呼吸道感染分离金黄色葡萄球菌的耐药性分析

杨波 张灿灿

[摘要] 目的 了解临床感染分离的金黄色葡萄球菌的耐药性，为其感染诊治选择合理抗菌药物提供理论参考。 方法 将 2015年3月～2018年5月本院送检临床感染标本，按照《全国临床检验操作规程》标准进行金黄色葡萄球菌分离，接种后于36℃、5% CO2环境培养、纯化、鉴定，K-B法判别药敏结果，并采用PCR检测耐药基因。 结果 840份临床感染标本共分离出金黄色葡萄球菌168株，金黄色葡萄球菌对青霉素G、阿莫西林、氯霉素、头孢噻肟、红霉素、四环素、苯唑西林、庆大霉素、环丙沙星、克林霉素、诺氟沙星、左氧氟沙星、头孢吡肟、万古霉素的耐药率分别为89.29%、83.33%、69.05%、61.90%、53.57%、41.67%、33.33%、28.57%、26.19%、23.81%、22.62%、14.29%、2.38%和0，中介率分别为4.76%、5.95%、9.52%、10.71%、15.48%、20.24%、13.10%、53.57%、42.86%、21.43%、19.05%、11.90%、11.90%和0，敏感率分别为5.95%、10.71%、21.43%、27.38%、30.95%、38.10%、53.57%、17.86%、30.96%、54.76%、58.33%、73.81%、85.71%和100.00%，在抗感染治疗中可优先考虑使用万古霉素等敏感药物。 结论 临床感染金黄色葡萄球菌对常用抗生素有耐药性，应根据药敏试验结果正确选用有效抗菌药物进行治疗，对减少细菌耐药性的发生有重要意义。

[关键词] 金黄色葡萄球菌;耐药基因;耐药性;K-B法

[中图分类号] R725.6          [文獻标识码] B          [文章编号] 1673-9701（2020）02-0139-04

Analysis of drug resistance of staphylococcus aureus isolated from respiratory tract infection

YANG Bo   ZHANG Cancan

Department of Laboratory， Xinjiang Production and Construction Corps Fourth Division Hospital， Yining   835000，China

[Abstract] Objective To understand the drug resistance of staphylococcus aureus isolated from clinical infection and provide theoretical reference for reasonable use of antibiotics in diagnosis and treatment of infection. Methods Staphylococcus aureus were isolated according to national clinical laboratory procedures from Clinical infection specimens submitted by our hospital from March 2015 to May 2018. After inoculation， culture， purification and identification at 36℃ and 5% CO2 were performed. The K-B method was applied to distinguish sensitivity， and PCR was used to detect resistant genes. Results Among 168 strains of staphylococcus aureus isolated from 840 clinical infection specimens， resistance rates of penicillin G， amoxicillin， chloramphenicol， cefotaxime， erythromycin， tetracycline， oxacillin， gentamicin， erythromycin， Ciprofloxacin， norfloxacin， levofloxacin， cefepime， vancomycin were 89.29%， 83.33%， 69.05%， 61.90%， 53.57%， 41.67%， 33.33%， 28.57%， 26.19%， 23.81%， 22.62%， 14.29%， 2.38%， and 0 respectively;intermediate susceptibility rates were 4.76%， 5.95%， 9.52%， 10.71%， 15.48%， 20.24%， 13.10%， 53.57%， 42.86%， 21.43%， 19.05%， 11.90%， 11.90%， and 0 respectively. Sensitivity rates were 5.95%， 10.71%， 21.43%， 27.38%， 30.95%， 38.10%， 53.57%， 17.86%， 30.96%， 54.76%， 58.33%， 73.81%， 85.71%， and 100.00% respectively. Priority should be given to sensitive drugs such as vancomycin in anti-infection treatment. Conclusion Staphylococcus aureus is resistant to commonly used antibiotics in clinical infection. Selecting effective antibiotics according to the result of drug sensitive test is of great significance to reduce the occurrence of bacterial resistance.

[Key words] Staphylococcus aureus; Resistant genes; Drug resistance; K-B method

呼吸道感染通常与细菌、病毒、支原体、真菌等病原微生物有关[1]，一年中任何季节均可发病，多为婴幼儿、老年人与免疫功能降低的人群感染，临床感染主要有鼻炎、扁桃体炎、支气管炎及肺部感染等[2]。其中金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为呼吸道感染常见致病菌之一，是医院和社区获得性感染的一种主要致病菌，其感染可引起化脓性皮肤组织感染、肺炎等，重症者可引起脓毒血症、中毒性休克综合征等危及患者生命。

金黄色葡萄球菌为革兰染色阳性球菌，凝固酶阳性，分解葡萄糖、需氧或兼性厌氧，自然界广泛分布，人群约20%的鼻腔中有金黄色葡萄球菌定植，30%的人可携带此菌，因此金黄色葡萄球菌是导致感染的危险因素之一[3]。金黄色葡萄球菌含有多种酶类和毒素，致病力较强，且随着广谱抗菌药物的广泛使用，其感染逐年增多，临床出现了耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）分离株及多重耐药菌菌株，给临床感染治疗带来困难。为了解医院临床感染金黄色葡萄球菌的耐药情况，本研究拟对住院患者感染送检标本进行分离培养，并检测耐药基因，为临床感染诊治选择合理抗菌药物提供理论参考，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 菌株来源  840份临床送检标本采自新疆生产建设兵团第四师医院2015年3月～2018年5月送检临床标本。送检标本依据《全国临床检验操作规程》进行细菌培养及分离纯化[4]，采用细菌鉴定仪鉴定金黄色葡萄球菌，剔除同一患者的重复菌株。质控菌株为金黄色葡萄球菌ATCC25923由原卫生部临床检验中心提供。

1.1.2 主要试剂和仪器  细菌鉴定仪（VITECK-2）购于法国生物梅里埃公司;PCR扩增仪（9700型）购于美国ABI公司;凝胶成像仪购于英国Endorf公司;Taq DNA聚合酶购于美国Sigma公司;K-B纸片购于普利莱（中國）公司;DNA提取试剂盒购于英国MBI Fermentas公司;PCR产物回收试剂盒购于北京Trans Gen生物公司;麦康凯培养基平板购于德国Qiagen公司。

1.2 方法

1.2.1 标本处理  采集送检感染标本，存于无菌容器中，接种于麦康凯培养基平板，36℃下培养24 h，采集单菌落进行细菌分离。

1.2.2 药敏试验  采用K-B纸片扩散法分析金黄色葡萄球菌的药敏情况，根据2016年版CLSI标准判定结果，对临床分离株金黄色葡萄球菌敏感度进行判定，分为分别计算每种抗菌药物的敏感率（S）、中介率（I）及耐药率（R）[5]。

2 结果

2.1 金黄色葡萄球菌标本来源的分布情况

2015年3月～2018年5月新疆生产建设兵团第四师医院送检临床感染标本840份，共分离出金黄色葡萄球菌168株，其标本类型主要有：痰液62株（占36.9%），分泌物32株（占19.1%），血液25株（占14.9%），尿液19株（占11.3%），其他30株（占17.9%）;2017年分离出金黄色葡萄球菌44株，其标本类型主要有：痰液18株（占40.9%），分泌物9株（占20.5%），血液4株（占9.09%），尿液4株（占16.3%），其他9株（占20.5%）;2018年临床分离出金黄色葡萄球菌43株，其标本类型主要有：痰液12株（占27.9%），分泌物7株（占16.3%），血液8株（占18.6%），尿液7株（占16.3%），其他9株（占20.9%）（表1）。

2.2 金黄色葡萄球菌在各科室的分布情况

新疆生产建设兵团第四师医院送检临床感染标本840份，共分离出金黄色葡萄球菌168株，分离率为20.00%;2017年送检感染标本208株，分离出金黄色葡萄球菌40株，分离率为19.23%，内科、骨创伤科、ICU、儿科、其他科室的检出率分别为36.06%、22.12%、27.88%、6.73%和7.21%;2018年送检感染标本212株，分离出金黄色葡萄球菌44株，分离率为20.75%，内科、骨创伤科、ICU、儿科、其他科室的检出率分别为38.68%、29.25%、17.45%、9.91%和4.72%。见表2、3。

2.3 金黄色葡萄球菌的耐药性

通过K-B法测定临床分离株金黄色葡萄球菌的耐药性，结果见表4。金黄色葡萄球菌对青霉素G、阿莫西林、氯霉素、头孢噻肟、红霉素、四环素、苯唑西林、庆大霉素、环丙沙星、克林霉素、诺氟沙星、左氧氟沙星、头孢吡肟、万古霉素的耐药率分别为89.29%、83.33%、69.05%、61.90%、53.57%、41.67%、33.33%、28.57%、26.19%、23.81%、22.62%、14.29%、2.38%和0，中介率分别为4.76%、5.95%、9.52%、10.71%、15.48%、20.24%、13.10%、53.57%、42.86%、21.43%、19.05%、11.90%、11.90%和0，敏感率分别为5.95%、10.71%、21.43%、27.38%、30.95%、38.10%、53.57%、17.86%、30.96%、54.76%、58.33%、73.81%、85.71%和100.00%。

3 讨论

呼吸道感染是临床常见的一种疾病，是包括普通感冒，病毒性咽炎、慢性支气管炎、肺炎等最常见的感染性疾病，患者感染的病原体以细菌最为常见[6]。金黄色葡萄球菌是住院患者呼吸道感染最主要的病原菌之一，其余依次为凝固酶凝阴性葡萄球菌和革兰阴性杆菌[7]。金黄色葡萄球菌的含凝固酶、透明酸酶、耐热核酸酶等致病因子，还含有肠毒素、葡萄菌溶素、毒性休克综合征、杀白细胞素等因素，可引起化脓感染，可通并过空气传播，引起院内在医患者之间感染[8]。该菌为革兰阳性球菌，致病性强，引发急性感染，患者如若未及时有效治疗，感染可扩散周围组织或器官。金黄色葡萄球菌引发患者呼吸道感染在有基础疾病的情况下，该类患者病情常较危重，抵抗力差，病情重，因而需引起临床一线人员的关注[9]。

本研究840份临床标本，其标本类型主要有：痰液62株（占36.9%），分泌物32株（占19.1%），血液25株（占14.9%），尿液19株（占11.3%），其他30株（占17.9%）共分离出金黄色葡萄球菌168株，金黄色葡萄球菌分离率为20.00%。K-B纸片法显示金黄色葡萄球菌对青霉素G和阿莫西林耐药率>80.00%，对头孢吡肟较敏感，万古霉素敏感率为100.00%。因此临床治疗金黄色葡萄球菌感染时应结合药敏试验优先考虑使用万古霉素，但大量使用万古霉素的患者可能继发真菌性感染和肾功能损害，因此可选用头孢吡肟作为主要治疗药物。

金黄色葡萄球菌是机体感染的重要病原体之一，在上世纪80年代被确诊为化脓性感染的主要致病因素，在临床感染性疾病的发病率与病死率均呈逐年升高趋势[10]。其在临床抗感染治疗中易产生耐药。金黄色葡萄球菌自身含有多种耐药机制，其对β-内酰胺类抗菌药物耐药主要原因在于菌株染色体中存在ermA基因[11]。ermA基因大小421 bp，是MRSA耐药性的基因，来自于凝固酶阴性葡萄球菌或肠球菌属的外源基因，于转座子和R质粒至凝固酶阳性的金黄色葡萄球菌，结合在染色体第10节段[12]。ermA基因复合体由结构基因ermA、抑制基因ermI和调节基因ermR1构成，ermR1可分泌ERMR1蛋白，减少ERMI蛋白对ermA的产生，编码新型青霉素结合蛋白2a（PBP2a），与青霉素结合蛋白比较，降低PBP2a对β-内酰胺类药物的亲和性，其可代替正常的青霉素结合蛋白（PBP）参与到细菌肽聚糖和细胞壁的合成過程中，降低抗菌作用，使细菌加速生长、繁殖[13]。致病菌在细胞间的接触感染可使致病菌的传递感染，致使宿主的感染呈持续性或反复感染，以致抗菌药物对致病菌无效[14]。

本研究中分离标本以痰液为多，正确的痰液培养是了解呼吸道感染病原菌及其药敏性的前提，为患者感染提供合理用药，但细菌培养周期较长，临床应根据常见病原菌的分布与药敏试验，合理足量尝试经验性治疗，以控制病情。细菌耐药性的产生是自然选择的结果[15]，但大量广谱抗生素则加快了耐药性的产生，因此应加强对金黄色葡萄球菌的耐药性监测，合理应用抗生素。

综上所述，对呼吸道感染患者实施痰菌培养及药敏试验，有利于选用合适的抗菌药物对呼吸道感染患者开展有效治疗，以提升呼吸道感染患者的临床抗菌药物的用药合理性。

[参考文献]

[1] 吴林杰，陈孟金.杭州地区2017年呼吸道感染2337例病原体检测结果分析[J].中国乡村医药，2019，26（10）：56-57.

[2] 孟圆，孔德民，罗红.金黄色葡萄球菌耐药基因及新型抗菌药物的研究进展[J].中国微生态学杂志，2019，31（5）：595-600.

[3] Hunter C，Rosenfield L，Silverstein E，et al.Methicillin-resistant Staphylococcus aureus infections：A comprehensive review and a plastic surgeon′s approach to the occult sites[J]. Plast Reconstr Surg，2016，138（2）：515-523.

[4] 吴德群，巢国祥.金黄色葡萄球菌耐药基因分析及多位点序列分子分型[J].临床检验杂志，2014，32（7）：513-518.

[5] 赵志刚，邱添，王凯飞，等.136例医院获得性铜绿假单胞菌血流感染的临床分布特征及耐药性分析[J].中华全科医学，2016，14（8）：1269-1271.

[6] 李桂秋，魏影，余治健，等.新型四环素药物Eravacycline体外诱导金黄色葡萄球菌耐药16S rRNA基因突变位点分析[J].中国医学创新，2019，16（18）：143-146.

[7] 侯素君，王均梅，战祥彩，等.2014-2018年骨科伤口分泌物病原菌分布及耐药趋势分析[J].国际检验医学杂志，2019，40（15）：1857-1860.

[8] 马亮，严良烽，曾慧，等.呼吸道感染患者病原性细菌的临床检验分析[J].中国现代医生，2017，55（30）：115-117.

[9] 孟圆，孔德民，罗红.金黄色葡萄球菌耐药基因及新型抗菌药物的研究进展[J].中国微生态学杂志，2019，31（5）：595-600.

[10] 何文迪，陈新江，吴立山，等.金黄色葡萄球菌前噬菌体PT1028ORF001基因的生物信息学分析及原核表达[J/OL].生物技术，2019，（4）：336-342.

[11] Weterings V，Bosch T，Witteveen S，et al.Next-generation sequence analysis reveals transfer of methicillin resistance to a methicillin-susceptible Staphylococcus aureus strain that subsequentlycaused A methicillin-resistant Staphylococcus aureus outbreak：a descriptive study[J]. J Clin Microbiol，2017， 55（9）：2808-2816.

[12] Dotel Ravindra，O'Sullivan Matthew VN，Davis Joshua S，et al.Molecular epidemiology of methicillin-resistant staphylococcus aureus isolates in new south Wales，Australia，2012-2017[J]. Infection Disease Health，2019，24（3）：1102-1108.

[13] 谢艳斌.不同来源金黄色葡萄球菌的分布特征及耐药性分析[J].检验医学与临床，2018，15（20）：3082-3084， 3088.

[14] 祝丙华，孔雨薇，张蓉，等.2013-2017年老年病医院金黄色葡萄球菌临床分布及耐药性分析[J/OL].中华医院感染学杂志，2019（16）：2401-2404，2413.

[15] 李海燕，杨松鹏，曹婷婷，等.医院获得性金黄色葡萄球菌mecA基因的表达及耐药性分析[J].河南医学研究，2018，27（18）：3282-3285.

（收稿日期：2019-09-26）