miR-15a与miR-16-1在前列腺癌患者血清中的表达及意义

杨登科，钱海宁，方 震

上海市同仁医院泌尿外科,上海 200336

前列腺癌是指发生在前列腺的上皮恶性肿瘤，以腺癌最为常见。近年来，前列腺癌的发病率逐渐升高，高发年龄为70～80岁[1]。前列腺癌早期无明显症状，随着疾病的发展，增大的前列腺腺体会压迫尿道表现出尿频、尿急、尿失禁、夜尿增多，尿线细、尿流缓慢、排尿不尽等症状，还可压迫直肠引起肠梗阻及排便困难；严重者可压迫神经，引起会阴部疼痛；甚至侵及精囊、膀胱，出现骨转移，引起血尿、骨痛及病理性骨折等。严重影响患者日常生活与健康[2]。对早期前列腺癌患者采用放射性粒子植入、根治性前列腺切除术及根治性外放射疗法治疗效果佳，但对晚期患者的治疗效果并不理想。所以前列腺癌的早期诊断对于改善其预后至关重要，目前临床上主要依靠直肠指诊、前列腺超声及盆腔MRI检查等进行前列腺癌的辅助诊断。近年来，前列腺癌的生物标志物检测也成为研究热点。微小RNA-15a(miR-15a)与微小RNA-16-1(miR-16-1)在肿瘤细胞中存在高表达现象[3]，本研究对miR-15a与miR-16-1在前列腺癌患者血清中的表达及意义进行了探讨，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2017年5月至2018年6月本院收治的前列腺癌(前列腺癌组)、良性前列腺增生(良性前列腺增生组)患者及同期健康体检者(健康组)各41例为研究对象。前列腺癌组年龄45～76岁，平均(68.56±8.21)岁；良性前列腺增生组年龄44～73岁，平均(68.03±8.63)岁；健康组年龄46～74岁，平均(68.85±8.52)岁。前列腺癌组及良性前列腺增生组患者纳入标准：(1)经临床病理活检确诊[4]；(2)患者此前未进行任何治疗；(3)病情稳定；(4)临床资料完整；(5)患者或家属同意加入本研究，并签署知情同意书。排除标准：(1)合并心肝肾等重要脏器功能障碍者；(2)合并免疫性、传染性或急性疾病者。3组研究对象年龄等一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，有可比性。本研究经本院伦理委员会批准。

1.2方法 (1)采集患者清晨空腹静脉血5 mL，室温下静置30 min，3 000 r/min离心10 min，收集上清液，于-80 ℃中保存。(2)采用Trizol法提取血清总RNA，加入无水乙醇洗涤，再加入10～50 μL DEPC水溶解，采用核酸纯度分析仪分析RNA纯度，A值为1.8～2.0，根据DU-730计算RNA水平。(3)检测miR-15a和miR-16-1水平。反转录采用Tap ManReverseTranscription Kit试剂盒(批号：20071223)，所得反转录产物cDNA使用荧光定量试剂盒SYBR Premix Ex TaqTM(批号：20050901) 和Step One Plus实时荧光定量PCR测试仪进行miR-15a和miR-16-1扩增。每例标本重复检测3次，采用ABI7300记录Ct值，以U6为内参，根据N= 2-ΔΔCt计算相对表达水平。

1.3观察指标 比较3组血清miR-15a和miR-16-1水平；分析前列腺癌组血清miR-15a和miR-16-1表达水平与患者年龄、Gleason评分、病理分期、血清前列腺特异性抗原(PSA)间的关系。

2 结 果

2.13组血清miR-15a和miR-16-1表达水平比较 3组血清miR-15a和miR-16-1表达水平比较，差异均有统计学意义(P<0.05)，其中前列腺癌组血清miR-15a与miR-16-1表达水平低于良性前列腺增生组和健康组(P<0.05)；良性前列腺增生组血清miR-15a与miR-16-1表达水平低于健康组(P<0.05)。见表1。

表1 3组血清miR-15a和miR-16-1表达水平比较

注：与健康组比较，*P<0.05;与良性前列腺增生组比较，#P<0.05。

2.2前列腺癌组血清miR-15a和miR-16-1表达水平与各临床指标的关系 前列腺癌组血清miR-15a和miR-16-1的表达水平与患者年龄及血清PSA水平无关(P>0.05)，与患者Gleason评分及病理分期有关(P<0.05)。见表2、3。

表2 前列腺癌组血清miR-15a表达水平与各临床指标的关系

表3 前列腺癌组血清miR-16-1表达水平与各临床指标的关系

续表3 前列腺癌组血清miR-16-1表达水平与各临床指标的关系

3 讨 论

前列腺癌是发生于前列腺体的恶性肿瘤，在中老年男性中发病率较高，在危及患者健康的同时，也为其家庭带来沉重的经济负担[5]。随着医疗技术的不断发展，临床对前列腺癌发病机制研究的不断深入，血清微小RNA(miRNA)检测因具有特异性高、性能好等优点，正逐渐被临床应用于前列腺肿瘤检测[6]。miRNA在免疫细胞的调节、造血细胞分化发育及肿瘤发生等方面有重要作用，其参与了机体生长、发育及疾病发展过程中有关基因的表达。既往研究显示，miRNA的异常表达参与了多种疾病(如肿瘤)的发生和发展，不同疾病类型患者miRNA的表达谱不同[7]。因此，根据miRNA表达谱在肿瘤患者与健康人群的血清或血浆中的水平差异，可以有效识别机体异常，为临床诊断与治疗提供一定的参考。

有研究发现，miR-15a和miR-16-1具有明显的抑癌基因特点，能够抑制前列腺癌细胞的分化增殖、减少迁移和侵袭、促进凋亡、阻滞细胞周期及降低贴壁的非依赖性生长[8]。本研究结果显示，3组研究对象血清miR-15a与miR-16-1表达水平比较，差异有统计学意义(P<0.05)，其中前列腺癌组患者miR-15a与miR-16-1表达水平最低，良性前列腺增生组次之，健康组最高，说明miR-15a与miR-16-1表达水平在前列腺癌患者的血清中明显下降；且血清miR-15和miR-16-1的表达水平与前列腺癌患者年龄及血清PSA无关(P>0.05)，与患者Gleason评分及病理分期有关(P<0.05)，说明miR-15a和miR-16-1与血清PSA之间存在独立关系，而随着前列腺癌病理分期和组织学分级的增加，miR-15a和miR-16-1的表达水平有下降趋势，提示miR-15a和miR-16-1表达水平与疾病的发展有关，推测可能与其参与了抑癌基因的发育相关。

综上所述，miR-15a与miR-16-1在前列腺癌患者血清中的表达水平明显降低，且与肿瘤的病理分期和组织学分级有关，可为前列腺癌病情监测、后续的病理研究及疾病治疗等提供参考依据。