防风种子生活力快速测定方法的研究

常丽君

摘 要 试验先采用不同浓度TTC溶液对防风种子进行生活力测定，筛选出防风种子生活力测定所用的最佳TTC溶液浓度；再用该浓度不同染色时间对防风种子进行生活力测定，筛选出最佳染色时间。结果表明，适宜防风种子生活力测定的条件为1.0%TTC溶液染色3h。

关键词 防风；种子；生活力

防风为伞形科防风属多年生草本植物，春、秋二季采挖未抽薹植株的根，除去须根和泥沙，晒干后入药。最早收载于《神农本草经.上品》，具有祛风解表，胜湿止痛等功效，主产于我国黑龙江、吉林、辽宁、内蒙古、河北、宁夏、甘肃、陕西、山西等地。近年来，在中医药现代化和中医药产业发展的推动下，防风种植面积逐年增大，防风都是以种子繁殖的，种子的生产在实际生产过程中一直不被重视，基本上是药材生产的副产品，还处于农户自繁自售的状态，其生产缺乏统一的质量标准和检验规程，从而导致防风种子质量层次不齐、商品种子惨伪等现象严重。这不但增加了投入成本，而且严重影响了防风种苗质量，并最终影响药材的质量和品质。因此，根据防风种子生产的现状和问题，应该制定相关的标准，使得在进行种子检验时，有一定的参考依据，同时也有利于加强市场的规范化，从而保障消费者的利益。

种子生活力是指种子胚胎在一定的环境下，通过一定的刺激，其萌芽的潜在能力。它也是衡量种子品质和价值的主要参考依据，种子生活力越高，在之后生长过程中，其潜力越大。对药用植物来说，种子质量的好坏，活力的高低更为重要，它不仅会影响植物的生长，而且直接影响到药材质量和品质。为了确定防风种子生活力的最佳染色浓度和时间，该实验用TTC（2，3，5-氯化三苯基四氮唑）对防风种子进行染色，希望通过该实验可以有效的为防风种子的检测制定相关依据。

1 试验材料

防风种子于2019年10月采自甘肃省陇西县首阳中药材产业园区，种子采集后在陇西县中医药研究院种子种苗检测中心进行生活力测定。

2 试验方法

四唑法（TTC）测定种子生活力的原理：有生命活力的种子会进行呼吸代谢，代谢过程中产生的氢可以将TTC由无色变为红色。

由以上原理可以进行判定，如果TTC被染成了深红色，可以推断，该种子进行了呼吸代谢，从而可以判断种子生活力相对较强，反之则不具备种子生活力。

本试验主要研究了不同TTC浓度和不同染色时间两个因素对防风种子生活力测定的影响。

3 试验步骤

3.1 试剂配制

第一步，在小烧杯中分别放入已经称取好的TTC粉末，质量分别是0.5g、1.0g、1.5g、2.0g；第二步，在每一个烧杯内都加入浓度为95%的乙醇进行溶解；第三步，依次在加入乙醇后的烧杯内加入20毫升蒸馏水进行摇匀，并通过0.1mol/L的氢氧化钠溶液将溶液PH调到中性；最后一步，再次利用蒸馏水进行稀释定容，这样就配好了不同浓度的TTC溶液。

3.2 操作步骤

先将防风净种子放在35℃水浴锅中浸泡24h使种子充分吸胀，然后根据种子外形沿胚着生部位纵向切开种子（两部分均含胚和胚乳），弃去一半后将另一半种子置于染色盘中，加入TTC溶液后于35℃恒温箱中进行染色后观察染色结果（TTC溶液以刚好浸没种子为宜）。每个处理做2次重复，每个重复100粒种子。

3.3 结果观察

染色结束后倒出TTC溶液，再用蒸馏水将种子清洗2-3次，观察种胚的染色情况（必要时可借助放大镜或低倍显微镜）。凡种胚全部或2/3部分被染成红色或淡红色即为具有生活力的种子，种胚不被染色的即为死种子。

4 结果分析

4.1 种子生活力对不同浓度TTC溶液的不同反应

表1是我们将处理好的防风种子浸泡在不同浓度的TTC溶液中五个小时所得的结果。根据表1数据，我们可以发现，当TTC的浓度为0.5%时，种子生活力为74%，当TTC浓度达到1%时，种子生活力大幅度增加，所以TTC浓度为0.5%被排除。我们再通过表一可以观察，浓度逐渐增长，但是种子生活力却没有大幅度增长，反而浓度为1.5%到浓度2%时，种子生活力不变，这样通过我们分析可以得出，测定防風种子生活力TTC的最佳浓度为1%。

4.2 不同染色时间对种子生活力测定的影响

将处理好的种子放到最佳浓度的TTC溶液中，并每隔一个小时进行观察统计所得出的。表2中我们可以得知，当染色一小时之后，种子生活力为70.5%；染色两小时后，种子生活力为75%；到了第三个小时之后，种子生活率达到了81%，再往后随着时间的增加，种子生活力并没有明显的增加。所以，可以推断出防风种子生活力测定的最佳染色时间为三个小时。

5 结论

首先，本实验排除其他可能影响的原因，对最佳浓度进行选择。通过将种子放置在不同浓度的TTC溶液中，从而得出TTC溶液最佳浓度为1%。其次，实验在将种子放置在1%的TTC溶液中，每隔一小时，进行记录，最终确定，染色时间为3小时效果最佳。综上所述，测定防风种子生活力的最佳条件为1%的TTC溶液进行染色三小时。