HPLC法测定复方胃蛋白酶颗粒中葡萄糖和蔗糖的含量

邢晟，梁翠荣，巩丽萍，石峰，王禄山，吴秀芸

(1.山东省食品药品检验研究院，山东 济南 250101；2.山东大学微生物技术国家重点实验室<微生物技术研究院>，山东 青岛 266237)

复方胃蛋白酶颗粒主要成分为胃蛋白酶、维生素B1和山楂，胃蛋白酶在胃酸参与下将蛋白质分解成蛋白胨及少量多肽，维生素B1可提高食欲、增加食量，山楂能增加胃中酵素，促进胃肠分泌，提高蠕动，为胃蛋白酶提供酸性环境，有健胃消食之功效。复方胃蛋白酶颗粒主要用于消化不良、食欲缺乏等[1-5]。葡萄糖、蔗糖、麦芽糖等是人体必需的营养要素，同时也是复方胃蛋白酶颗粒中的主要辅料，目前尚无生化制剂中葡萄糖、蔗糖、麦芽糖等辅料含量的标准检验方法，因此建立检测生化制剂中糖含量的测定方法十分必要。

目前辅料多糖的检验方法主要参考《中国药典》2015年版(四部)[6]中的相关规定。但这些辅料检验方法精确度有限，且可能受限于复方胃蛋白酶颗粒其他成分的干扰，因此仅做参考。根据文献调研结果，建立用示差折光高效液相色谱法测定复方胃蛋白酶颗粒中葡萄糖含量的方法[7-8]。该方法快速、准确、稳定、可靠，可用于复方胃蛋白酶颗粒等制剂中糖含量的测定。

1 仪器与试药

Agilent 1260高效液相色谱仪；Mettler Toledo XSE205DU电子天平；蔗糖对照品(中国食品药品检定研究院，批号：111507-201303，含量：99.8%)；葡萄糖对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110833-201205，含量：99.5%)；复方胃蛋白酶颗粒(来自7家生产企业)156批次；水为纯化水(Millipore Q-POD制备)；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 液相色谱条件 色谱柱为Welch Xtimate Sugar-H(7.8 mm×300 mm，8 μm)；流动相为0.004 mol·L-1硫酸溶液；检测器为示差折光检测器；流速为0.5 mL·min-1；柱温为25 ℃；进样量为10 μL。

2.2 溶液的制备 精密称取供试品约1 g，置于100 mL量瓶中，加流动相(0.004 mol·L-1硫酸溶液)溶解并稀释至刻度，摇匀，取1 mL置1.5 mL离心管中，12 000 rpm离心10 min，取上清液，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

分别精密称取葡萄糖对照品1.015 g和蔗糖对照品1.002 g，分别置100 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液；分别精密称取葡萄糖对照品1.012 g和蔗糖对照品1.011 g，分别置10 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，作为对照品储备液。

2.3 专属性试验 按生产工艺及处方比例，按“2.2”项下的方法制备成不含蔗糖和葡萄糖的阴性对照溶液，照上述色谱条件进行检测(见图1)。如图可见，除蔗糖对照品和葡萄糖对照品外未见其他杂质的干扰峰，方法专属性良好。

2.4 线性关系考察 分别精密量取葡萄糖和蔗糖对照品储备液0.1、0.2、0.5、1.0、5.0 mL，置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度。精密量取上述对照品溶液以及对照品储备液各10 μL注入液相色谱仪测定，以进样量X(mg)为横坐标，色谱峰面积Y为纵坐标，制得回归方程：

Y=153 939X+78 623，r=0.999 8(葡萄糖)

Y=183 227X+19 588，r=0.999 9(蔗糖)

结果表明，葡萄糖进样量在10.12～1 012.0 μg范围内线性关系良好，蔗糖进样量在10.11～1 011.0 μg范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验 分别取对照品溶液10 μL连续进样6次，测得葡萄糖峰面积的RSD为0.34%，蔗糖峰面积的RSD为1.06%，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验 分别取对照品溶液10 μL，置室温下分别放置0、10、20、30、40 h后进样，测得葡萄糖和蔗糖峰面积的RSD分别为0.75%和0.41%(n=4)。结果表明供试品溶液在40 h内稳定性良好，能够满足测定需要。

2.7 重复性试验 取同一批号供试品6份，照“2.2”项下的方法制备成供试品溶液测定，计算蔗糖的含量(该批次产品处方不含葡萄糖)，其RSD为0.19%，结果表明方法重复性良好。

2.8 加样回收率试验 精密称取确定蔗糖含量的供试品约1 g(蔗糖含量为0.39 g·g-1)，共计9份，分别置100 mL量瓶中，其中3份加入蔗糖对照品贮备液3 mL(约相当于供试品蔗糖含量的0.8倍)，3份加入蔗糖对照品贮备液3.8 mL(约相当于供试品蔗糖含量的1.0倍)，3份加入蔗糖对照品贮备液4.6 mL(约相当于供试品蔗糖含量的1.2倍)，照“2.2”项下的方法制备成供试品溶液，精密量取上述供试品溶液10 μL测定，结果蔗糖的平均回收率为98.73%，RSD为0.224%，表明回收率良好，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果(n=9)

2.9 复方胃蛋白酶颗粒葡萄糖及蔗糖含量测定 取收集到的156批复方胃蛋白酶颗粒样品，照“2.2”项下的方法制备成供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，以外标法计算葡萄糖以及蔗糖的含量。结果见表2。

表2 样品葡萄糖及蔗糖含量测定结果

3 讨论

3.1 目的与意义 葡萄糖、蔗糖等在药物制剂中广泛应用。但由于个体糖耐量存在差异，且进食过多糖对身体不利，因此有效控制药物制剂中糖的含量十分重要。目前尚无可同时检测复方胃蛋白酶颗粒中葡萄糖、蔗糖含量的标准检测方法，用示差折光高效液相色谱法测定复方胃蛋白酶颗粒中葡萄糖、蔗糖的含量，简单、准确、可靠，可用于复方胃蛋白酶颗粒中葡萄糖与蔗糖的含量测定。

3.2 结果分析与建议 本次检验的7家生产企业均在产品说明书中明确标注添加蔗糖，仅有D企业明确标注添加葡萄糖。检测结果显示，7家生产企业产品总含糖量均为90%左右，其中A企业产品49批，蔗糖含量为3.7 g/袋，葡萄糖含量为6.0 g/袋；B企业产品4批，蔗糖含量为8.7 g/袋，葡萄糖未检出；C企业产品13批，蔗糖含量为9.0 g/袋，葡萄糖未检出；D企业产品38批，蔗糖含量为5.0 g/袋，葡萄糖含量为4.0 g/袋；E企业产品16批，蔗糖含量为9.0 g/袋，葡萄糖未检出；F企业产品13批，蔗糖含量为8.7 g/袋，葡萄糖未检出；G企业产品23批，蔗糖含量为9.0 g/袋，葡萄糖未检出。结果显示，除D企业外，A企业也在产品中添加了葡萄糖，该企业认为本次处方变更未影响产品药品质量，不需进行补充申请，存在一定的不合规性。

目前因缺少质量控制标准，企业在糖类辅料的投料上存在一定的不合规性，为规范复方胃蛋白酶颗粒中糖的含量，建议明确规定糖类辅料的添加量，并在相关标准中增设糖的含量测定项目，以利于更好地控制产品质量。