氟丙嘧草酯原药高效液相色谱分析

张继伟，牛洺鑫，王鹏思，张 博

（中化化工科学技术研究总院有限公司，北京 100083）

氟丙嘧草酯（butafenacil,CAS登录号134605-64-4）是先正达公司开发的非选择性脲嘧啶类除草剂，商品名称Inspire，其混剂Rebin GT为氟丙嘧草酯+草甘膦。试验表明，氟丙嘧草酯作为非选择性除草剂，对于某些杂草有优异的防效[1]。虽然目前氟丙嘧草酯原药和相关制剂还没有在国内登记，但是对原药的工艺研究和生物活性研究一直在进行[2-7]，由此可见，该产品在国内的关注度较高，未来有望得以登记并商业化。本文采用高效液相色谱法对氟丙嘧草酯原药的定性、定量分析进行了研究，首次公开报道了一种快速、简便、准确的氟丙嘧草酯原药分析方法，为后期该产品及其相关制剂配方的分析研究提供理论依据。

1 试验部分

1.1 材料与试剂

99.0 %氟丙嘧草酯标样（德国 Dr.Ehrenstorfer公司）；水：纯净水（屈臣氏）；乙腈：色谱纯（Thermo Fisher）；醋酸：分析纯（国药集团）；氟丙嘧草酯原药样品（北京颖泰嘉和生物科技有限公司）。

1.2 仪器与设备

高效液相色谱仪：安捷伦1200高效液相色谱仪，配有紫外检测器和自动进样器；色谱柱：Zorbax Eclipse XDB-C18色谱柱(150×4.6 mm,5µm)；超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；0.45 μm有机相针式过滤器（津腾）；50 mL容量瓶（北京化玻站有限公司）。

1.3 液相色谱操作条件

流动相：乙腈-0.5%醋酸水溶液（体积比60.0∶40.0）；流速：1.0 mL/min；检测波长：272 nm；柱温：30 ℃；进样体积：5.0 μL。保留时间：约6.2 min。氟丙嘧草酯原药的高效液相色谱图见图1。

图1 氟丙嘧草酯原药的高效液相色谱图

1.4 测定步骤

1.4.1 标样溶液的配制

称取0.05 g氟丙嘧草酯标样（精确至0.000 2 g），置于50 mL容量瓶中，加入适量乙腈，在超声波清洗器上超声10 min，使标样全部溶解，冷却至室温后，用乙腈准确定容至标线，摇匀，用0.45 μm滤膜过滤，备用。按照上述方法分别配制标样溶液1和标样溶液2。

1.4.2 试样溶液的配制

称取0.05 g（精确至0.000 2 g）氟丙嘧草酯原药试样，置于50 mL容量瓶中，加入适量乙腈，在超声波清洗器上超声10 min，使试样全部溶解，冷却至室温后，用乙腈准确定容至标线，摇匀，用0.45 μm滤膜过滤，备用。按照上述方法分别配制试样溶液1和试样溶液2。

1.5 测定

在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续进数针标样溶液，直至相邻2针氟丙嘧草酯标样的响应值相对变化小于1.5%后，按照标样溶液1、试样溶液1、试样溶液1、标样溶液1、标样溶液2、试样溶液2、试样溶液2、标样溶液2的顺序进行测定。

1.6 计算

将测得的2针试样溶液中氟丙嘧草酯峰面积以及试样前后2针标样溶液中氟丙嘧草酯响应因子分别进行平均。试样中氟丙嘧草酯的质量分数ω1（%）按式（1）和（2）计算：

式中：f为标样溶液中氟丙嘧草酯的响应因子；m1为氟丙嘧草酯标样的质量，g；A1为标样溶液中氟丙嘧草酯峰面积的平均值；ω1为试样中氟丙嘧草酯的质量分数，%；A2为试样溶液中氟丙嘧草酯峰面积的平均值；ω为氟丙嘧草酯标样的纯度，%；m2为试样的质量，g。

将试样溶液1和试样溶液2中测得的氟丙嘧草酯质量分数的平均值作为测定结果。

2 结果与讨论

2.1 检测波长的选择

在190～380 nm的波长范围内，对氟丙嘧草酯进行紫外扫描，得到其相应的吸收波长与响应值的紫外吸收光谱图。发现氟丙嘧草酯在 272 nm波长有最大紫外吸收，杂质干扰小，且流动相无吸收。因此，综合考虑多种因素后，将检测波长选定为272 nm。

2.2 流动相的选择

采用安捷伦Zorbax Eclipse XDB-C18(150×4.6 mm,5µm)色谱柱进行反相液相色谱分析。依据氟丙嘧草酯自身的理化性质，采用溶解性能较好的乙腈-水体系作为流动相。试验结果表明当仅使用乙腈-水体系时，检测峰形有拖尾现象，故在水相中加入了千分之五的醋酸来调节流动相pH，以便改善出峰拖尾现象。通过对不同配比的乙腈-0.5%的醋酸水体系的分离效果对比，确定最佳的流动相配比为乙腈-0.5%醋酸水体积比60.0∶40.0，流速为1.0 mL/min。此时，有效成分的保留时间为6.2 min左右，检测峰形尖锐且对称，没有拖尾现象。此方法达到了快速简便分离的要求，是一种理想的氟丙嘧草酯原药分析方法。

2.3 方法线性相关性的测定

以乙腈为溶剂，分别配制质量浓度约为0.400g/L、0.700 g/L、1.000 g/L、1.100 g/L、1.300 g/L、1.600 g/L的氟丙嘧草酯标样溶液。按照上述色谱条件，依次进行测定。将测得的结果，以进样质量浓度为横坐标，不同质量浓度溶液的峰面积为纵坐标，绘制氟丙嘧草酯的线性相关曲线。结果表明：氟丙嘧草酯在0.400～1.600 g/L呈良好的线性关系，其线性方程为y=5 585.1x+35.178，线性相关系数R2为0.999 8。

2.4 方法精密度的测定

在上述色谱分析条件下，从同一个氟丙嘧草酯原药样品中准确称取6个试样，进行平行测定，考察方法的精密度，试验结果见表1。氟丙嘧草酯的标准偏差为0.11，变异系数为0.11%。结果表明该方法的重现性良好，精密度高，能够满足定量分析的要求。

表1 精密度试验

2.5 方法准确度的测定

准确称取6个已知质量分数的氟丙嘧草酯原药样品，分别加入一定量的氟丙嘧草酯标准品，按照1.3章节的液相色谱条件测定待测样品中氟丙嘧草酯的质量，计算其回收率，结果见表2。氟丙嘧草酯的平均回收率为99.94%。试验结果表明该方法回收率较好，准确度高。

3 结 论

采用反相高效液相色谱法对氟丙嘧草酯原药进行了定性定量分析。试验结果表明：该方法简单快速，分离效果好，峰形尖锐对称，线性关系好，精密度和准确度高，适用于氟丙嘧草酯原药的定量分析，也为该产品相关制剂配方的分析研究提供了参考。