Vimentin在肝细胞癌组织中的表达及其与临床预后的关系

原庆会 何伟

肝细胞癌是我国常见的恶性肿瘤之一，居全球范围内的肿瘤相关致死性疾病第3位[1-2]。相关文献报道，波形蛋白(Vimentin)与子宫内膜腺癌、三阴型乳腺癌(Trinegative breast cancer，TNBC)等恶性肿瘤病情进展相关[3-5]，但其与肝细胞癌临床病理特征及预后关系的研究较少。本研究就Vimentin在肝细胞癌组织中的表达及其与临床预后的关系进行了探讨，现报告如下。

资料与方法

一、病例资料

经本院伦理委员会批准，选取2011年1月—2014年10月我院确诊并收治的88例肝细胞癌患者癌组织及癌旁正常组织作为研究组和对照组。纳入标准：①确诊为原发性肝细胞癌；②病例资料详细；③入组前未进行任何抗癌治疗；④所有患者自愿参与本研究。排除标准：①依从性不好；②合并胃癌、乳腺癌等恶性肿瘤；③发生远处转移。88例肝细胞癌患者中，男性65例，女性23例；年龄26～78岁，≥52岁患者53例，<52岁患者35例；肿瘤直径≥5.0cm患者51例，肿瘤直径<5.0cm患者37例；有肝硬化70例，无肝硬化18例；TNM分期：I、II期患者53例，III、IV期患者35例；肺功能分级：A、B级患者79例，C级患者9例。

二、主要试剂

兔抗人Vimentin多克隆抗体(杭州华安生物技术有限公司)；免疫组织化学SP试剂盒(深圳子科生物科技有限公司)；苏木精染色液(南昌雨露实验器材有限公司)；生物素标记过氧化物酶(甘肃益生祥生物技术有限公司)；中性树胶(上海联硕生物科技有限公司)；DAB显色试剂盒(北京雅杰宝生物技术有限公司)；通用型二抗(河南沃瑞生物科技有限公司)。

三、研究方法

采用免疫组化染色法检测研究组和对照组中Vimentin蛋白表达水平。操作如下：将研究组和对照组组织固定，脱水，石蜡包埋成块。将组织切成4 μm的连续切片，依次脱蜡、抗原修复、过氧化物酶阻断，癌组织和正常组织分别滴加第一抗体Vimentin(浓度1∶100)4℃孵育过夜，再滴加一滴通用型二抗，37℃孵育30 min，再经PBS漂洗，经显色、复染、水洗蓝化，透明，干燥，封片，显微镜下观察Vimentin表达，然后根据细胞染色强度和阳性细胞所占百分比对Vimentin表达进行综合评分[4]，两项评分相乘为最终得分：阴性为0～1分(-)，弱阳性为2～4分(+)，阳性为5～7分(++)，强阳性为8分(+++)。最终得分≤4分为低表达，最终得分>4分为高表达。治疗结束后随访3年，每3个月采用电话及门诊复查相结合的方式随访1次。

四、统计学方法

本研究通过SPSS 23.0软件采用卡方检验比较研究组和对照组中Vimentin蛋白表达水平，采用卡方检验比较不同临床病理特征的肝细胞癌患者癌组织中Vimentin蛋白表达水平，采用Kaplan-Meier法分析Vimentin蛋白在肝细胞癌组织中的表达与患者预后的关系，P<0.05表示差异有统计学意义。

结 果

一、研究组和对照组中Vimentin蛋白表达水平

Vimentin蛋白呈棕黄色或棕褐色颗粒表达于细胞质中，Vimentin蛋白在研究组中阳性表达率显著高于对照组(P<0.05)，见表1、图1。

表1 研究组和对照组中Vimentin蛋白表达水平

二、不同临床病理特征肝细胞癌患者癌组织中Vimentin蛋白表达水平

性别、AFP 指标、携带乙肝病毒程度、年龄、门静脉侵犯、肿瘤直径、肝功能分级、肝硬化程度不同的肝细胞癌患者癌组织中Vimentin蛋白表达水平无显著差别(P>0.05)；低分化肝细胞癌患者癌组织中Vimentin蛋白表达水平明显高于中高分化肝细胞癌患者(P<0.05)；TNM分期Ⅰ、Ⅱ期肝细胞癌患者癌组织中Vimentin蛋白表达水平明显高于Ⅲ、Ⅳ期肝细胞癌患者(P<0.05)，见表2。

图1 A为研究组中Vimentin蛋白的阳性表达；B为对照组中Vimentin蛋白的阴性表达

表2 不同临床病理特征肝细胞癌患者癌组织中Vimentin蛋白表达水平

三、Vimentin蛋白在肝细胞癌组织中的表达与患者预后的关系

Vimentin高表达患者的总体生存率明显低于低表达患者，具有统计学差异(Log-Rankχ2=43.089,P<0.001)(图2)。

图2 Vimentin高表达和低表达组生存曲线

讨 论

近年来随着早期诊疗技术的发展，肝细胞癌总体疗效明显提高，但肝细胞癌发病隐匿，术后易复发，患者5年生存率仍较低。因此研究肝细胞癌发生、发展的可靠评估指标对提升患者预后尤为重要。

Vimentin是中间丝蛋白家族的成员之一，可参与肿瘤细胞增殖、迁移，同时还具有维持细胞完整性、抵御外界应急损伤的作用[3]。李新军等[6]研究发现Vimentin与TNBC临床病理特征和预后相关，并与上皮间质转化关系密切，提示Vimentin与上皮间质转化可能参与了TNBC进展。周博鑫等[7]研究发现Vimentin在乳腺浸润性导管癌中表达明显增高，其表达与临床TNM分期有关，且在乳腺浸润性导管癌侵袭、转移中扮演重要角色。赵静等[8]发现Vimentin主要表达于间质组织以及部分宫颈癌细胞中，且Vimentin表达与宫颈癌患者淋巴结转移、局部侵袭以及肿瘤细胞分化程度有相关性，但Vimentin表达与患者年龄、肿瘤直径以及临床分期无相关性。本研究发现，Vimentin蛋白在肝细胞癌组织中呈高表达，提示Vimentin可能参与了肝细胞癌的发生。分析Vimentin表达与肝细胞癌各临床病理特征参数的关系显示肿瘤分化、TNM分期不同的患者肝细胞癌组织中Vimentin蛋白表达水平差别显著，提示Vimentin在肝细胞癌组织中的表达水平与肿瘤分化、TNM分期呈相关性。进一步分析Vimentin表达水平与肝细胞癌患者预后的关系显示Vimentin高表达患者的总体生存率明显低于低表达患者，提示Vimentin表达水平与肝细胞癌患者预后呈相关性，Vimentin检测对肝细胞癌病情进展有一定预测意义。

综上所述，Vimentin在肝细胞癌组织中呈高表达，Vimentin的表达水平与肿瘤分化、TNM分期及肝细胞癌预后呈相关性。但研究时间短，纳入人数少，有待进一步研究。