山东省烟台地区J亚型禽白血病与禽网状内皮组织增生症血清流行病学调查

盖小君 王晓玲 郭龙宗 陈静

摘  要：为了解山东省烟台地区J亚型禽白血病与网状内皮组织增生症的流行情况，于2019年9～10月，采用酶联免疫吸附试验对来自烟台地区8个农业县的16个种鸡场、20个商品代场和 16个散养鸡群共940份血清样本进行检测分析。结果显示：有5个农业县检测到J亚型禽白血病，抗体阳性率为2.9%;8个农业县全部检测出禽网状内皮组织增生症，抗体阳性率为43.9%，双抗体阳性率为2.7%。此次调查为烟台地区禽白血病的净化及禽网状内皮组织增生症的防控提供了数据支撑。

关键词：烟台地区;J亚型禽白血病;禽网状内皮组织增生症;血清流行病学

中图分类号：S858.311.31+3     文献标识码：B     文章编号：1673-1085（2020）3-0053-04

禽白血病（Avian leucosis， AL）和禽网状内皮组织增生症 （Reticuloendotheliosis， RE） 是禽的两大肿瘤性疾病，均可以感染多种禽类，造成免疫器官损伤，导致严重的免疫抑制，给我国养禽业带来了严重的损失[1]。禽白血病可分为A、B、C、D、E和J 6个亚群，其中J亚型是主要流行毒株[2]。J亚型禽白血病是由J 亚群禽白血病病毒 （avian leukosis virus of subgroup J，ALV-J）感染引起的一种传染性骨髓细胞瘤疾病或髓细胞性白血病，可造成鸡群免疫抑制、生长抑制，甚至造成髓细胞癌变。自1989年首次将ALV-J从商品肉鸡分离以来[3]，一直不断威胁着鸡群的健康。RE是由网状内皮组织增生症病毒（Reticuloendotheliosis Virus， REV）引起的禽类的肿瘤性疾病，同ALV-J一样，感染了REV的鸡群均可产生严重免疫抑制，致使机体内免疫应答降低，造成对其他细菌性和病毒性疾病的易感性增强。ALV和REV既可通过种鸡垂直传播，也可水平传播，是造成当前养禽业生产水平降低的重要病毒性疾病。

北京、广东、辽宁、吉林、山东和浙江等[1， 4， 8]等多个省市地区都报道过鸡群中存在ALV和REV感染，表明这两种疾病在我国普遍流行。烟台市地处山东半岛东部，山东半岛三面环海，只有西与内陆接壤，具有天然的动物疫病防控地理优势。家禽产业一直以来都是烟台市传统的优势畜牧产业，但是目前对于AL和RE最新流行情况鲜有调查报道。因此，为了解烟台地区ALV-J亚型和REV的感染情况，我们于2019 年9～10月采集了烟台市种鸡场、商品代、散养鸡群样品，通过酶联免疫吸附试验对ALV-J亚型和 REV感染情况进行了血清流行病学调查分析，为ALV的净化及REV的防控提供了数据支撑。

1  材料与方法

1.1  血清样品来源  来自全市所辖范围内8个农业县，每个县随机抽取2个父母代种鸡场、 2～3个商品代场和2个散养鸡群，每个种父母代鸡场、商品代场、散养鸡群分别随机采集35份、15份和5份全血样品并分离血清，最终共得到鸡血清样品940份，其中16个种鸡场、20个商品代场和16个散养鸡群样品数量分别为 560份、300份和80份。

1.2  样品采集与制备  每只鸡均通过翅静脉进行无菌采血，将采集的全血37℃静置2h待血清析出后，3000r/min常温离心5min，将上清液吸到1.5mL无菌的离心管中后，置于-20℃冰箱中保存，备用待检。

1.3  检测  ALV-J亚型ELISA抗体、REV抗体检测试剂盒购自美国IDEXX公司。将试剂恢复至18～26℃，并将其振摇混匀后使用，样品做500倍稀释用。基本操作步骤如下：

取出抗原包被板并标记好被检样品的位置，在合适位置的两孔中加入100μL不稀释的阴、阳性对照;取100μL稀释的被检样品加入相应的孔中，在18～26℃条件下孵育30min;每孔加入约350μL的洗涤液进行洗板，洗5次，并将孔内液体完全吸干;每孔加入100μL的酶标抗体，在26℃条件下孵育30min;每孔加入约350μL的洗涤液进行洗板，洗5次，并将孔内液体完全吸干;每孔加入100μL的酶標抗体，在26℃条件下孵育30min，重复上述步骤一次;每孔加入100μLTMB底物溶液，在26℃条件下孵育15min;每孔加入100μL的终止液终止反应，测定并记录各孔于450nm波长的吸光值。

1.3  数据分析  若某一场（群）有一份样品的ELISA检测结果为阳性，则判定该场（群）为阳性场（群）。阳性率=（阳性样品数/样品总数）×品总数）。

2  结果

2.1  8个农业县的ALV-J和REV抗体检测结果  在8个农业县中，有5个农业县检测出ALV-J抗体阳性，平均阳性率为2.9%;8个农业县全部检测出REV抗体阳性，平均阳性率为43.9%;双抗体阳性率为2.7%，见表1所示。表明ALV-J 亚型在烟台鸡群中感染率较低，而 REV在烟台鸡群中广泛分布。

2.2  不同代次的ALV-J和 REV抗体检测结果  各个种鸡场、商品代场和散养鸡群的REV抗体阳性率分别为45.4%、37.3%及58.8%，平均阳性率为43.9%（413/940）;ALV-J亚型的抗体阳性率分别为0.7%、4.3%及12.5%，平均阳性率为2.9%（27/940）;双抗体阳性率分别为0.7%、3.7%及12.5%，平均阳性率为2.7%（25/940），见表2所示。

种鸡场、商品代场和散养鸡群的ALV-J、REV抗体阳性率分布情况见图1、图2。

由图1可见，各阳性率区间种鸡场、商品代场和散养鸡群数量的分布情况显示，ALV-J抗体阳性率为0%的种鸡场、商品代场和散养鸡群分别有14个、14个和10个，占比分别为87.5%（14/16）、70%（14/20）和62.5%（10/16）。

由图2可见，各阳性率区间种鸡场、商品代场和散养鸡群数量的分布情况显示，REV抗体阳性率高于50%的种鸡场、商品代场和散养鸡群分别有7个、7个和9个，占比分别为43.8%（7/16）、35%（7/20）和56.2%（9/16），其中抗体阳性率达100%的种鸡场、商品代场和散养鸡群分别有1个、1个和4个，占比分别为6.2%（1/16）、5%（1/20） 和25%（4/16）。

3  讨论

目前，沒有有效的药物和疫苗治疗、预防AL的发生，鸡群中的抗体水平可以反应出该病毒的感染状态，防控该病的关键是通过病原及抗体检测不断剔除鸡群中阳性鸡，达到净化种群的目的[5]。2019年，张倩报道通过2014～2016年在全国范围内监测发现，ALV-J对我国地方品种的感染性和致病性在不断增强，且在祖代种鸡群中ALV-J和ALV-A/B混合感染检出率均在34%以上[6]。在山东省内，刘丽平报道对8个祖代种鸡场检测发现有4个种鸡场检测出ALV-J的抗体阳性[7]。此次我们检测结果发现，烟台市种鸡场、商品代场和散养鸡群的ALV-J的抗体阳性率分别为0.7%、4.3%及12.5%。主要原因可能是近几年，烟台市畜牧兽医局制订了《烟台市种鸡场禽白血病净化方案》，要求种鸡场对感染种鸡进行淘汰，从源头上净化禽白血病，减少损失。山东益生种畜禽股份有限公司（祖代肉种鸡十八场）通过了“禽白血病净化示范场”评估[6]，对烟台白羽肉鸡的净化起到了积极的推动作用。在检测的16个种鸡场中，有2个种鸡场检测出ALV-J的抗体阳性，说明有ALV的存在或曾经感染过ALV，需要进一步对全群加强病毒抗原检测，若有阳性及时淘汰。同时商品代和散养鸡群的ALV-J感染较为严重，急需有关部门引起重视。

REV和ALV类似，即可垂直传播也可水平传染，与疫苗污染有很大的关系，但我国目前尚未对REV开展系统的监测净化工作，养殖场对REV的重视程度不够，使REV的抗体阳性率远远高于ALV-J。通过检测发现，烟台市8个农业县全部检测出REV抗体阳性，平均阳性率为43.9%，种鸡场、商品代场和散养鸡群REV抗体阳性率分别为45.4%、37.3%及58.8%，其中抗体阳性率达100%分别有1个、1个和4个，表明REV在烟台鸡群中广泛分布，并且感染严重。本试验检测结果与鲍伟华报道的2017年在宁波市鸡群中检测出ALV-J抗体阳性率为21.5%、REV抗体阳性率为32.0%[8]相比，可能与家禽产业一直是烟台市传统的优势畜牧产业、进口数量多、养殖密度大有关。

本次血清学调查结果显示烟台市种鸡场、商品代场和散养鸡ALV-J和REV共感染的阳性率分别为0.7%、3.7%及12.5%，平均阳性率为2.7%。表明免疫抑制病已经危害烟台鸡群的健康，会增加其它疫病的发生和治疗难度，应注意ALV-J和REV感染对疫苗免疫的抑制作用，建议规模场开展免疫抑制病的检测，及时淘汰阳性鸡，做到早检测、早发现、净化鸡群，促进烟台市养禽业健康持续的发展。

参考文献：

[1]  沈清霞，任冬梅，丁红雷，等.重庆市禽白血病及禽网状内皮组织增生症的血清流行病学调查[J].黑龙江畜牧兽医，2014，（22）： 54-55.

[2]  罗明星，周碧君，李永明，等.贵州省鸡群中禽白血病病毒J亚群感染的调查[J].中国家禽，2009， 31（11）： 15-18.

[3]  马超锋，赵云焕，连慧香，等.河南信阳土鸡J亚群禽白血病血清流行病学调查[J].畜牧与兽医， 2018， 50（4）： 116-119.

[4]  李鑫，王红宁，杨鑫，等.2012～2013年蛋鸡J亚群禽白血病流行病学调查[J].四川大学学报（自然科学版），2015， 52（4）： 932-936.

[5]  崔治中，孙淑红，赵鹏，等.对种鸡场禽白血病净化方案的建议[J].中国家禽， 2014， 36（1）：3-6.

[6]  张倩，王传彬，韩雪，等.2014～2016年祖代种鸡场禽白血病的监测与分析[J].中国兽医科学.2019，49（09）：1199-1206.

[7]  刘丽平，张月，徐聪，等.山东省种鸡场禽白血病血清学调查[J].家禽科学， 2019.8：46-48.

[8]  鲍伟华，樊莉，卢黎明，等.浙江省宁波市部分鸡场鸡免疫抑制性疫病血清学调查[J].中国动物检疫，2017， 34（1）： 29-31.

Serological Investigation of J-subtype Avian Leukosis and Avian Reticuloendotheliosis in Yantai area of Shandong Province in China

GAI Xiaojun1， WANG Xiaoling1， GUO Longzong2

（1. Yantai Animal Disease Prevention and Control Center， Yantai 264003， China;

2.Shandong Yisheng Animal and Poultry Breeding Company，Yantai 264003， China ）

Abstract：To investigate the prevalence of J-subtype avian leukosis and avian reticuloendotheliosis in Yantai， Shandong Province，a total of 940 serum samples were collected from16 breeding farms，20 commercial scale farms and 16 backyard flocks from 8 agricultural counties in Septemper to October 2019，and subjected to detection for antibody against J-subtype avian leukosis and avian reticuloendotheliosis by enzyme-linked immunosorbent assay.The results showed that J-subtype avian leukosis antibody positive samples were detected in 5 agricultural counties，and the averaged positive rate was 2.9%;avian reticuloendotheliosis antibody positive samples were detected in 8 agricultural counties，and the averaged positive rate was 43.9%;the positive rate of double antibody was 2.7%.The research could provide a basic data for further purification of avian leukemia and avian reticuloendotheliosis prevention and control in Yantai City.

Key words：Yantai area;J-subtype avian leukosis;Avian reticuloendotheliosis;Serological investigation

收稿日期：2020-03-20

作者简介：盖小君（1973.09-），男，硕士，主要从事动物疫病防控工作，E-mail：gaixj197309@sohu.com。

通讯作者：陈静（1968-），研究员，山东省禽产业体系省综合试验站站长，主要从事动物疫病快速诊断、疑难病症确诊、疫情监测和疫病普查、动物流行病学调查、实验室管理、兽医新技术培训与推广及实用防治技术研究等工作，E-mail：1752058646@qq.com。