山药及几种炮制品皮与粉质部位总黄酮差异*

孟永海，孟祥瑛，付敬菊，秦 蓁，翟春梅

（黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040）

山药为一种药食同源的中药材，广泛生长于河南、湖北[1]、山西、山东、河北、浙江等地[2]，具有抗氧化、抗衰老、降血糖、降血脂、提高免疫力等功效[3-5]。其中黄酮类成分具有降三高、保护心脑血管、抗氧化、抗自由基等功效[6,7]，一直是研究的热门方向。山药皮和山药粉质部分差异却报道较少，但山药皮虽为非药用部位，但其功效与成分不可小觑。近年来，以天然产物替代工业合成抗氧剂已成为热门话题，具有效果佳、成本低、毒副作用小等优点[8-10]，而白术皮质部位的开发，可为天然抗氧剂的开发奠定基础。

1 仪器与材料

1.1 实验仪器

酶联免疫反应检测仪（美国PerkinElmer公司）；AL 204型分析天平；CT15RE型高速冷冻离心机；KQ-500DB型超声清洗机；6202型高速粉碎机；OSB-2200型水浴锅。

1.2 实验材料

淮山药（产地河南），对照品芦丁购自成都曼斯特生物科技有限公司；NaOH、NaNO2、AlCl3等均为分析纯。

1.3 山药炮制品的制备

1.3.1 土炒山药的制备 于台秤称取大小均匀的生山药片500g，将炒锅烧热，加入灶心土50g，不断搅拌炒散，加入生山药，不断翻炒至药材固有气味透出，表面呈现微黄色，断面微黄，筛去土粉，放凉备用。

1.3.2 麸炒山药的制备 于台秤称取大小均匀的山药片500g，将炒锅烧热，加入50g麦麸于热锅翻炒，炒至透出麦麸特有香气并微微冒烟时投入山药，不断翻炒至药材固有气味透出，表面呈现微黄色，断面微黄，筛去麦麸，放凉备用。

1.3.3 蜜麸炒山药的制备 称量50g麦麸，加适量蜂蜜拌匀，直至蜜麸握之成团、推之即散。于台秤称取大小均匀的山药片500g，将炒锅烧热，加入50g麦麸于热锅翻炒，炒至透出麦麸特有香气并微微冒烟时投入山药，不断翻炒至药材固有气味透出，表面呈现微黄色，断面微黄，筛去麦麸，放凉备用。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 供试品溶液的制备 将山药及各炮制品（皮质、粉质）粉碎并过筛，按照料液比1∶20加入95%（V/V）乙醇，浸泡 12h，超声提取 1h，离心（12000r·min-1，10min）取上清液备用。

2.1.2 芦丁标准液的配制 分析天平精密量取17.5mg芦丁标准品于10mL容量瓶中，加95%（V/V）乙醇稀释至刻度，配制成1.75mg·mL-1的溶液，摇匀备用。依次分别吸 5、1、1.5、2、2.5、3mL 溶液于 10mL 容量瓶，加95%（V/V）乙醇稀释至刻度，摇匀，配制浓度分别为 175、350、525、700、875、1050μg·mL-1的系列对照品储备液，4℃冷藏备用。

2.1.3 芦丁标准曲线的绘制 分别移取芦丁对照品系列溶液0.5mL于10mL具塞试管内，加入0.5mL 5%NaNO2溶液，室温放置5min，加入0.5mL 10%AlCl3溶液，室温放置5min，加入2mL 4%NaOH溶液，摇匀静置15min。使用移液枪将显色后的溶液各200μL转移至96孔板中，应用酶联免疫反应检测仪在510nm波长处测定吸光度值（A），以系列对照品储备液的浓度（c）为横坐标，与之相对应的吸光度值（A）为纵坐标进行线性回归。得到芦丁标准曲线y=0.0019x+0.0557，r2=0.9988。

2.1.4 山药中总黄酮含量测定 精密吸取山药提取0.5mL于10mL具塞试管内，应用NaNO2-Al（NO3）3-NaOH黄酮显色法在510nm波长处测定吸光度（A），再由标准曲线公式计算得到提取液的总黄酮浓度（C）。按照以下公式换算计算。

式中 X：山药总黄酮含量，mg·g-1；M：称取药材质量，g；a：稀释倍数；C：提取液总黄酮浓度，mg·mL-1。

2.2 方法学考察

2.2.1 精密度考察 精密吸取芦丁对照品溶液0.5mL于10mL具塞试管，按“2.1.4”项下方法进行显色并测定吸光度值，在该条件下连续测定6次，计算总黄酮含量的RSD%为4.35%，表明仪器精密度良好。

精密吸取山药生品、土炒山药、麸炒山药、蜜麸炒山药（皮、粉）总黄酮提取液样品溶液0.5mL于10mL具塞试管内，按“2.1.4”项下方法进行显色并测定吸光度值，在该条件下连续测定6次，计算总黄酮含量的RSD%为5.12%，表明仪器精密度良好。

2.2.2 稳定性考察 精密吸取山药生品、土炒山药、麸炒山药、蜜麸炒山药（皮、粉）总黄酮提取液样品溶液，于室温环境中放置，分别在第 0、2、4、6、8h 分别测定吸光度，计算不同时间测得的总黄酮含量，总黄酮含量RE%在-5.54%～6.22%之间。结果表明供试品溶液在室温条件下放置8h内稳定。

2.2.3 加样回收率考察 精密称取9份山药药粉各1g，分别置于50mL锥形瓶中，分别精密加入混合对照品溶液2、4、6mL，分别用95%乙醇补足，总体积为50mL。精密量取15ml按照“2.1.1”项下方法制备供试品溶液，按“2.1.4”项下显色方法测定吸光度并计算总黄酮含量，计算回收率87.4%～98.2%。

2.2.4 总黄酮含量测定 分别称量生山药、土炒山药、麸炒山药、蜜麸炒山药（皮、粉）各1g，每组6份，分别按照“2.1.1”项下方法制备供试品溶液，按“2.1.4”项下显色方法测定吸光度值并计算总黄酮含量，含量测定结果见下表。

表1 山药及几种炮制品（皮质、粉质）总黄酮含量Tab.1 Tobal flavonoids contentol of yam and several processed products（skin and powdery）

3 结论

结果表明，炮制前后山药总黄酮含量略有升高，以蜜麸炒山药皮质部位的总黄酮含量最高。山药皮质部分含量远高于其粉质部位，生山药皮总黄酮含量为粉质部位3.46倍，土炒山药皮总黄酮含量为粉质部位4.16倍，麸炒山药皮总黄酮含量为粉质部位3.74倍，蜜麸炒山药皮总黄酮含量为粉质部位3.56倍，由此可知，山药皮具有大量的黄酮类成分，黄酮类成分具有抗氧化等功效，而从植物中提取天然抗氧剂是当今研究的热点之一，这无疑为山药药材开发与利用提供了佐证。