乳粉中金黄色葡萄球菌定量检测能力验证结果分析

摘 要：通过平板计数法和3M测试片法对两个乳粉样品中的金黄色葡萄球菌进行定量检测，结果分别为2 800 CFU/ g和3 200 CFU/g。Z值分别为0.3和0.1，结果均为满意。通过开展能力验证可以更好地提高实验室的检测能力。

关键词：金黄色葡萄球菌；定量检测；能力验证

金黄色葡萄球菌是常见的食源性致病菌，广泛存在于自然环境中。金黄色葡萄球菌在适当的条件下，能够产生肠毒素，引起食物中毒。近几年，金黄色葡萄球菌引发的食物中毒报道层出不穷，由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒事件占食源性微生物食物中毒事件的25%左右[1]，由此可见金黄色葡萄球菌对食品安全的威胁很大。所以做好食品中金黄色葡萄球菌定量检测尤为重要。

本实验室参加了2018年度乳粉中金黄色葡萄球菌定量检测能力验证，通过能力验证可以提高实验室对金黄色葡萄球菌的检测能力，通过检验结果有效评价两种检测方法。

1 材料和方法

1.1 样品和菌株

阳性对照菌株：金黄色葡萄球菌ATCC 6538；阴性对照菌株：表皮葡萄球菌CICC 26069。

样品：由中国食品药品检定研究院发放两个待测样品code 0010和code 0092。每件样品由1个菌球和相应的1袋奶粉基质组成。

1.2 主要培养基与仪器设备

Baird-Parker琼脂平板（广东环凯）；冻干兔血浆（北京陆桥）；脑心浸出液（BHI）肉汤（北京陆桥）；血平板（北京陆桥）。

自动微生物快速检定分析系统（VITEK 2 COMPACT 30），生化培养箱。

1.3 方法

采用Baird-Parker平板计数法。

1.3.1 样品前处理及前增菌

在生物安全柜内将装有金黄色葡萄球菌样品的西林瓶打开，取225 mL灭菌稀释液加入到无菌均质袋中，并将西林瓶中小球加入到稀释液中，充分溶解。然后再与西林瓶有相同编码的乳粉样品加入到上述稀释液中，充分均质混匀。此溶液即为浓度为10-1 CFU/g的待测样品。

1.3.2 样品稀释

用1 mL微量移液器吸取浓度为10-1 CFU/g待测样品1 mL，缓慢注入盛有9 mL磷酸盐缓冲液无菌试管中，涡旋振荡充分混匀，按此方法将样品稀释至浓度为10-6 CFU/g。

1.3.3 样品接种

吸取10-1～10-6 CFU/g的样品匀液 1 mL样品匀液0.3、0.3、0.4 mL分别加入3块Baird-Parker平板，同时做一组平行试验，然后用一次性L棒涂布整个平板，未触及平板边缘。

1.3.4 培养

涂布后，将平板放在培养箱36 ℃培养1 h，等样品匀液吸收后翻转平皿，倒置于培养箱，（36±1）℃培养48 h。培养结束后，观察Baird-Parker平板上菌落的形态。选取可疑菌落进行血浆凝固酶实验，并计算阳性菌数目。

1.3.5 3M测试片法

将测试片放置在生物安全柜中，揭起上层膜。使用吸管将1 mL样品垂直滴在测试片的中央处。将压板放置在上层膜中央处。轻轻压下，使样品液均匀覆盖于圆形的培养基上。且勿扭转或滑动压板，静置1 min后使培养基凝固。

2 结果

2.1 Baird-Parker平板计数法结果

培养48 h后的BP平板上共有3种菌落形态：1号黑色较大圆形菌落，周围无明显白色沉淀环；2号黑色圆形菌落，较大沉淀环，外有一层透明圈；3号黑色圆形菌落，表面光滑，周围有沉淀环，外有一层清晰带。

从合适稀释度且有典型金黄色葡萄球菌菌落的Baird-Parker平板上挑取菌落划线接种到血琼脂平板上，置于（36±1）℃培养24 h后，菌落形态为：1号灰色圆形菌落，无溶血圈；2号灰白色圆形菌落，有溶血圈；3号金黄色较小圆形菌落，有溶血圈。

血浆凝固酶实验：分别挑取BairdParker平板上典型及可疑菌落10个，分别接种到BHI肉汤中（36±1）℃培养24 h后，接种冻干兔血浆，置于（36±1）℃，每30 min观察一次，观察6 h。观察结果如表1所示。

上机实验：挑取3个典型菌落用VITEK 2 COMPACT 30进行上机检测，结果为：Code 0010 1号与溶血葡萄球菌有95%的相似率；2号于粪肠球菌有99%的相似率；3号与金黄色葡萄球菌有99%的相似率。Code 0092 1号与粪肠球菌有99%的相似率；2号与溶血葡萄球菌有99%的相似率；3号与金黄色葡萄球菌有99%的相似率。

由此可见，3号菌落为金黄色葡萄球菌。确认典型菌落数记录结果为：code 0010为2 800 CFU/g；code 0092为3 200 CFU/g，结果均为满意。

2.2 3M测试片结果

两个样品的含菌量分别为3 500 CFU/g，3 300 CFU/g，两种方法结果上差别不大。测试片法是基于微生物自身代谢产生的酶与相应显色底物反应从而显色的原理进行检测。3M上的目标菌落均呈现紫红色，而其他菌被抑制，颜色不明显，并且相比传统方法有操作简便、工作量少、灵敏度高等优点，并且与平板计数法结果相差不大。

3 结语

在此次能力验证中分别用了两种方法对乳粉中金黄色葡萄球菌進行定量检测，结果满意。相比之下，金黄色葡萄球菌测试片显色明显，对实验人员的经验要求相对较低；而且操作快速、简便、节省时间；在计数方面，结果显示与Baird-Parker平板上的计数值十分接近，实际应用中，金黄色葡萄球菌测试片能在很大程度上缩短检测时间[2]，在实验室快速检验中有很大的利用空间。但是测试片法有很多不成熟的地方，因此选用哪种方法还是根据样品形状、环境等因素来决定。

参考文献

[1]Atanassova V，Meindla R.Prevalence of Staphylococcus aureus and Staphylococcal enterotoxins in raw pork and uncooked smoked hamacomparison of classical culturing detection and RFLP-PCR[J].Int J Food Microbiol，2001，68（1-2）：105.

[2]谢作蓉，杨穗珊，林青，等.能力验证中金黄色葡萄球菌定量检测结果分析与方法比较[J].现代食品，2017（20）： 111-113.

作者简介：张悦（1990—），女，河南三门峡人，硕士，助理工程师。研究方向：食品微生物。