其严格的要求，常规种植方式育苗速度慢，生长状况不够理想，难以满足市场需求。采用组织培养技术可有效解决育苗难的问题，已经有大量的樱桃或樱桃砧木建立了组培体系[3-5]。南方地区缺乏甜樱桃育苗技术，制约了甜樱桃产业发展的问题，为满足南方地区对甜樱桃种苗的迫切需求，本研究建立了一套适宜南方甜樱桃砧木吉塞拉6号组织培养快繁体系，现将研究结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

试验材料为台州市农业科学研究院的樱桃砧木吉塞拉6号，取其幼芽为外植体，幼芽取材时间为3月。

1.2 处理设计

1.2.1 外植体消毒

选晴朗天气摘取生长健壮、无病虫害的新生樱桃砧木吉塞拉6号的幼芽，采用1 000倍多菌灵溶液处理，并套袋保护15 d，剪下幼芽备用。选取饱满幼芽，在肥皂水中清理干净，用流水冲洗30 min以上；随后在无菌条件下，用75%乙醇溶液浸没幼芽，均匀晃动进行消毒，无菌水冲洗3～4次，每次约1 min，然后用0.1%的HgCl2溶液浸没幼芽均匀晃动进行消毒，再用无菌水冲洗3～4次，沥干备用。其中75%乙醇处理时间分别为30、45 s，0.1%的HgCl2溶液处理时间分别是6、8、10 min，具体处理为：T1，75%的乙醇30 s+0.1%的HgCl26 min；T2，75%的乙醇30 s+0.1%的HgCl28 min；T3，75%的乙醇30 s+0.1%的HgCl210 min；T4，75%的乙醇45 s+0.1%的HgCl26 min；T5，75%的乙醇45 s+0.1%的HgCl28 min；T6，75%的乙醇45 s+0.1%的HgCl210 min。

所有处理的外植体接种于MS+0.5 mg·L-16-BA+0.2 mg·L-1NAA+30 g·L-1蔗糖+6 g·L-1琼脂培养基上。每种处理15瓶，每瓶接种3株。10 d后统计污染率、褐化率和成活率。

1.2.2 培养基筛选

增殖培养以MS+30 g·L-1蔗糖+6 g·L-1琼脂为基础培养基，生根培养以1/2MS+蔗糖30 g·L-1+6 g·L-1琼脂为基础培养基，pH值为5.8，在不同生长时期添加不同含量的激素。

增殖培养：选取健壮、生长势良好的分化苗，接种到含不同激素的增殖培养基上进行继代培养。试验共设置6种增殖培养基，标记为T7～T12。各培养基均以MS为基础培养基，每个处理中NAA均为0.1 mg·L-1，T7～T9中KT为0 mg·L-1，6-BA分别为0.3、0.5、0.8 mg·L-1；T10～T12中，6-BA为0 mg·L-1，KT分别为0.3、0.5、0.8 mg·L-1。每种处理接种15瓶，每瓶接种3株。继代培养30 d，统计分化苗的增殖率、株高和生长状况。

生根培养：将株高约1.5～3.0 cm的健壮继代增殖苗转接到生根培养基中进行培养，试验设置6种生根培养基，标记为T13～T18。各培养基均以1/2MS为基础培养基，每个处理中IAA均为0.1 mg·L-1，T13～T15中IBA为0 mg·L-1，NAA分别为0.3、0.5、0.8 mg·L-1；T16～T18中NAA为0 mg·L-1，IBA分别为0.3、0.5、0.8 mg·L-1。每种处理接种15瓶，每瓶接种3株，放置培养室进行生根培养。生根培养30 d，统计瓶苗的生根长度、生根率和生长状况。

2 结果与分析

2.1 消毒处理方式的影响

消毒剂对植物试验材料有一定程度的伤害，消毒时间长，虽然污染率会降低，但是褐化率会升高。由表1可知，同种消毒剂消毒不同时间对吉塞拉6号生长影响也不同。75%乙醇溶液消毒45 s，吉塞拉6号的成活率低于消毒30 s；随着HgCl2处理时间的延长，污染率逐渐下降，成活率呈先增高后下降的趋势。综合考虑，以75%乙醇溶液30 s+0.1% HgCl2溶液8 min的消毒处理效果较好，成活率达90%。

表1 消毒方式对外植体消毒效果的影响

2.2 增殖培养基的影响

表2数据表明：吉塞拉6号在T7、T12培养基中增殖率均较高，分别为90%、95%；T12培养基中的苗生长旺盛，叶片嫩绿；T9培养基的分化苗增殖率最低，且叶片生长不良，生长速度慢，还有过度水化现象发生，玻璃化比较严重。表明6-BA明显影响樱桃砧木的增殖，易导致培养材料玻璃化，KT不易产生玻璃化，是良好的替代品。综合考虑，增殖培养基以MS+0.8 mg·L-1KT+0.1 mg·L-1NAA为宜。

表2 不同增殖培养基对樱桃生长的影响

2.3 生根培养基的影响

表3表明，吉塞拉6号在T17、T18培养基中生根率较高，分别达93%和91%，T17培养基内的增殖苗生根速度快，一般7 d左右就有根长出，根长适宜，根系生长状况良好，粗细适中，根系白，须根较多；T14培养基生根率最低，长根速度慢甚至不长根。IBA比NAA生根效果略好，综合考虑，生根培养基以1/2MS+0.1 mg·L-1IAA+0.5 mg·L-1IBA为宜。

表3 不同生根培养基对樱桃生长的影响

3 小结

以75%乙醇溶液30 s+0.1% HgCl2溶液8 min消毒处理为宜，诱导成活率可达90%，且生长良好；增殖培养基以MS+0.8 mg·L-1KT+0.1 mg·L-1NAA为宜，增殖率达95%，该培养基内生长的分化苗健壮，生长旺盛；生根培养基以1/2MS+0.1 mg·L-1IAA+0.5 mg·L-1IBA为宜，生根率达93%。

消毒处理环节的消毒剂含量越高，污染率越低，褐化率越高，成活率越低。通过试验发现，增殖培养基中细胞分裂素6-BA含量越高，分化苗玻璃化程度越高，达到0.8 mg·L-1就会产生严重的玻璃化现象；同时加入KT，玻璃化症状消失，这与组培中植物激素种类影响玻璃化发生的理论基本一致。在生根试验中，各个激素的种类和配比至关重要，是影响植株能否成活的关键。本实验分化苗的须根不多，这还要考虑到各方面因素，如基础培养基的影响、是否需要添加活性炭和有机物、苗的生理状态，以及培养的环境条件等因素。