不明复发性流产者血清HMGB1、IL-33与免疫指标关系

郝 荣 赵富清 刘清秀

重庆市开州区人民医院(405400)

复发性流产中因母体生殖道异常或感染、染色体异常、免疫功能异常、母体内分泌异常及血栓形成倾向等造成者约50%，另50%被称为不明复发性流产(URSA)[1-3]。关于URSA的发病原因目前尚未明确，临床URSA诊治效果不理想。有学者提出[4]，母胎免疫抑制与调控失衡可能是URSA的主要原因。本研究对URSA患者血清高迁移率蛋白B1(HMGB1)、白介素-33(IL-33)与免疫指标关系进行探讨，以期为临床诊断及干预提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料

将2017年1月-2017年12月在本院妇产科就诊的早孕妇女126例资料纳为研究，分别为URSA(URSA组)和既往无自然流产史的正常早孕妇女(正常组)。纳入标准：①年龄≥18岁；②URSA组孕妇均为连续发生自然流产≥2次，流产原因不明；③男方精液指数正常。排除标准：①生殖道畸形；②有死产、活产、死胎史；③生殖道感染或其他感染性疾病；④代谢性疾病及内分泌异常、激素水平紊乱；⑤免疫性疾病或抗磷脂抗体、狼疮抗凝物、抗核抗体、抗子宫内膜抗体及抗绒毛膜促性腺激素抗体阳性者；⑥夫妻双方染色体异常；⑦妊娠前有基础疾病史。所有孕妇均对本研究知情同意，且本研究已得到本院医学伦理委员会的批准。

1.2 检测方法

采集所有入组孕妇空腹外周静脉血，酶联免疫吸附法测定血清高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、白细胞介素-33(IL-33)、IL-6、IL-10、IL-17、转化生长因子-β(TGF-β)，试剂盒由赛默飞生产。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 一般情况

URSA组66例，年龄(29.0±6.0)岁(21～45岁)，孕周(11.0±2.4)周(7～16周)；正常组60例，年龄(29.48±6.0)岁(20～44岁)，孕周(10.9±2.1)周(6～17周)。两组孕妇比较无差异(P>0.05)。

2.2 血清HMGB1、IL-33

URSA组血清HMGB1(95.26±10.20ng/ml)高于正常组(46.70±6.68 ng/ml)(t=31.883，P=0.000)；IL-33水平(114.93±25.10pg /ml)低于正常组(146.50±22.33 pg/ml)(t=7.432，P=0.000)。

2.3 血清IL-6、IL-10、IL-17、TGF-β

URSA组血清IL-6、IL-17均高于正常组，IL-10、TGF-β均低于正常组(P<0.05)。见表1。

表1 两组血清因子水平比较

2.4 URSA患者血清HMGB1与IL-6、IL-10、IL-17、TGF-β的相关性

URSA组血清HMGB1与IL-6、IL-17水平呈正相关(r=0.598、0.708，P<0.05)，与IL-10、TGF-β水平呈负相关(r=-0.763、-0.678，P<0.05)，见图1。血清IL-33与IL-6、IL-17水平呈负相关(r=-0.415、-0.692，P<0.05)，与IL-10、TGF-β水平呈负相关(r=0.737、0.665，P<0.05)。见图2。

3 讨论

母胎界面是母胎免疫应答的主要部位，与胚胎的成功种植关系密切[5]。部分学者[6]认为，URSA与母胎界面的免疫耐受异常有关。有研究者认为URSA的免疫失衡主要与Th1/Th2平衡失调有关，且认为Th2的高表达是成功妊娠的关键[7]。但部分研究[8]发现，URSA患者血清TFN-γ水平明显低于正常孕妇，IL-4、IL-10水平明显高于正常孕妇。而TFN-γ主要由Th1细胞分泌，IL-4、IL-10由Th2细胞分泌，所以单纯Th1/Th2平衡已无法解释流产的原因。有研究发现Th17/Treg细胞与流产者免疫调节密切相关，成为目前母胎界面免疫耐受的研究热点[9-10]。本文研究了HMGB1、IL-33与Th17/Treg细胞因子的相关性。

母胎界面免疫耐受机制主要与T淋巴细胞、自然杀伤细胞等免疫细胞的功能及趋化因子的表达等相关，而Th17和Treg均属与复发性流产关系密切的CD4+T细胞系[9-10]。据相关研究表明，Th17细胞主要通过分泌IL-17、IL-6发挥其免疫促炎作用，从而增强母胎免疫排斥作用，不利于妊娠；而TGF-β、IL-10是由Treg细胞分泌的具有免疫抑制作用的细胞因子，可抑制IL-17的表达，从而增强母胎免疫耐受，维持正常妊娠[12]。本研究结果显示，URSA患者血清IL-6、IL-17明显升高，IL-10、TGF-β明显降低，提示Th17/Treg平衡明显偏向Th17细胞，这种失衡可能加重了母胎排斥作用，不利于妊娠的维持。徐浩[13]等研究结果亦显示，URSA患者体内Th17细胞因子水平明显高于正常组，Treg细胞因子水平明显低于正常组，认为具有抗炎作用的Treg细胞因子减少和促炎作用的Th17细胞因子增加，共同导致了Th17/Treg失衡从而促进URSA发生。

图1 URSA患者血清HMGB1与IL-6、IL-10、IL-17、TGF-β相关性

图2 URSA患者血清IL-33与IL-6、IL-10、IL-17、TGF-β相关性

HMGB1可促进炎性细胞的成熟和迁移，并刺激免疫系统分泌促炎因子，其表达可能与妊娠关系密切[14]。IL-33是IL-1的家族成员，近年来发现HMGB1和IL-33在免疫性疾病中，均具有调节TH17/Treg细胞平衡的作用。因此，本研究探究了HMGB1和IL-33与Thl7细胞、Treg细胞因子的关系。结果显示，URSA患者HMGB1水平高于正常组，IL-33水平低于正常组。有研究[11，15]显示URSA患者HMGB1水平显著升高，IL-33水平显著降低，与本研究结果一致。相关报道[16]显示，HMGB1处理妊娠大鼠，会引起子宫内膜炎症因子的过表达，造成妊娠失败，说明HMGB1的表达与URSA发生相关。本文相关性研究显示，HMGB1与IL-6、IL-17水平呈正相关，HMGB1与IL-10、TGF-β水平呈负相关；IL-33与IL-6、IL-17水平呈负相关，IL-33与IL-10、TGF-β呈正相关。说明HMGB1和IL-33均是参与体内免疫炎症反应的介质，可放大母胎界面免疫炎症反应，造成URSA发生。仇笑笑[12]研究结果亦证明，URSA体内HMGB1与Thl7细胞因子呈正相关，与Treg细胞因子呈负相关。可能是HMGB1促进Thl7细胞分泌并释放促炎因子，并抑制Treg细胞分泌释放抗炎因子，从而直接或间接的调控Thl7/Treg细胞的免疫功能[11]。而IL-33可能具有抑制促炎因子释放的作用[15]，但还有待大样本、多中心开展研究。

综上所述，URSA患者HMGB1表达上调，IL-33表达下调，可能通过调节机体Thl7/Treg水平放大早期孕妇体内炎症反应，参与了URSA的发生。