乳腺癌患者血清可溶性晚期糖基化终末产物受体水平及其临床意义▲

程学远 覃庆洪 黄 忠

(1 广西北海市人民医院普通外科，北海市 536000，电子邮箱：118062593@qq.com；2 广西医科大学附属肿瘤医院乳腺外科，南宁市 530021)

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，具有高侵袭性、易转移、易复发、预后差等特点。近年来乳腺癌患者呈年轻化趋势，死亡率也逐渐升高[1]，因此，探寻早期诊断标记物对乳腺癌患者的诊治具有重要的临床价值。晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end-products，RAGE)是近年来发现的一种多配体的跨膜信号转导受体[2]，其可以通过激活细胞内多种信号通路，参与多种疾病的病理过程[3]。RAGE配体的多样性决定了其作用机制的复杂性，其中可溶性RAGE(soluble RAGE，sRAGE)是RAGE的抑制性配体[4]。研究表明，外周血sRAGE水平下降，可增加肿瘤发生的概率[5]。然而，目前国内关于血清sRAGE表达水平与乳腺癌相关性的研究报道较少。因此，本研究分析乳腺癌患者血清sRAGE水平及其与临床病理特征的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2017年3月至2018年4月北海市人民医院收治的80例乳腺癌患者为研究对象(乳腺癌组)，均为女性，年龄30～68(47.5±8.1)岁，绝经42例(52.50%)，病理类型为浸润型导管癌43例，浸润型小叶癌37例。纳入标准：患者均经组织病理学检查确诊，均为初发病例，且采集样本前未接受临床治疗。排除标准：合并急性感染性疾病者，糖尿病者，神经系统疾病者及其他恶性肿瘤者。另选取同期于该院进行健康体检的80例健康者为对照组，均为女性，年龄29～67(46.6±7.4)岁，绝经44例(55.00%)。纳入标准：均为体检健康女性，且年龄不超过70岁。排除标准：乳腺增生者及合并其他疾病者。两组的年龄及绝经情况差异无统计学意义(均P>0.05)，具有可比性。本研究经医院伦理学委员会审批通过，所有研究对象均对本研究知情同意。

1.2 研究方法

1.2.1 仪器和试剂：人sRAGE检测试剂盒购自上海江莱生物科技有限公司(批号：JL19606-96T)，Multiskan FC酶标仪购自美国赛默飞公司(批号：5119050)，兔抗人雌激素受体和增殖细胞核抗原肿瘤蛋白单克隆抗体及链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物连结法检测试剂盒购自福州迈新生物公司(批号：Kit-0012，MAB-0145，Kit-0105M)。

1.2.2 血清sRAGE检测：采集两组研究对象晨起空腹肘静脉血3 mL，24 h内在4℃下3 000 r/min离心10 min，取上层血清，检测步骤严格按照人sRAGE检测试剂盒说明书进行操作：(1)制备标准品(购自北京邦定生物医学公司)和待测血清样品：将450 μg/L的标准品分别制备成450 μg/L、300 μg/L、200 μg/L、100 μg/L、50 μg/L、25 μg/L和12.5 μg/L系列标准品检测样品，并将待测血清样品用蒸馏水稀释5倍。(2)设置空白孔1孔、各浓度标准品孔各1孔和待测血清样品孔1孔，进行酶联免疫吸附测定法检测。采用酶标仪测定各孔450 nm波长处的吸光度(A)值，然后应用酶联免疫吸附测定标准曲线绘制软件Curve Expert 1.4版本(艾美捷科技有限公司)，以标准品浓度为横坐标、A值为纵坐标绘制标准曲线，导出sRAGE浓度与A值的拟合方程，根据拟合方程计算出待测血清样品的浓度，再乘以样品的稀释倍数即为待测样品的实际sRAGE浓度。

1.2.3 其他指标的检测：雌激素及孕激素受体、增殖细胞核抗原的检测均按照试剂盒说明书操作。

1.2.4 临床资料的收集：收集研究对象的临床资料，包括年龄、绝经情况，以及乳腺癌患者的肿瘤直径、病理类型、原发肿瘤-区域淋巴结-远处转移(tumor-node-metastasis, TNM)分期、淋巴结转移情况及相关检验结果。

1.3 统计学分析 采用SPSS 19.0软件进行统计学分析。符合正态分布的计量资料以(x±s)表示，比较采用t检验；计数资料以例数或百分比表示，比较采用χ2检验；采用受试者工作特征(receiver operating characteristic，ROC)曲线评价血清sRAGE对乳腺癌的诊断效能。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组血清sRAGE水平的比较 乳腺癌组患者血清sRAGE水平为(621.34±183.15)μg/L，低于对照组的(864.92±225.37)μg/L(t=7.502，P<0.001)。

2.2 不同临床病理特征乳腺癌患者血清sRAGE水平比较 TNMⅠ～Ⅱ期、无淋巴结转移的患者血清sRAGE水平分别高于TNM Ⅲ期、淋巴结转移者(均P<0.05)，而不同年龄、绝经状态、病理类型、肿瘤直径及肿瘤组织雌激素受体表达情况、孕激素受体表达情况、增殖细胞核抗原表达情况的患者之间血清sRAGE表达水平差异均无统计学意义(均P>0.05)，见表1。

表1 不同临床病理特征乳腺癌患者血清sRAGE水平比较(x±s， μg/L)

2.3 ROC曲线分析 血清sRAGE水平诊断乳腺癌的ROC曲线下面积为0.849(P=0.021，95%CI：0.611～0.974)，敏感性为91.85%，特异性为77.41%，见图1。

图1 血清sRAGE水平诊断乳腺癌的ROC曲线

3 讨 论

乳腺癌为女性最常见的恶性肿瘤之一，约占各种恶性肿瘤的10%，其发病率呈逐年升高，且发病年龄呈年轻化发展趋势[6]。研究显示，全世界每年约有50万患者死于乳腺癌[7]。虽然早期乳腺癌患者经手术治疗联合放化疗的治愈率较高[8]，但临床上对于晚期乳腺癌尚缺乏有效手段。因此，探寻早期诊断标记物对乳腺癌的治疗的诊治具有重要的临床价值。

RAGE是近年来发现的一种多配体膜表面信号转导分子，其可激活细胞内多种信号通路[9]。已有研究表明，RAGE与炎症反应、肿瘤的侵袭和转移、神经血管再生及糖尿病并发症等多种病理过程有关[10]。sRAGE是一种RAGE的抑制性配体，主要是由RAGE mRNA选择性剪切或由细胞膜上的RAGE经膜表面蛋白酶裂解所产生，其可竞争结合RAGE表位，阻断RAGE的信号转导，从而影响RAGE的相关功能[11-12]。早期的研究显示，外周血sRAGE水平下降，可增加肺癌、胰腺癌等肿瘤的发生风险[13]，这可能是由于sRAGE水平下降引起sRAGE-RAGE信号转导途径的负反馈机制失调，从而促进了肿瘤的发生发展[14]。最近国外有研究显示，乳腺癌患者血清sRAGE浓度低于健康人群[15]。然而，目前国内有关血清sRAGE表达水平与乳腺癌相关性的研究报道较少。

本研究结果显示，乳腺癌患者血清sRAGE表达水平低于健康体检者(P<0.05)，这表明乳腺癌患者血清中sRAGE 呈低表达，其或可成为诊断乳腺癌的一种新型生物标志物。进一步采用ROC曲线评价血清sRAGE在乳腺癌中的诊断效能，曲线下面积为0.849(P<0.05)，诊断敏感性为91.85%，特异性为77.41%，提示血清sRAGE对乳腺癌具有较好的诊断价值。此外，乳腺癌患者血清sRAGE表达水平与TNM分期和淋巴转移情况密切相关(P<0.05)，即分期越高、出现淋巴转移者，血清sRAGE表达水平越低，这提示血清sRAGE可能参与乳腺癌的发生、侵袭及转移，临床监测乳腺癌患者血清sRAGE水平可能对评估患者病情发展及预后有一定意义。此外，不同年龄、绝经状态、病理类型、肿瘤直径、雌激素受体表达情况、孕激素受体表达情况及增殖细胞核抗原表达情况的患者血清sRAGE表达水平差异无统计学意义(P>0.05)，这提示血清sRAGE的表达不易受个体因素影响[16]。

综上所述，sRAGE在乳腺癌患者血清中呈低表达，其或与乳腺癌的发生、侵袭、转移有关，并有可能成为乳腺癌临床诊断的生物学标志物之一。