乳腺癌患者PTPRO、HER2和PIASy表达情况

王冲，邱卫强

（驻马店市中心医院医学检验科，河南 驻马店 463000）

乳腺癌（breast cancer,BC）为女性常见恶性肿瘤之一，近年来该病在女性中发病率逐年上升，且有年轻化趋势，研究显示乳腺癌平均发病年龄为45.8岁,其发病率与病死率分别为每年11.19/10万及9.97/10万左右[1]。选择特异性肿瘤分子标志物，以建立灵敏高效的检测方法是提高乳腺癌诊疗水平、改善患者预后的关键，其中受体O型蛋白酪氨酸磷酸酶 （protein epidermal growth factor receptor,PTPRO）为细胞增殖分化、代谢、细胞与细胞间通讯、基因转录及细胞存活等重要信号通路的媒介，参与细胞生长、分化、分裂周期、癌基因转化等多种生物学过程[2,3]。表皮生长因子受体2（human epidermal growth foctor receptor 2,HER2）则是具有络氨酸激酶活性的细胞跨膜受体糖蛋白,与乳腺癌异常增生、局部浸润与转移等密切相关[4]。激活的STAT蛋白抑制因子 （protein inhibitor of activated STAT，PIASy）同众多转录因子发生作用，参与基因转录调控与细胞信号通路调控,在肿瘤发生发展中有重要功能[5]。本文主要分析乳腺癌患者中PTPRO、HER2、PIASy表达水平及其临床意义,报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2016年5月至2018年4月我院收治的乳腺癌患者56例，纳入标准：⑴均为单侧乳腺病变，且有明确的病理学确诊结果；⑵未接受放化疗或内分泌治疗；⑶接受乳腺癌根治术、改良根治术或保乳手术,腋窝淋巴结清扫数目超过10个，对本研究内容知情且签署知情同意书。排除标准：⑴其他部位乳腺转移癌或双侧乳腺癌者；⑵已行新辅助化疗、放疗或内分泌治疗者；⑶合并其他恶性肿瘤或重心血管疾病。年龄26～73岁，平均（49.15±5.08）岁；TNM 分期：Ⅰ期 11 例，Ⅱ期 26例，Ⅲ期19例；有淋巴结转移22例，无淋巴结转移34例。

1.2 方法

1.2.1 标本采集及处理 取乳腺癌患者的乳腺癌癌组织、癌旁组织（距离乳腺癌组织边缘5 cm以上，均经病理证实为无癌变标本）。对采集的标本以4%中性甲醛缓冲液固定,石蜡包埋后,切片成4 μm/片,以0.01 mol/L柠檬酸盐缓冲液抗原热修复，依据EnVision二步法 （试剂盒购自上海长岛生物技术有限公司）进行染色，PTPRO与HER2抗体工作浓度均为1：100，应用DAB（试剂盒购自中山金桥生物有限公司）显色，苏木素对比染色，透明封固，后以鼠抗人即用型单克隆抗体血清（上海麦莎公司）作为代替对照，PBS代替一抗作为空白对照。

1.2.2 结果判读PTPRO及PIASy细胞浆及细胞核出现明显黄色至棕黄色颗粒为阳性细胞信号，采用染色强度（0～3 分）、阳性细胞数（0～4 分）与两者积分乘积的半定量计数法,最后得分1～3分为阴性，＞3分为阳性。HER2：阳性表达定位于细胞膜，细胞膜无染色或≤10%的肿瘤细胞染色为阴性；＞10%肿瘤细胞呈弱染色,且细胞膜染色不完整，为阴性（+）；＞10%细胞呈弱至中度染色，细胞膜染色轻至中度完整，为弱阳性（++），＞10%肿瘤细胞呈细胞膜强染色为阳性（+++），弱阳性及阳性占比之和为HER2阳性率。

1.3 统计学方法 采用SPSS19.0软件处理数据，计数资料以%表示，采取χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 PTPRO、HER2、PIASy表达水平 乳腺癌患者癌组织PTPRO阳性率低于癌旁组织,而HER2、PIASy阳性率高于癌旁组织，P＜0.05。见表1、图1。

表1 PTPRO、HER2、PIASy表达水[n(%)]

图1 PTPRO、HER2、PIASy表达水平

2.2 PTPRO、HER2、PIASy表达水平与临床病理参数的关系 无淋巴结转移、PR阴性表达者PTPRO阳性率高于淋巴结转移、PR阳性表达者，临床分期Ⅲ～Ⅳ期、PR阳性表达者的HER2阳性率高于临床分期Ⅰ～Ⅱ期、PR阴性表达者，临床分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移者PIASy阳性率高于临床分期Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移者，P＜0.05。见表2。

表2 PTPRO、HER2、PIASy表达水平与临床病理参数的关系[n(%)]

3 讨论

最新癌症统计数据显示,乳腺癌在国内女性中发病率位居肿瘤首位，死亡率占第4位，早期诊断为提高乳腺癌患者生活质量的重要手段[6]。PTPRO为新发现的潜在抑癌基因,作为蛋白络氨酸激酶PTPs家族成员，PTPRO基因启动子甲基化在乳腺癌发生发展中起着重要作用,同乳腺癌预后有密切关系，可作为独立的预后生物学指标[7]。HER2也是参与乳腺癌病理进展的重要因子，HER2过度表达可能在乳腺癌异常增生、致瘤性及局部浸润、转移等方面发挥重要促进作用[8]。PIASy则是一种可抑制信号传导与转录激活蛋白转录活性的蛋白质，研究发现其对乳腺癌具有较高的诊断灵敏度与准确度[9]。

本研究以癌旁组织作为对照,发现乳腺癌患者癌组织PTPRO阳性率低于癌旁组织,而HER2阳性率高于癌旁组织，这与李文梅等[10]的报道结果相似,表明在乳腺癌患者中,PTPRO呈低表达,而HE R2呈高表达状态。PTPRO为受体型蛋白络氨酸磷酸酶家族重要成员,该基因定位于人染色体12p1 2-p13,编码全长由1215个氨基酸组成的蛋白质,包含1个由8个fibronec-tinⅢ样结构域重复构成的胞外区，1个跨膜区，1个由活性催化区及活性调节区构成的胞内结构域[11]，在细胞周期中，受E2F1及miR-17-92协同调控，参与调节神经发育、肾脏结构与功能、单核巨噬细胞分化、淋巴细胞增殖与肿瘤形成[12,13]，HER2则定位于人染色体17q21，参与细胞生长因子信号传导过程,若乳腺癌患者肿瘤细胞中HER2高表达，则会刺激细胞生长转移，因此在乳腺癌患者中HER2高表达，可能与乳腺癌浸润、侵袭性增强、复发与转移、药物治疗抵抗等有关联[14]。本研究中癌组织的PIASy阳性率也高于癌旁组织,这与朱杰等[15]的研究结果一致,表明在乳腺癌患者中PIASy呈高表达，PIASy蛋白最早是在STAT信号通路调控时发现的,其可抑制STAT蛋白转录活性，PIASy经sumo化促进p73蛋白酶体降解,高表达的PIASy可抑制p21转录，继而调控p73α转录活性,在缺氧时PIASy途径可抑制STRT1基因转录，继而促进肿瘤转移。

此外本研究也进一步对比了不同临床病理患者上述指标表达水平，结果发现无淋巴结转移、PR阴性表达者PTPRO阳性率高于淋巴结转移、PR阳性表达者,临床分期Ⅲ～Ⅳ期、PR阳性表达者的HE R2阳性率高于临床分期Ⅰ～Ⅱ期、PR阴性表达者，临床分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移者PIASy阳性率高于临床分期Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移者,表明PTPRO、HER2、PIASy表达水平与乳腺癌患者临床病理参数有密切关系。PTPRO在肿瘤发展过程中发挥重要抑制性调节作用的磷酸化酶,其表达下调会导致肿瘤细胞发生浸润与转移,第十七届全国临床肿瘤学大会[16]提出，PTPRO基因启动子甲基化在乳腺癌发生发展中起着重要作用,可能与乳腺癌预后有关，并将PTPRO基因甲基化作为乳腺癌临床诊断的新颖而无创性分子生物学指标。PIASy在缺氧环境下则能通过抑制SIRT1基因而促进肿瘤转移，HER2也参与乳腺癌浸润和转移等生物学过程,因此HER2、PIASy的激活也是乳腺癌发展的潜在因素。

综上所述，乳腺癌患者癌组织中PTPRO低表达，HER2、PIASy呈高表达,三者与临床病理参数均有一定关联，可对其进行检测，指导临床医师制定个体化治疗方案，提高乳腺癌的整体诊疗水平。