肺炎支原体肺炎患儿外周血CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平与心肌损伤的关系

崔莹莹，王 琳，王玲玲

肺炎支原体肺炎(mycoplasma pneumoniae pneumonia, MPP)是肺炎支原体引起的肺部急性炎症，在婴幼儿及儿童中发病率较高，其具有病程时间长、易反复等临床特征，但MPP的具体发病机制尚未完全阐明[1]。既往研究表明，肺炎支原体可通过激活机体免疫系统进而引起应答反应，其中炎症病理改变参与MPP发病过程[2]。因而，探寻MPP发生及发展相关血清因子特异性改变对提高临床诊疗效果具有重要意义。单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemottractant protein 1, MCP-1)又称为CC类趋化因子配体2(C-C motif chemokine ligand 2, CCL2)，研究显示CCL2可在重度颅脑损伤患者神经炎性反应过程中发挥促炎作用并可用于判断脑损伤严重程度[3]。巨噬细胞炎性蛋白1β(macrophage inflammatory protein-1β, MIP-1β)又称为CC类趋化因子配体4(C-C motif chemokine ligand 4, CCL4)，研究表明CCL4可促使细胞释放促炎介质进而促进感染疾病或炎性反应的发生及发展[4]。有相关研究表明，肝炎患者外周血中CXC趋化因子配体8(C-X-C motif chemokine ligand 8, CXCL8)与CXC趋化因子配体9(C-X-C motif chemokine ligand 9, CXCL9)水平均明显升高，且能够促进炎性反应发生过程[5]。关于MPP患儿外周血CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平变化的研究相对较少。同时肺炎支原体感染还能够损伤患儿的肾脏、肝脏等重要脏器，并能造成不同程度的心肌损伤。还有研究表明，部分MMP患儿会出现心律失常等临床表现，且严重影响患儿生长发育[6]。有相关研究表明，CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9均与心律失常的发生及发展有关[7]。因此，本研究主要探讨MPP患儿外周血中CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平的变化，并分析其与MPP患儿心律失常的关系，为进一步揭示MPP发病机理提供参考。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2018年3月—2019年5月我院收治的MPP患儿72例为研究对象。其中男42例，女30例；年龄为1～10(5.16±1.62)岁。①纳入标准：均符合MPP的相关诊断标准[8]，且经临床症状及影像学检查确诊；血清抗-MP-IgM呈阳性且痰培养为阴性；均无免疫系统性疾病；近期未服用皮质激素；均无呼吸道及全身性感染疾病；确诊前均无心律失常或心脏疾病史。②排除标准：近期使用免疫抑制剂患儿；合并慢性或急性肝脏疾病患儿；合并肾病综合征患儿；合并支气管哮喘患儿；合并变应性鼻炎及自身免疫性疾病患儿。根据MPP患儿疾病严重程度分为MPP轻症组54例与MPP重症组18例[9]。根据心电图检测结果，将MPP患儿分为非心律失常组60例和心律失常组12例，其中窦性心律过速5例，房性或室性期前收缩2例，心脏传导异常1例，室性心动过速2例，窦性心动过缓2例。另选取同期门诊体检健康儿童35例为对照组，其中男18例，女17例；年龄为10个月～8(4.85±1.21)岁。对照组与MPP组的性别和年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经医院医学伦理委员会批准，受试儿童家属均知情且签署知情同意书。

1.2方法

1.2.1采集血液样本：分别采集所有受试儿童外周静脉血10 ml，置于无菌Eppendorf试管内，冷冻离心机离心，离心机转速为3000 r/min，时间为10 min，离心后吸取上层血清置于另一试管内，置于-80℃超低温冰箱保存待测。

1.2.2外周血CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平检测：采用ELISA法检测外周血CCL2、CCL4、CXCL9水平，采用固相夹心ELISA法检测CXCL8水平，使用多功能酶标仪(美国Bio-tek公司)进行检测，检测试剂盒均购自武汉默沙克生物科技有限公司。

1.2.3血清急性时相蛋白水平检测：血清急性时相蛋白包括C-反应蛋白(C-reactive protein, CRP)、α1-酸性糖蛋白(α1-acid glycoprotein, α1-AGP)、触珠蛋白(haptoglobin, HP)、铜蓝蛋白(ceruloplasmin, CP)，采用速率散射比浊法检测血清CRP、α1-AGP、HP、CP水平，使用ARRAAY360特定蛋白分析仪(美国Beckman公司)进行检测。

1.2.4心电图及心肌酶谱指标检测：采用12导联心电工作站对所有患儿行24 h动态心电图检测并记录心律失常发生情况。心肌酶谱指标主要包括乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)、α-羟丁酸脱氢酶(α-hydroxybutyrate dehydrogenase, α-HBDB)、磷酸肌酸激酶(creatine kinase, CK)、磷酸肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme-MB, CK-MB)，使用CM-800全自动生化分析仪(基蛋生物科技股份有限公司)进行检测。

2 结果

2.1血清CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平比较 对照组、MPP轻症组和MPP重症组的血清CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平比较差异均有统计学意义(P<0.05)。MPP轻症组和MPP重症组的血清CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平均显著高于对照组(P<0.05)，且MPP重症组显著高于MPP轻症组(P<0.05)。见表1。

表1 3组研究对象血清CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平比较

注：对照组为体检健康儿童；MPP为肺炎支原体肺炎，CCL2为CC类趋化因子配体2，CCL4为CC类趋化因子配体4，CXCL8为CXC趋化因子配体8，CXCL9为CXC趋化因子配体9；与对照组比较，aP<0.05；与MPP轻症组比较，cP<0.05。

2.2血清急性时相蛋白水平比较 对照组、MPP轻症组和MPP重症组的血清CRP、α1-AGP、HP、CP水平比较差异均有统计学意义(P<0.05)。MPP轻症组和MPP重症组的血清CRP、α1-AGP、HP、CP水平均显著高于对照组(P<0.05)，且MPP重症组显著高于MPP轻症组(P<0.05)。见表2。

表2 3组研究对象血清急性时相蛋白水平比较

注：对照组为体检健康儿童；MPP为肺炎支原体肺炎，CRP为C-反应蛋白，α1-AGP为α1-酸性糖蛋白，HP为触珠蛋白，CP为铜蓝蛋白；与对照组比较，aP<0.05；与MPP轻症组比较，cP<0.05。

2.3MPP患儿血清CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9与急性时相蛋白的相关性分析 Pearson法分析显示，CCL2、CCL4均与CRP、α1-AGP、HP、CP呈显著正相关(P<0.05或P<0.01)。CXCL8、CXCL9均与CRP、α1-AGP呈显著正相关(P<0.05或P<0.01)，且均与HP无明显相关性(P>0.05)。CXCL9与CP呈显著正相关(P<0.05)，而CXCL8与CP无明显相关性(P>0.05)。见表3。

2.4心律失常组与非心律失常组外周血CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平比较 心律失常组的血清CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平均显著高于非心律失常组(P<0.01)。见表4。

2.5心律失常组与非心律失常组心肌酶谱指标比较 心律失常组的LDH、α-HBDB、CK、CK-MB水平均显著高于非心律失常组(P<0.05或P<0.01)。见表5。

2.6心律失常患儿CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9与心肌酶谱的相关性分析 Pearson法分析结果显示，CCL2、CXCL8、CXCL9均与LDH、α-HBDB、CK、CK-MB呈显著正相关(P<0.05或P<0.01)。CCL4与LDH、α-HBDB、CK-MB呈显著正相关(P<0.05)，而与CK无明显相关性(P>0.05)。见表6。

表3 MPP患儿血清CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9与急性时相蛋白的相关性分析

注：MPP为肺炎支原体肺炎，CCL2为CC类趋化因子配体2，CCL4为CC类趋化因子配体4，CXCL8为CXC趋化因子配体8，CXCL9为CXC趋化因子配体9，CRP为C-反应蛋白，α1-AGP为α1-酸性糖蛋白，HP为触珠蛋白，CP为铜蓝蛋白

表4 心律失常组与非心律失常组MPP患儿外周血CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平比较

注：MPP为肺炎支原体肺炎，CCL2为CC类趋化因子配体2，CCL4为CC类趋化因子配体4，CXCL8为CXC趋化因子配体8，CXCL9为CXC趋化因子配体9；与非心律失常组比较，bP<0.01

表5 心律失常组与非心律失常组MPP患儿心肌酶谱指标比较

注：MPP为肺炎支原体肺炎，LDH为乳酸脱氢酶，α-HBDB为α-羟丁酸脱氢酶，CK为磷酸肌酸激酶，CK-MB为磷酸肌酸激酶同工酶；与非心律失常组比较，aP<0.05，bP<0.01

表6 心律失常MPP患儿CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9与心肌酶谱的相关性分析

注：MPP为肺炎支原体肺炎，CCL2为CC类趋化因子配体2，CCL4为CC类趋化因子配体4，CXCL8为CXC趋化因子配体8，CXCL9为CXC趋化因子配体9，LDH为乳酸脱氢酶，α-HBDB为α-羟丁酸脱氢酶，CK为磷酸肌酸激酶，CK-MB为磷酸肌酸激酶同工酶

3 讨论

MPP是儿科中常见疾病，肺炎支原体是主要病原体[10]。因此，探究MPP患儿外周血CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平变化及其临床意义，并分析其与心律失常的关系，有助于临床对MPP的诊断及评估病情。

新型H1N1流感病毒感染患者外周血中CCL2表达水平明显升高且与疾病进展有关，并可评估患者预后[11]。有实验研究表明，病毒性心肌炎小鼠血清及心肌组织中CCL4均呈高表达，并可加重体内炎性反应，且与心肌病变程度密切相关[12]。CXCL9可诱导并趋化T淋巴细胞或单核细胞，有研究表明CXCL9可参与系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病的发生及发展过程[13]。有研究显示,CXCL8可促使多种炎性细胞趋化至肺部组织，并促使其释放血管活性物质进而损伤肺组织[14]。关于CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9与MPP的相关研究相对较少。本研究结果显示，MPP轻症组和MPP重症组的血清CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平均显著高于对照组，且MPP重症组显著高于MPP轻症组，说明CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9均参与MPP的发生发展过程，且随着疾病进展其表达水平也明显升高。提示CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9可以作为判断MPP疾病进展或严重程度判定的重要指标。

血清急性时相蛋白与机体应激反应有关，机体处于感染、免疫功能异常及组织损伤状态时可触发全身性炎性反应并刺激肝脏合成急性时相蛋白，进而提高其表达水平[15]。本研究结果显示，MPP轻症组和MPP重症组的血清CRP、α1-AGP、HP、CP水平均显著高于对照组，且MPP重症组显著高于MPP轻症组，说明随着疾病严重程度增加机体反应性随之增强，进而导致急性时相蛋白水平升高。提示急性时相蛋白可反映MPP病情进展。进一步分析结果显示，CCL2、CCL4均与CRP、α1-AGP、HP、CP呈正相关，CXCL8、CXCL9均与CRP、α1-AGP呈正相关，CXCL9与CP呈正相关，说明MPP患儿外周血CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平异常升高可能促使急性时相蛋白合成增加，进而加重疾病进展。提示MPP患儿外周血CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平升高与疾病进展密切相关。

随着MPP疾病严重程度增加导致心血管系统受累，其中心律失常是主要表现形式。有临床研究表明，心律失常是重症MPP的主要判断标准[16]。CCL2可参与心肌重构、心肌缺血等病理过程，研究表明CCL2可促使骨髓成纤维细胞募集至心脏进而促进心肌纤维化过程，可为心肌损伤的发生提供基础[17]。CCL4在心律失常性右心室心肌病患者中呈高表达，并可促进炎性因子释放[18]。CXCL8可增加体内基质金属蛋白酶(MMP)分泌量，而MMP又可参与血管重构、动脉粥样硬化及心肌基质胶原降解等病理过程，进而引发心律失常甚至心力衰竭[19]。相关研究表明，CXCL9可直接与G蛋白偶联受体CXCR3相互作用并降低细胞膜电流进而影响电稳定性导致心律失常的发生[20]。本研究结果显示，心律失常组血清CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平均显著高于非心律失常组，说明随着MPP患儿疾病进展为心律失常，其外周血CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9表达水平均明显升高。提示CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平升高可促使MPP患儿发生心律失常。CRP与心肌酶谱指标水平升高均可反映患者发生心肌损伤，研究表明LDH、α-HBDB、CK、CK-MB水平高低均可反映MPP患儿心肌受损情况[21]。本研究结果显示，心律失常组LDH、α-HBDB、CK、CK-MB水平均显著高于非心律失常组，进一步分析结果显示，CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9均与LDH、α-HBDB、CK-MB呈正相关，说明MPP患儿发生心律失常时外周血CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平高低可反映心肌损伤程度。提示外周血CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平升高可能与MPP患儿发生心肌损伤有关。

综上所述，MPP患儿外周血CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9水平均明显升高并与疾病严重程度密切相关，检测其水平有助于判断MPP患儿是否发生心肌损伤，并可针对性地采取有效干预措施延缓MPP疾病进展，进而降低心肌损伤的发生率。本研究还存在不足之处，关于CCL2、CCL4、CXCL8、CXCL9在MPP发生及发展过程中的具体作用机制及其可能作用信号通路均需深入研究。