淋巴结组织术中冷冻切片常见问题与对策

王 伟，朱惠君

在临床术中送检的快速病理标本中，淋巴结是含脂肪较多的组织之一，周围脂肪很难剔除干净，组织结构致密、细胞丰富，其外周又有致密结缔组织的被膜包裹，难以冻结，切片呈糊状，需要较低的温度进行冷冻。但冷冻温度过低，又易使淋巴结组织变脆，不能满足镜检要求，极易造成漏诊，与其他组织相比其制片难度较大[1]。本科室在实际工作中对术中同时送检的多个淋巴结组织冷冻切片进行实践和探索，取得满意效果。镜下观察，淋巴结组织结构完整，胞质与胞核红蓝对比鲜明，实质细胞无收缩，与常规石蜡切片观感结果较一致(图1)。现就术中冷冻淋巴结组织制片中常见问题与对策进行总结，并介绍如下。

1 切片有裂隙、颤痕或碎沫样改变

1.1 原因 多出现有肿瘤转移或反应性增生等实质细胞改变的淋巴结组织切片，特点是淋巴结实质细胞致密，造成组织冷冻后硬度较大所致。

1.2 对策 参考临床病理室间质控评价标准中的冷冻切片标准[2]，将恒冷切片机的箱体温度调在适合淋巴结组织切片的最佳温度-18～-20 ℃，将淋巴结组织置于冷冻托底座上，周围滴加OCT包埋剂，冷冻1～2 min，6 μm厚切片，即可顺利切出切片。

1.3 注意 (1)取材前应先用滤纸吸取淋巴结组织表面的水分，防止冰晶形成。(2)尽可能剔除淋巴结组织周围的脂肪，避免脂肪过多导致切片困难。(3)防止取材手法不当或者刀钝造成淋巴结组织挤压受损，导致镜下结构发生变化。(4)冷冻时间亦不宜过长，否则实性成分容易过度冷冻，切片易产生皱褶、发脆。

2 组织切片呈糊状，堆积在一起或者黏附在切片刀上，难以展平

2.1 原因 脂肪组织所含水分极少，难以像其它组织一样被冻硬，所以被脂肪成分包裹的淋巴结组织易皱褶、卷曲、黏稠不成片。通常箱体温度在-18 ℃左右，样品头温度-20 ℃左右，这样就能将一般的组织切出6 μm厚的平整切片。但对于被脂肪成分包裹的淋巴结组织，即使温度调制-30 ℃，脂滴也不易被冻硬，很难切出满意的切片。

2.2 对策 取材时尽可能把淋巴结周围的脂肪组织用刀剔除干净，或者用挤压的方法，将被脂肪组织包裹的淋巴结组织置于多层干净纱布之间，手指轻压纱布中的组织，使脂肪组织中的脂质成分被挤压出去。也可用粗切削的方式将组织粗修至最大平面后，再用冷冻锤轻压切面，然后顺着原粗修切片的方向快速切片，也取得较好效果。

2.3 注意 (1)含脂质较多的淋巴结组织容易掉片，切片厚度不宜超过6 μm，且切片过厚会导致细胞重叠，镜下结构不清晰。(2)用挤压的方法尽量保持组织原有形态，减少组织受压引起损伤，结构发生变化。(3)采用全新的优质一次性不锈钢刀片，最好不用档板，直接快速切片，可以减少刀片和冷冻组织摩擦时产生的热量，慢摇切片机使细胞容易堆积、重叠。

3 切片时组织脱落、脆裂，不完整，切面常有空洞，部分糊状

3.1 原因 既有实性成分又有脂肪成分的多个淋巴结组织，则切出的薄片空洞，破碎，切片不完整，切片困难(图2)；要切出脂肪，需在低温下才能使脂肪冷冻，且耗时较长，而温度太低，实性部分往往容易过度冷冻。

3.2 对策 使用适当的包埋方法，将恒冷切片机的箱体温度调为-18 ℃，同时将实性成分和脂肪成分为主的淋巴结组织分别包埋固定在一样品头的上、下方，两者尽可能紧靠，实性成分摆在冻头下方，靠近刀口的位置；脂肪成分摆在冻头的上方，远离刀口的位置，这样先切实性部分，用毛笔轻拉切片，有利于展平上方的组织。否则两种成分混合冷冻在1个冻头上，难以切完整，易形成大的空洞。也可预先在淋巴结组织大体检查时，通过肉眼观察将含实性成分和脂肪成分的淋巴结组织分开冷冻固定在2个冻头上，然后分别按照上述1.2和2.2的对策处理即可，减少人为的空洞现象，能顺利切出满意切片(图3)。

使用术中印片细胞学检测[3]，将术中新鲜淋巴结组织直接放在纱布上，用解剖刀沿淋巴结的最大面剖开，或者在冷冻机的样品头上粗修至最大平面，然后将准备好的干净防脱胶载玻片立即对着病灶明显的剖面或最大平面，印片4～6张(图4)，随即固定，染色即可，操作简便，能真实反映细胞形态，诊断准确性高。与冷冻组织切片的诊断符合率相似，有助于病理医师发出临时报告。

①②③④

图1 淋巴结组织术中切片镜下观与常规HE观感相似 图2 淋巴结组织切成糊状，空洞，不完整 图3 切出较完整的淋巴结切片 图4 印片细胞学方法制片

3.3 注意 印片时动作轻柔、用力均匀，不能来回摩擦，否则会导致细胞重叠影响诊断。有研究报道[3]，用该方法制成的淋巴结组织术中切片和常规石蜡制片的准确率相似，对印片细胞学在淋巴结组织术中诊断中的地位给予充分的肯定，但是该方法对诊断淋巴结微转移尚有缺陷。建议可在因制片时间有限，且难以按上述方法切出理想切片时考虑该方法。

4 送检多个淋巴结组织切不完整，造成漏诊

4.1 原因 大小不一、圆形或椭圆形等多个淋巴结组织，因切片时高度不在一个平面上，造成较小淋巴结的误、漏诊。

4.2 对策 将较小的和较大的淋巴结组织分开包埋，将较小的淋巴结组织单独制作一个OCT包埋托，先滴加OCT包埋剂，做成一个冻台，再把淋巴结组织包埋进其中，排列不能太分散，以利于切片。然后将较大的淋巴结组织冷冻在另一个样品头上，随后分别切片，常规冷冻切片HE染色。如遇疑难制片，再按上述方法处理。

4.3 注意 (1)为减少或避免发生误、漏诊，需将淋巴结组织同时切完整。(2)在提高淋巴结组织制片质量的基础上，多做几个切面的冷冻切片，以满足病理医师的诊断要求。

综上所述，针对术中冷冻中淋巴结组织不同情况应采取不同方法，当遇到切片问题，按上述操作方法解决后，有利于制作出较为满意的淋巴结切片，便于术中快速冷冻病理诊断及后续手术方案的选择。