HuR在胰腺癌中的表达及与其预后的相关性

张 策 姚 俊 李 强

胰腺癌是临床上极其危重的恶性肿瘤[1]。Hu-抗原R(HuR)是1种转录后调节因子，属于Hu/ELAV家族的RNA结合蛋白[2]。Hu/ELAV家族还包括HuB，HuC和HuD，它们主要在神经系统中表达，而HuR则是广泛表达[3-4]。在大多数肿瘤类型中，HuR蛋白水平增加，其细胞核到胞质的易位表明HuR作为1种mRNA稳定蛋白，在细胞转化和肿瘤发生过程中起着重要的作用[5]。细胞质HuR可能是某些癌症类型的潜在预后标志物，相关研究显示到2030年，胰腺癌将成为第二个与癌症相关的致死原因[6-7]。本文具体探讨了HuR在胰腺癌中的表达与预后的相关性，阐述了HuR预测预后的价值。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 对象

选择2016年1月至2018年1月期间我院诊治的胰腺癌患者78例作为研究对象，纳入标准：经病理确诊为胰腺癌；年龄40～80岁；首次发病；标本采集前患者无经历任何治疗；医院伦理委员会批准了此次研究；患者签署了知情同意书；临床与病理资料完整。排除标准：严重心、肝、肾功能异常；临床与病理资料缺乏者；妊娠与哺乳期间妇女；合并其它肿瘤患者。

在78例患者中，年龄40～78岁，平均年龄(58.22±3.19)岁；平均体重指数(23.47±1.27)kg/m2；临床分期：Ⅰ期5例，Ⅱ期8例，Ⅲ期65例；淋巴结转移52例；病理特征：导管腺癌70例，其他类型癌8例；平均肿瘤大小(6.31±1.48)cm。

1.2 HuR表达检测

取所有患者的癌组织与癌旁组织，予生理盐水漂洗使血迹去除后马上置于冻存管中，-80 ℃冰箱保存。组织标本采用多聚甲醛固定，石蜡包埋，病理切片，免疫组化检测HuR表达水平，试剂盒购自科华生物工程股份有限公司，均严格按照试剂盒要求进行操作。所有病理组织的染色均在同一条件下进行，用PBS代替一抗设立阴性对照。免疫组化具体过程：病理组织常规脱蜡水化、烘片、抗原修复、阻断、加入一抗(按1∶1000稀释抗HuR，4 ℃冰箱过夜)、加入二抗(1∶5000，室温孵育30 min)、DAB显色、苏木精复染与封片，在镜下观察。

HuR的表达主要位于细胞核中，以细胞核出现棕黄色或棕褐色为阳性染色。细胞染色百分率：0分：无阳性细胞，1分：1%～25%阳性细胞，2分：26%～50%阳性细胞；3分：51%～75%阳性细胞，4分：≥75%阳性细胞；细胞染色强度：0分：未染色，1分：弱染色(浅棕黄色)，2分：中等染色(棕黄色)，3分：强染色(棕褐色)。以细胞染色百分率×胞染色强度为染色记分，强阳性(9～12分)，弱阳性(4～8分)，阴性(0～3分)，(强阳性+弱阳性)/本组例数×100.0%=阳性率。

1.3 调查资料

通过查阅电子和纸质版病历档案，收集患者的年龄、性别、肿瘤大小、病理类型、临床分期、淋巴结转移、体重指数等。同时随访至2019年1月，调查患者的死亡状况。

1.4 统计学方法

应用IBM SPSS Statistics 22.00统计软件分析，计量资料用均数±标准差表示，计数数据以样本率、阳性率示，计量资料的对比采用t检验，计数数据的对比采用四格表资料的确切概率法或χ2检验，多因素采用COX回归分析，相关性分析采用Spearman相关分析，检验水准为α=0.05，P<0.05有统计学意义。

2 结果

2.1 HuR表达阳性率对比

在78例患者中，癌组织HuR表达阳性率为85.6%，显著高于癌旁组织的19.2%(P<0.05)，见表1。

表1 不同组织HuR表达阳性情况对比

2.2 HuR表达阳性与临床特征的相关性

在78例患者中，不同性别、年龄、体重指数、病理类型患者的 HuR表达阳性率对比差异无统计学意义(P>0.05)，而不同肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移患者的HuR表达阳性率对比差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 胰腺癌患者HuR阳性表达与临床特征的相关性(例，%)

2.3 预后情况

所有患者随访至2019年1月，平均随访时间(11.53±1.28)个月，78例患者中死亡51例，死亡率为65.4%。直线相关分析显示：患者的预后与HuR表达阳性率、临床分期、肿瘤大小、淋巴结转移成显著正相关性(P<0.05)，见表3。

表3 胰腺癌患者预后与其他指标的相关性

2.4 影响因素分析

以患者随访预后作为因变量，COX回归分析显示：HuR表达阳性率、临床分期、肿瘤大小、淋巴结转移都为影响患者预后的主要因素(P<0.05)，见表4。

表4 影响胰腺癌患者预后的因素

3 讨论

胰腺癌是我国癌症相关死亡的主要原因之一，虽有该病的治疗方法比较多，但是其预后生存率一直比较低，1年生存率不到20%，5年生存率不到10%[8]。并且部分患者首次诊断时已是局部晚期或转移性疾病，失去了根治性手术切除的机会[9]。胰腺癌的侵袭性比较强，细胞恶性增殖和肿瘤血管形成是胰腺癌发生与发展的基础。

HuR结合许多mRNA之后，可增强细胞增殖、细胞存活、局部血管生成、逃避免疫识别、癌细胞侵袭和转移[10]。乳腺癌、结肠癌、胃癌中HuR都呈现表达升高的趋势，小鼠异种移植模型中培养的具有异位升高的HuR的癌细胞发展成更大的肿瘤，而减少HuR表达则减小了肿瘤的大小[11]。本研究显示，胰腺癌组织的HuR表达阳性率为85.6%，显著高于癌旁组织的19.2%；不同肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移等患者的HuR表达阳性率对比差异有统计学意义，表明胰腺癌中HuR呈现高表达状况，且与临床特征显著相关。当前也有研究显示，与缺乏HuR的细胞相比，高HuR细胞利用较少的葡萄糖，产生更多的乳酸；而急性葡萄糖剥夺是HuR从细胞核向细胞质移位的有效刺激物，从而稳定mRNA靶标[12]。细胞质HuR高表达与较高的肿瘤分级以及晚期T分期密切相关，HuR过表达细胞可使得细胞增殖增加；HuR沉默可使得细胞集落形成显著减少[13]。

胰腺癌的发生是个多基因、多步骤、多阶段性的演变过程，在其癌变过程中涉及到许多基因的表达异常。HuR蛋白具有3种典型的RNA识别基序(RRM)，与其他家族成员具有> 90%的同一性；HuR结合并稳定靶mRNA，间接增加蛋白质的产生[14]。在正常细胞中，HuR主要集中在细胞核内；而在恶性细胞中，无论是细胞系还是组织样本，都观察到细胞质HuR的水平升高[15]。有研究显示细胞核和细胞质HuR均与原发肿瘤增加、肿瘤分期、组织学分级以及血管侵犯程度显着相关，也是1个整体无转移生存率较差的阴性预后因素[16-17]。也有研究显示细胞质HuR表达与预后无关，不过高细胞质HuR的肿瘤患者可能受益基于5-Fu的辅助治疗，而那些低细胞质HuR的患者，GEM似乎没有生存优势[18-19]。本研究直线相关分析显示患者的预后死亡与HuR表达阳性率、临床分期、肿瘤大小、淋巴结转移成显著正相关性；COX回归分析显示HuR表达阳性率、临床分期、肿瘤大小、淋巴结转移都为影响患者预后死亡的主要因素。还有研究显示当癌基因和/或细胞周期因子的稳定性增加时，高HuR细胞质积累预示着一种恶性行为，并可作为某些癌症预后不良和肿瘤侵袭性的独立标志[20-21]。不过本次研究只纳入了较少的病例，可能存在一定的研究偏倚，将在下一步进行深入分析。

总之，胰腺癌组织中HuR呈现高表达状况，与患者的病理特征与预后显著相关，是影响患者预后的重要指标。