老年不稳定型心绞痛病人血浆组织蛋白酶S和血小板反应蛋白-1的水平及临床意义

赵 辉，陈 辉，王志刚，戴朝博，陈 诚

组织蛋白酶S(cathepsin S，Cat S)是一种重要的细胞外蛋白酶，可通过降解细胞内外多种蛋白质、酶等参与机体细胞外基质重塑、损伤修复、细胞增殖、浸润等过程，与人类心血管疾病、肿瘤等多种重大疾病密切相关[1-2]。血小板反应蛋白-1(thrombospondin-1，TSP-1)是一种细胞外基质糖蛋白，具有促进血管平滑肌细胞增殖、抑制内皮细胞生长与激活、聚集血小板等生物学特性，参与组织修复、血管新生等重要生理病理过程[3]。近年来，研究发现TSP-1可能在心血管疾病发生发展中起重要作用。不稳定型心绞痛(unstable angina pectoris，UAP)是冠心病的一种临床类型，主要特征是心绞痛症状进行性增强、发作时间持续延长等，往往预后不良，尤其对于老年病人临床上若不能及时诊断及治疗，可进展为急性心肌梗死，甚至猝死，严重危害病人生命健康[4]。本研究分析Cat S、TSP-1在UAP病人血清中的表达及其与病人冠状动脉狭窄程度、危险分层及预后的关系，以期为阐明Cat S、TSP-1在UAP临床评估中的作用提供参考。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2016年6月—2018年1月在武汉市第一医院住院的56例UAP病人作为UAP组，其中UAP低危组19例，中危组25例，高危组12例。同期住院的55例稳定型心绞痛(SAP)病人作为SAP组。纳入标准：①UAP病人符合 《不稳定性心绞痛和非ST段抬高心肌梗死诊断与治疗指南》中相关诊断标准[5]；②SAP病人符合《慢性稳定性心绞痛诊断与治疗指南》中相关诊断标准[6]。排除标准：①恶性肿瘤、急性心肌梗死、瓣膜性心脏病和继发性心绞痛病人；②近期内有急慢性炎症损伤或手术史；③肝、肾、肺等组织疾病及功能障碍；④患有自身免疫性或感染性疾病。另选择同期体检健康者50名作为对照组。UAP组、SAP组和对照组性别、年龄、体质指数、饮酒史及合并高血压、糖尿病等一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)。详见表1。

表1 3组一般资料比较

1.2 方法

1.2.1 冠状动脉造影 UAP组和SAP组病人均进行冠状动脉造影，并根据冠状动脉造影结果，采用冠状动脉狭窄程度积分(Gensini积分)法评价病人冠状动脉狭窄严重程度。评分包括狭窄程度和病变部位两部分，狭窄程度评分1～32分，病变部位评分0.5～5分，每处病变积分为狭窄程度评分与病变部位评分的乘积，病人Gensini总积分为所有病变积分的总和，得分越高代表冠状动脉狭窄程度越严重。冠状动脉造影由两位经验丰富的心血管医师操作并判断。

1.2.2 血样采集及指标检测 UAP组和SAP组病人在入院24 h内，对照组在体检当日，采集肘静脉血，加入抗凝剂，放入Sorvall ST 8R高速冷冻离心机(美国Thermo Fisher公司)中，2 500 r/min离心10 min，分离回收上层血清。采用人Cat S酶联免疫试剂盒(上海江莱生物科技有限公司)、人TSP-1酶联免疫试剂盒(上海江莱生物科技有限公司)检测血清Cat S和TSP-1水平。

1.2.3 心血管事件随访 UAP组病人出院后，随访6个月，记录病人再发心绞痛、心力衰竭、非致命性心肌梗死、再次血运重建等主要不良心血管事件(major adverse cardiovascular events，MACE)发生情况。

2 结 果

2.1 3组血清Cat S、TSP-1水平及Gensini积分比较 UAP组与SAP组血清Cat S、TSP-1水平均高于对照组(P<0.05)，UAP组血清Cat S、TSP-1水平均高于SAP组(P<0.05)；3组血清Cat S、TSP-1水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。UAP组Gensini积分高于SAP组，差异有统计学意义(P<0.05)。详见表2。

组别例数Cat S(mg/L)TSP-1(ng/mL)Gensini积分(分)UAP组5628.96±5.52①②24.06±6.22①②35.42±5.71②SAP组5522.17±4.16①14.37±3.51①29.89±5.08对照组5016.38±3.299.14±2.09F值105.817161.1665.387P0.000 0.0000.000

与对照组比较，①P<0.05；与SAP组比较，②P<0.05。2.2 UAP组血清Cat S、TSP-1与Gensini积分的关系 UAP组病人血清Cat S与Gensini积分呈正相关(r=0.645，P=0.011)，血清TSP-1与Gensini积分呈正相关(r=0.707，P=0.005)。详见图1、图2。

图1 UAP组血清Cat S与Gensini积分的相关性

图2 UAP组血清TSP-1与Gensini积分的相关性

2.3 UAP组不同危险分层病人血清Cat S、TSP-1水平比较 高危组血清Cat S、TSP-1水平高于中危组、低危组(P<0.05)，中危组血清Cat S、TSP-1水平高于低危组(P<0.05)，UAP组不同危险分层病人血清Cat S、TSP-1水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。详见表3。

组别例数Cat S(mg/L)TSP-1(ng/mL)低危组1925.38±3.9220.39±3.31中危组2529.67±4.11①24.87±4.25①高危组1233.15±2.86①②28.18±3.14①②F值16.02417.065P0.0000.000

与低危组比较，①P<0.05；与中危组比较，②P<0.05。

2.4 UAP组MACE随访结果 UAP组病人出院后随访6个月，出现再发心绞痛8例(14.29%)，心力衰竭1例(1.79%)，非致命性心肌梗死4例(7.14%)，无再次血运重建病例，MACE总发生率为23.21%。发生MACE组病人血清Cat S、TSP-1水平高于未发生MACE组病人，差异均有统计学意义(P<0.05)。详见表4。

组别例数Cat S(mg/L)TSP-1(ng/mL)发生MACE组1331.14±3.1827.19±2.98未发生MACE组4328.30±4.0623.11±3.77 t值2.3123.571 P0.0250.001

3 讨 论

粥样斑块破裂形成血栓加重冠状动脉狭窄程度是其主要的发病机制[7-8]。研究表明，γ-干扰素(INF-γ)、白细胞介素1(IL-1)等炎性因子刺激血管平滑肌细胞分泌Cat S，降解血管细胞外不溶性弹性蛋白是影响动脉粥样斑块不稳定的重要原因[9]。动物实验证实，动脉粥样硬化小鼠受血管紧张素Ⅱ刺激后，心血管部位Cat S表达升高，而抑制Cat S的活性能够明显增强小鼠粥样斑块稳定[10]。有研究报道，SAP、UAP和急性心肌梗死病人之间血清Cat S水平比较差异有统计学意义，检测Cat S水平有助于冠心病临床分型及严重程度评估[11]。

本研究结果显示，UAP组和SAP组血清Cat S显著高于对照组，而UAP组血清Cat S显著高于SAP组，UAP组血清Cat S水平与Gensini积分呈正相关，提示检测Cat S水平有助于评估UAP病人冠状动脉严重程度，此与Doganer等[12]研究结果相似。UAP的危险分层依据心绞痛发作频率、发作时ST段压低持续时间及肌钙蛋白T或肌钙蛋白I水平变化，UAP的危险分层有助于评估病人发生死亡和缺血事件的风险，为临床治疗决策提供参考[13]。本研究进一步分析结果显示，低危、中危和高危UAP病人血清Cat S水平呈显著升高趋势，病人出院后6个月内发生MACE的病人血清Cat S水平显著高于未发生MACE病人，提示检测血清Cat S水平有助于UAP危险分层及预后预测。Mirjanicazaric等[14]研究证实，使用阿托伐他汀治疗SAP病人可降低Cat S水平，其诱导的Cat S水平降低与血浆中低密度脂蛋白亚型的改善相互关联。说明干扰Cat S可能作为UAP治疗的新方法，对改善病人预后具有积极作用。

TSP-1是血管收缩蛋白，其在心肌缺血时从心肌细胞和内皮细胞释放，可促进血小板聚集和动脉粥样硬化病变中内皮下层的黏附，加重心肌缺血[15]。另有研究表明，在心肌缺血再灌注期间，TSP-1可通过激活CD47和CD36而破坏一氧化氮(NO)信号传导及血管内皮生长因子(VEGF)途径，造成局部微循环障碍[16]。Kaiser等[17]研究表明，PCI术后能够降低急性ST段抬高型心肌缺血病人血清TSP-1水平，TSP-1水平的降低与病人术后MACE发生风险有关，提示TSP-1可能是心血管疾病的新的诊断方法和靶向治疗方法。本研究结果显示，UAP病人血清TSP-1水平显著高于SAP病人和健康者，并与Gensini积分呈正相关，随着病人危险分层升高血清TSP-1水平显著升高，提示TSP-1与UAP病人冠状动脉严重程度和危险分层有关，与王竟悟等[18]研究结果相似。分析TSP-1在不同预后UAP病人之间的表达发现，出院后发生MACE的病人血清TSP-1水平显著高于未发生MACE病人，提示TSP-1与UAP病人预后有关，可能与TSP-1促进冠状动脉狭窄，影响心肌局部微灌注有关。此外，动物模型实验表明，TSP-1也可通过促进氧化型低密度脂蛋白水平升高，促进大鼠动脉粥样硬化发生及发展[19]。

综上所述，UAP病人冠状动脉病变越严重、危险分层越高，血清Cat S、TSP-1水平越高，同时Cat S、TSP-1高水平与病人MACE发生具有一定关系，因此，临床检测Cat S和TSP-1水平对评估UAP病人病情严重程度及不良预后具有一定价值，有助于高危病人筛查，对指导临床治疗决策、改善病人预后具有重要意义。本研究不足之处在于样本量较少，且未对相应病理机制进行深入探讨，今后仍需继续完善研究。