海藻酸钠微球经TACE联合DC-CIK治疗原发性肝癌的效果及对血清MIF、NGAL水平的影响

滕伟峰 毛琦淇 鲁俊

[摘要] 目的 研究海藻酸鈉微球经肝动脉栓塞化疗术（Transcatheter arterial chemoembolization，TACE）联合自体细胞免疫疗法治疗原发性肝癌的效果及对血清MIF、NGAL水平的影响。 方法 选取2015年2月～2018年2月期间120例在我院住院的原发性肝癌患者为研究对象，使用随机数字表将以上患者分为两组，每组患者60例，观察组患者采用海藻酸钠微球经TACE联合DC-CIK治疗，对照组患者仅采用海藻酸钠微球经TACE治疗，治疗8周。观察两组患者治疗效果、临床受益、血清MIF、NGAL水平及不良反应之间的差异。 结果 经过治疗，观察组患者的临床受益情况，包括疼痛减轻、体力改善、体重增加显著优于对照组，观察组患者的肿瘤控制率显著高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），两组患者的血清MIF、NGAL水平均显著下降，且观察组患者的血清MIF、NGAL水平低于对照组，两组患者的发生发热、皮疹、肝区疼痛之间的差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 海藻酸钠微球经TACE联合DC-CIK显著下调原发性肝癌患者血清MIF、NGAL水平，治疗效果显著，安全性较好。

[关键词] 海藻酸钠微球;肝动脉栓塞化疗术;血清巨噬细胞移动抑制因子;原发性肝癌;中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白

[中图分类号] R735.7          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-9701（2020）06-0001-04

[Abstract] Objective To study the effect of transcatheter arterial chemoembolization （TACE） combined with autologous cellular immunotherapy on primary liver cancer and its effect on serum MIF and NGAL levels. Methods A total of 120 patients with primary liver cancer who were hospitalized in our hospital from February 2015 to February 2018 were enrolled. The patients were divided into two groups using a random number table， with 60 patients in each group. Patients in the observation group were treated with sodium alginate microspheres via TACE combined with DC-CIK. Patients in the control group were treated with sodium alginate microspheres only with TACE for 8 weeks. The differences in treatment outcome， clinical benefit， serum MIF， NGAL levels， and adverse events were observed between the two groups. Results After treatment， the clinical benefit including pain relief， physical strength improvement， and weight gain of the observation group was significantly better than that of the control group. The tumor control rate of the observation group was significantly higher than that of the control group， and the difference was statistically significant（P<0.05）. The serum MIF and NGAL levels of the two groups were significantly decreased， and the serum MIF and NGAL levels in the observation group were lower than those in the control group. There was no statistical difference between the two groups in terms of fever， rash， and liver pain（P>0.05）. Conclusion Sodium alginate microspheres by TACE combined with DC-CIK significantly down-regulate the levels of serum MIF and NGAL in patients with primary liver cancer. The therapeutic effect is significant and the safety is good.

[Key words] Sodium alginate microspheres; Hepatic artery embolization chemotherapy; Serum macrophage migration inhibitory factor; Primary liver cancer; Neutrophil gelatinase-associated lipocalin

肝癌是目前世界上常见的恶性肿瘤之一，近年来，随着手术治疗手段不断改进，肝癌手术成功率不断提升。肝癌发病较为隐匿[1]，多数临床确诊已经为中晚期肝癌，所以在临床早期发现肝癌，对于患者的治疗以及预后具有积极的意义[2]。肝动脉栓塞化疗术（Transcatheter arterial chemoembolization，TACE）是临床治疗原发性肝癌的微创手段之一，对于患者的总生存期的延长具有重要意义。而对于晚期肝癌患者而言，由于常合并有肝硬化、门脉癌栓以及多处远端转移，无法开展手术治疗或射频治疗等，TACE手术就成为此类患者治疗的首选[3]。自体细胞免疫疗法（DC-CIK）是近年来新发展的免疫治疗方法，通过对患者癌细胞以及免疫功能的调节，降低肿瘤复发和转移，對于患者的治疗和预后具有积极的意义。血清巨噬细胞移动抑制因子（MIF）水平在一定程度上反映了患者的免疫功能[4]，而中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）则与患者的预后密切相关[5]。本研究将通过海藻酸钠微球经TACE联合DC-CIK治疗原发性肝癌的效果及对血清MIF、NGAL水平的影响，为临床治疗提供新思路。

1 资料与方法

1.1一般资料

选取2015年2月～2018年2月期间120例在我院住院的原发性肝癌患者为研究对象，其中，男57例，女63例，50岁以下患者27例，51～60岁患者51例，61～70岁患者42例，病程：0～1年患者59例，1～2年患者61例，胰腺癌TNM分期[6]，临床T分期，T2患者43例，T3患者51例，T4患者26例;临床N分期，N0患者60例，N1患者31例，N2患者26例，N3患者3例。按照随机原则，使用随机数字表将以上患者分为两组，每组患者60例，两组患者的性别、年龄、病程、癌症类型之间的差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。所有患者均签署知情同意书，并经医院伦理委员会论证通过。见表1。

纳入标准：①符合原发性肝癌诊断标准[7];②预计生存时间>6个月;③KPS[8]评分均≥70分;④对本次研究使用药物无用药禁忌;⑤患者知情且同意本研究方案。排除标准：①心、肝、肾功能严重不全者;②存在交流障碍的患者;③血常规异常患者;④不配合本研究方案患者。

1.2 研究方法

观察组患者采用海藻酸钠微球经TACE联合DC-CIK治疗，对照组患者仅采用海藻酸钠微球经TACE治疗，治疗8周。

海藻酸钠微球经TACE：对患者进行麻醉后，使用seldinger技术，经患者股动脉进行穿刺插管，在数字减影血管造影仪的确认下，对患者的腹腔动脉以及肠系膜上动脉进行造影检查，对患者肝脏的供血情况进行准确评估，明确病灶部位的血液供应后，选择性将导管插入到患者的供血动脉内，使用表阿霉素（浙江海正药业股份有限公司，国药准字H20183145）30 mg、氟尿嘧啶（天津金耀药业有限公司，国药准字H31020593）1000 mg以及碘化油形成乳液栓塞，使用海藻酸钠微球对患者进行栓塞。

DC-CIK治疗：使用血细胞分离机器对患者进行采血70～80 mL，对分离所得单核细胞进行进一步处理。对采集的悬浮细胞使用无血清细胞培养液重悬分层细胞和干扰素40 mL，加入事先调配的培养瓶中，培养瓶中事先放置有anti-HumanCD3以及RetroNetin，培养第3天，根据细胞的生长情况，适当补全培养液，培养第4天，将培养瓶中的淋巴细胞转至2个培养袋继续培养，则上述淋巴细胞经诱导扩增为CIK细胞。对于贴壁细胞，将贴壁细胞转至含有中性粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、人白介素4（rhlL-4）和FMS样酪氨酸激酶3配体（Flt3L）的培养基中继续培养，培养条件为37℃、5%二氧化碳，适时对培养基中相关因子进行补充，培养第6天进行负载肝癌共同抗原，促进患者树突细胞成熟，收集成熟的树突细胞，与患者的CIK细胞按照1：50比例进行共同培养，负载抗原的DC细胞将肿瘤抗原成分进行提交给CIK细胞，激活患者的CIK细胞，通过对患者的回输，使患者能够识别肿瘤细胞，从而进行杀灭癌细胞。在对患者进行TACE手术和DC-CIK间隔1周。

1.3 观察指标

1.3.1 两组患者临床受益比较  临床受益标准：患者临床反应中疼痛减缓、体力改善、体重增加中任意指标改善，并维持4周以上，则为临床受益。疼痛减缓：镇痛类药品用量降低50%以上或自我感觉疼痛降低50%以上;体重增加：体重增加在7%以上;体力改善：Karnofsky评分[9]增加20%以上。

1.3.2 两组患者临床疗效比较  疗效评价标准[10]：所有患者治疗1个月后，对患者开展疗效评价。患者疗效的评价采用实体瘤疗效评价标准（RECIST）进行。详细评价标准为患者所有靶病灶完全消失，定义为完全缓解（CR）;患者靶病灶在进行最长直径测量时，比刚入组时减少20%～30%，定义为部分缓解（PR）;患者靶病灶在进行最长直径测量时，比刚入组时增加20%～30%，定义为疾病进展（PD）;患者情况在部分缓解和病情进展之间，定义为疾病稳定（SD）。肿瘤控制率=（CR+PR）/总例数×100%。

1.3.3 两组患者血清MIF、NGAL水平比较  分别于治疗前和治疗后对患者进行静脉抽血4 mL，3000 r/min，15 min，取上清液，采用酶联免疫法对患者的血清MIF、NGAL表达水平进行比较。

1.3.4 不良反应比较  分别对两组患者治疗期间可能出现的发热、皮疹、肝区疼痛等情况进行比较。

1.4 统计学方法

所有数据均使用统计软件SPSS16.0进行统计分析。计量资料以（x±s）表示，组间比较采用t检验，计数资料以[n（%）]表示，采用χ2检验，等级资料采用秩和检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 結果

2.1 两组患者临床受益比较

观察组患者的临床受益情况，包括疼痛减轻、体力改善、体重增加显著优于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），见表2。

2.2 两组患者治疗效果比较

经过治疗，观察组患者的肿瘤控制率显著高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），见表3。

2.3 两组患者血清MIF、NGAL水平比较

治疗前，两组患者的血清MIF、NGAL水平之间差异不存在统计学意义（P>0.05），经过治疗后，两组患者的血清MIF、NGAL水平均显著下降，且观察组患者的血清MIF、NGAL水平低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），见表4。

2.4 两组患者不良反应比较

两组患者发生发热、皮疹、肝区疼痛比较差异无统计学意义（P>0.05）。见表5。

3讨论

据流行病学调查显示，我国肝癌患者的发病情况约占全世界的55%[11]，其中，肿瘤的侵袭和转移是目前患者死亡的重要原因。在过去20年的发展中，人们对于肝癌的发病机制、早期诊断手段以及治疗措施均有了较大的进展，但是在临床工作中，一些由于疾病进展较快、诊断时间较晚的肝癌患者往往无法进行手术，对于不能进行手术治疗的患者，TACE 就成为目前治疗的最佳选择之一[12]，该种手术方法可在影像学的支撑下，经导管将化疗药物直接作用于患者的病灶部位，通过抗癌药物以及药物微球直接对病灶部位血供进行切断，导致肿瘤病灶部位的局部坏死，进而达到治疗的目的。该种手术模式下，可最大限度保障患者的肝功能，但是从长远效果分析，该种手术措施肿瘤细胞清除率不理想，残留的肿瘤细胞以及周边组织，极易造成患者肿瘤细胞的复发。近年来新兴发展的DC-CIK技术[13]，则在一定程度上对患者的残存癌细胞进行自体免疫杀灭，病理生理学中，通过对患者免疫细胞的抗原培养，进行自体免疫树突细胞的回输，改善免疫杀伤作用，纠正晚期肝癌患者的免疫抑制状态，提升生命质量。通过对患者的自我免疫细胞的体外培养回输，提升局部免疫细胞水平，提升免疫细胞杀伤作用，对于残留肿瘤细胞的清除具有积极的意义。

本研究中，观察组患者的临床受益情况以及治疗效果显著优于对照组，提示通过对患者的微创栓塞联合DC-CIK治疗，不仅对患者的肿瘤细胞进行及时清除，同时对于肿瘤细胞周边和其他侵染性肝脏肿瘤细胞进行自我免疫杀灭，对于患者的治疗效果的提升具有积极的意义[14]。刘丽[15]对晚期肝癌患者的TACE和DC-CIK联合治疗，患者的治疗效果显著，患者预后生存率显著提升，与本研究一致。

另外，对肝癌患者的血清MIF以及NGAL的研究显示，观察组患者的治疗后血清MIF以及NGAL表达水平显著低于对照组，提示NGAL参与多种肿瘤细胞的发生发展，分子生物学认为NGAL属于脂质类运载蛋白的一种，其核酸位置位于患者的染色体9q34，大小为5869 bp，具有典型的脂质载脂蛋白β折叠桶结构，其远端可通过对金属蛋白酶分子形成显著的二硫键，形成异源二聚体，调节金属蛋白酶活性，进而调控患者的肿瘤生长。同时，NGAL与肿瘤患者的病理分期密切相关，其参与了患者肿瘤的侵染浸润[16]。MIF则是由患者的T淋巴细胞分泌产生的细胞因子，具有多种生物学功能，在炎症反应以及肿瘤的恶化过程中，MIF可作为重要纽带进行调节，其通过对炎性因子的促进分泌以及癌变促进作用，促进患者的疾病进展。另外，MIF还可通过对患者的信号级联传导通路的活化和分化，促进患者的肝细胞发生癌变的速度[17]。刘桃桃等[18]通过肝癌患者的疾病进展与血清MIF水平的研究中指出，患者的血清MIF水平与患者的疾病进展呈现正相关。张敏敏等[19]在对肝癌患者的诊断研究中指出，NGAL与患者的疾病进展密切相关，从侧面进一步验证了TACE联合DC-CIK治疗患者的治疗效果显著，与本研究一致。

综上所述，海藻酸钠微球经TACE联合DC-CIK显著下调原发性肝癌患者血清MIF、NGAL水平，治疗效果显著，安全性较好，建议在临床进行推广。

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（收稿日期：2019-03-26）