血清生长分化因子15和甲胎蛋白联合检测对HBV相关肝细胞癌的诊断价值

李 欢， 陈娟娟， 祝成亮， 张平安

武汉大学人民医院 检验科， 武汉 430060

原发性肝癌简称肝癌，起源于肝脏的上皮或间叶组织，是全球第六大最常见的肿瘤，也是第三大最常见的癌症相关死亡原因[1]，世界各地每年有70多万人诊断为肝癌，其中很大一部分是肝细胞癌(HCC)。HBV感染是HCC主要的病因之一。早期诊断对改善HCC的治疗和预后非常重要。生长分化因子(growth differentiation factor，GDF)15属于TGFβ超家族成员，与肿瘤的转移有着密切的关系[2]。在正常生理条件下，一般表达于胎盘和前列腺中，其他器官中不常见，但在炎症和恶性肿瘤等病理状态时，累及的组织及血液中GDF15表达显著升高[3]。AFP是肝癌诊断最常用的血清标志物，但单一使用AFP诊断时灵敏度和特异度都不够理想，本研究将探讨GDF15和AFP联合检测对HBV相关HCC诊断的临床价值。

1 资料与方法

1.1 研究对象 收集2019年3月1日-2019年9月1日在本院就诊的HBV相关HCC患者(HCC组)、慢性乙型肝炎(CHB)患者(CHB组)和健康体检者(NC组)的临床资料。纳入标准：(1)所有HCC患者HBsAg均为阳性，HCC患者的诊断符合《原发性肝癌诊疗规范(2017年版)》[4]中的诊断标准；(2)HCC患者未接受过介入治疗或化疗等；(3)CHB患者诊断后尚未接受治疗；(4)所有对象临床资料完整。排除标准：(1)排除HBV外其他肝炎病毒或重叠感染；(2)排除HCC以外的其他恶性肿瘤；(3)排除甲状腺功能亢进、严重心血管病、糖尿病等疾病；(4)排除妊娠妇女。本研究经武汉大学人民医院医学伦理学委员会批准(批号：2016K-C025)，且所纳入对象均签订知情同意书。

1.2 检测方法 采集所有研究对象空腹6～8 h后的静脉血5 ml，以转速3500 r/min(离心半径=16 cm)离心5 min，分离血清-80 ℃备用。采用Siemens公司ADVIA CENTUAR XP全自动化学发光免疫分析仪及配套试剂盒检测血清AFP 水平，参考区间为0～8.0 ng/ml；采用从R&D(Quantikine，R&D Systems，USA)购入的ELISA试剂盒(目录号：DY957，DY008)检测血清GDF15水平，参考检测范围为0～0.5 ng/ml。所有检测均在试剂盒说明书规定的时间内完成，且严格遵守实验相关操作规程。

2 结果

2.1 一般资料比较 共纳入患者225例，其中HCC组97例，男56例，女41例；CHB组41例，男23例，女18例；NC组87例，男49例，女38例。三组研究对象在年龄(F=0.158，P=0.854)与性别分布(χ2=0.05，P=0.975)上的差异均无统计学意义(表1)。

2.2 GDF15和AFP检测结果 HCC组的GDF15水平明显高于CHB组和NC组(P值均<0.01)；HCC组和CHB组的AFP水平均显著高于NC组，且HCC组AFP水平显著高于CHB组，差异均有统计学意义(P值均<0.01)(表2)。

表2 各组GDF15和AFP水平比较

注：与NC组相比，1)P<0.01；与CHB组相比，2)P<0.01

2.3 ROC曲线分析GDF15和AFP单独或联合检测诊断HCC的价值 采用二元logistic回归分析得到两种指标联合的回归模型，进一步绘制GDF15和AFP单独或联合检测的ROC曲线(图1)，分析结果见表3，GDF15联合AFP的曲线下面积最大，为0.816，其次为GDF15(0.752)，AFP最低(0.660)。AFP的特异度最高，GDF15联合AFP的灵敏度和约登指数最高。

表1 研究对象一般资料

表3 GDF15、AFP单独及联合检测诊断HCC的ROC曲线分析结果

图1GDF15、AFP单独及联合检测诊断HCC的ROC曲线

3 讨论

HCC诊断的肿瘤标志物较多，常见的有AFP、α-L-岩藻苷酶和癌胚抗原等[5]。单个标志物对诊断HCC的灵敏度和特异度往往不够理想，而多指标联合检测可以明显提高诊断效能[6-8]。本研究HCC组的GDF15和AFP水平均显著高于CHB组和NC组，提示GDF15和AFP可能是HCC诊断的有效指标，且GDF15诊断HCC的曲线下面积大于0.7，高于AFP，说明GDF15对HCC的诊断效能优于AFP。

GDF15，又称巨噬细胞抑制因子1，能抑制巨噬细胞产生TNFα，参与组织损伤或疾病时的感染、纤维化和凋亡途径，在多种肿瘤中有高表达的现象，比如结直肠癌[9]、胃癌[10]等。目前，多项研究发现GDF15既可作为抑癌因子，也可作为致癌因子，与肿瘤类型相关。在胶质母细胞瘤细胞中，GDF15具有抗肿瘤活性[11]；在人结直肠细胞中，GDF15通过控制细胞凋亡而发挥抗肿瘤蛋白的作用[12]；而在口腔鳞状细胞癌中，GDF15的表达与其恶性程度呈正相关，GDF15能促进肿瘤细胞的增殖和集落形成[13]；Wang等[14]的实验数据证明GDF15能促进HepG 2细胞的存活、侵袭、迁移和血管生成，并认为GDF15可能是肝癌的危险因素，可作为肝癌诊断的血清标志物。本研究的数据显示HCC组GDF15水平显著高于CHB组和NC组，与Liu等[15]的研究结果一致。同时，ROC曲线分析显示GDF15诊断HBV相关HCC的曲线下面积为0.752，灵敏度为74.0%，特异度为68.3%，在Liu等[15]研究中，GDF15诊断HCC的曲线下面积为0.843，灵敏度为86.8%，特异度为72.8%，较高于本文结果，可能是由于取样和地域等原因，但这些均在一定程度上证实GDF15可作为HCC诊断的血清标志物。

AFP是最常见的HCC诊断血清标志物，主要由胎儿肝细胞及卵黄囊合成，血清正常含量<25 μg/L，当细胞癌变时，其水平会显著升高[16]。本研究HCC组的AFP水平显著高于CHB组和NC组，与理论基础相符。但除了HCC，AFP在慢性肝炎、肝硬化等其他肝病中也有升高的现象，可能会导致漏诊和误诊。在朱慧婧等[17]研究中AFP诊断HCC的灵敏度为58.57%，特异度为78.71%，与本研究结果有部分差异，原因可能是抽样量不同、采用的测定仪器和试剂种类或地域差异等。本研究将GDF15和AFP联合作ROC曲线，结果显示曲线下面积为0.816，大于单项检测结果，故认为联合检测的性能优于单项指标检测。

综上所述，GDF15和AFP均可作为HCC诊断的有效指标，且联合检测可以进一步提高HCC的诊断效能，对临床诊断有重要的参考价值。