枸杞多糖对衰老小鼠皮肤组织总抗氧化能力及脂褐质的影响

王彩霞

宁夏医科大学中医学院，宁夏 银川 750004

枸杞属茄科落叶灌木，是我国传统的“药食同源”中药材，含有多种营养成分和微量元素[1]。《神农本草经》曾记载：“枸杞久服，坚筋骨，轻身不老[2]”。枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharde，LBP)是从枸杞中提取出来的一种多糖，是枸杞发挥药效的主要成分之一[1]，因其具有多种生物活性越来越受到人们的关注。研究表明，枸杞多糖具有降血脂、降血糖、调节免疫、抗肿瘤、抑制细胞凋亡及延缓衰老等广泛的药理学作用[3]。本研究观察衰老模型小鼠皮肤组织中T-AOC活性和LF含量，从而探究枸杞多糖对D-半乳糖致亚急性衰老小鼠皮肤衰老程度的影响。

1 仪器与材料

1.1 动物 KM 小鼠50只，雌性，体重(20±2)g，级别：SPF。实验动物均购自宁夏医科大学实验动物中心，分笼饲养，自由饮食，规律光照，无不良影响因素，适应性饲养1周后开始实验。

1.2 材料 D-半乳糖(银川祺宝生物有限公司)，枸杞多糖(银川市农科院提供)，总抗氧化能力(T-AOC)、脂褐质(LF)试剂盒均购于南京建成生物工程研究所。

1.3 仪器 ELx808全自动酶标仪(美国佰腾)，DY89-Ⅱ电动玻璃匀浆机(上海将来实验设备有限公司)，TDL-5-A型离心机(上海安亭科学仪器厂)，测定仪器为722分光光度计(上海第三分析仪器厂)，DK-420S型三用恒温水箱(上海精宏实验设备有限公司)，BLG10电子秤(上海精科天美科学仪器有限公司)。

2 方法

2.1 动物分组、造模及给药 50只小鼠随机分为5组：空白对照组、模型组、枸杞多糖低、中、高剂量组，每组10只。模型组及给药组每日颈背部皮下注射D-半乳糖(1000 mg/kg)，建立亚急性衰老模型。空白对照组颈背部皮下注射等量生理盐水。低、中、高剂量组在注射 D-半乳糖的同时灌服枸杞多糖5 mg/kg/d、10 mg/kg/d、20 mg/kg/d，给药容积20 mL/kg。模型组、正常组灌服等量生理盐水。以上操作1次/d，连续42 d。

2.2 取材及指标检测 连续给药42 d后，小鼠断颈处死，速取小鼠背部两肩胛部之间脱毛区域的皮肤，面积为3 cm×3 cm，并迅速将取下的皮肤冰冻保存，待用。取脱毛后背部皮肤组织块0.5 g左右，量筒量取该组织块9倍重量的预冷生理盐水匀浆，浆液以3500 r/min的速度离心20 min，取其上清液分别按照试剂盒说明书测定小鼠总抗氧化能力(T-AOC)及脂褐质(LF)含量。

2.3 统计学处理 实验数据用SPSS13.0统计软件进行处理，各组实验参数以表示，组间比较按方差分析进行显著性检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

3 结果

与空白对照组比较，模型组小鼠皮肤组织T-AOC活性明显降低(P<0.01)，LF含量明显升高(P<0.01)。相对于模型组，枸杞多糖低、中、高剂量组小鼠皮肤T-AOC活性均显著升高(P<0.05，P<0.05，P<0.01)，LF含量明显降低(P<0.05，P<0.01，P<0.01)。表明枸杞多糖低、中、高剂量均能提高衰老模型组小鼠皮肤组织T-AOC活性，降低LF含量。详见表1。

组别nT-AOC/活力单位LF /μg/g空白对照组1045.17±2.340.685±0.287模型组1021.83±1.58▲0.930±0.325▲枸杞多糖低剂量组1030.07±3.75*0.879±0.268*枸杞多糖中剂量组1032.36±1.82*0.731±0.145**枸杞多糖高剂量组1036.65±2.69**0.697±0.136**

注：与空白对照组比较,▲P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。

4 讨论

衰老是生命过程中正常而又复杂的生理现象，皮肤作为人体最大的器官，其衰老是人类生命历程中不可抗拒的规律[4]。皮肤老化分为时呈老化与光老化，前者是内源性因素所致，是衰老的根本，受遗传、内分泌等生理进化因素影响；后者是外源性因素所致，是皮肤衰老的重要影响条件，受紫外线、季节、生活压力、生活习惯、疾病等影响。皮肤衰老是内源性因素与外源性因素共同作用的结果。其显著特征是皮肤出现松弛及皱纹，暴露处皮肤粗糙、弹性降低、血管扩张、色素沉着、表皮角化不良等[5]。

现代医学对衰老的解释有不同学说，其中较为公认并得到广泛认可的是自由基学说，它认为皮肤衰老是自由基产生和消除发生障碍的结果。机体每天代谢时产生的自由基在正常情况下可被清除，但随着年龄的增长，氧自由基加速形成。自由基形成后，不断攻击细胞膜中的不饱和脂肪酸，形成过氧化脂质(Lipide Peroxide，LPO)，后者则与膜脂、膜蛋白聚合，交联形成脂褐质(LF)并沉积于组织中，造成细胞功能障碍，加速细胞衰老[7]。因此，LF含量的高低间接反应了机体细胞受自由基损伤的严重程度。健康生物体内有抗氧化的酶系统和非酶系统，其中酶系统包括超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)等，非酶系统有VitE，生育酚，β胡萝卜素，谷胱甘肽，白蛋白等，这些物质均可及时处理氧自由基。因此，抗氧化力的测定引起人们的广泛关注。而总抗氧化能力(T-AOC)是一个全面反映皮肤组织抗氧化能力的良好指标，它的活力高低可全面反映皮肤组织中酶与非酶全部的抗氧化物。

研究结果显示，模型组小鼠皮肤细胞损伤，代谢紊乱，皮肤T-AOC活性明显降低，LF含量显著升高。枸杞多糖低、中、高剂量均可明显提高D-半乳糖致亚急性衰老模型小鼠皮肤组织T-AOC活性，降低皮肤组织LF含量，提示枸杞多糖能从一定程度上提高抗氧化能力，清除体内自由基，减轻或抑制脂质过氧化损伤，从而起到延缓衰老的作用。