采用HPLC－MS/MS法 准确测定百消丹美龄丸中黄芪甲苷的含量

刘莉丽

一、材料与方法

1.仪器与试剂。Agilent 1290高效液相色谱仪（美国安捷伦科技有限公司），Agilent G6460三重串联质谱仪（美国安捷伦科技有限公司）。黄芪甲苷对照品购于中国药品生物制品检定所，批号为110781-200613；市售百消丹美龄丸（郑州百消丹药业有限公司）；甲醇、乙腈为色谱纯，超纯水。

2.色谱及质谱条件。①色谱条件：Agilent SB-C18色谱柱（2.1×50mm，1.8μm）；乙腈-水（35∶65）为流动相，流速为0.2mL/min；柱温为室温；进样量5μL。②质谱条件：采用电喷雾正电离源模式（ESI+），扫描方式为多反应监测（MRM）；雾化气压力35psi；干燥气流速9L/min，干燥气温度350℃；毛细管电压4000V；黄芪甲苷定量离子质荷比（m/z）807.3/202.9，定性离子质荷比（m/z）807.3/627.1；定性离子和定量离子对应的碰撞能量压分别为65V、60V，碎裂电压均为115V。

3.对照品储备液的制备。精密称取10mg对照品置于100mL容量瓶中，使用甲醇作为溶剂，溶解样品并稀释至刻度（浓度为100μg/mL），摇匀备用。

4.供试品溶液的制备。称取0.5g样品于20mL容量瓶中，用甲醇作为溶剂，溶解样品并稀释至刻度，摇匀后超声处理30min，放冷至室温；用中性三氧化二铝柱（AgelaCleanert Alumina-N-SPE∶1000mg/3mL）除去杂质，精密吸取10mL滤液，置于平行蒸发旋转蒸发仪浓缩蒸干，用甲醇溶解残渣并定容至1mL，經0.22μm的微孔滤膜过滤备用。

二、实验与结果

1.线性关系考察试验。精密量取对照品储备液0.10mL、0.30mL、0.50mL、0.70mL、1.00mL、10mL，分别置于10mL容量瓶中，甲醇作溶剂，稀释至刻度后摇匀，超声处理30min，放冷至室温，得到对照品待测液。精密吸取对照品待测液，上机进样测定，记录测得峰面积。横坐标为浓度（X），纵坐标为峰面积值（Y），得到线性回归方程y=527.05x-25.44（r=0.9991），表明黄芪甲苷在1μg/mL-100μg/mL范围内线性关系良好。

2.方法学考察。①精密度试验：精密吸取黄芪甲苷对照品储备液，上机测定，重复进样6次测其峰面积，RSD=1.40%，表明精密度较好。②稳定性试验：取同一批样品适量，按供试品溶液的制备方法制成样品溶液，分别在样品溶液制备后的0h、2h、4h、8h、12h进样测定其峰面积，RSD=1.51%，表明使用该方法样品在12h内的稳定性良好。③重复性试验：取同一批样品，按供试品溶液的制备方法制成6份样品溶液，上机测定，记录黄芪甲苷的峰面积，RSD=1.65%，表明该方法重现性良好。④加样回收率试验：称取0.5g样品9份，每3份分别精密加入黄芪甲苷对照品储备液20μL、40μL、60μL制成三个浓度梯度试样，按供试品溶液的制备方法制备溶液，上机测定，记录测定峰面积，结果回收率的平均值为93.00%、RSD值为1.62%，表明样品加样回收率良好。⑤样品测定：取样品3份，按供试品溶液的制备方法和配置样品溶液的方法制备实验用供试品溶液，上机测定，计算黄芪甲苷的含量，结果平均含量为8.559μg/g，RSD为1.52%。

本实验采用高效液相色谱-串联质谱法对百消丹美龄丸中的黄芪甲苷进行了测定，该方法具有提取效率高、前处理快速、灵敏度高、准确度高、重复性好等优点，可以很好地应用于百消丹美龄丸中黄芪甲苷含量的分析检测。