3种丹参注射剂对大鼠急性心肌缺血的改善作用

张海啸 于长安 史载祥 杜金行

(清华大学附属垂杨柳医院中医科，北京 100022)

冠心病主要由冠状动脉梗阻或狭窄导致，中医学属胸痹范畴，“血脉瘀滞、不通则痛”是其病机的一个重要方面，临床采用活血化瘀法治疗[1]。丹参是传统活血化瘀中药，自明代以来即有“一味丹参，功同四物”之说，临床广泛用于治疗心血管病[2]。现代药理研究表明，丹参制剂具有一定的抗动脉粥样硬化、抗心肌缺血、改善心肌重构、抗心律失常的心血管保护作用[3-4]。前期临床研究证明丹参制剂活血通脉，可缓解冠心病心绞痛患者胸部刺痛、绞痛或心悸等症状[5]。本实验研究进一步比较3种丹参注射剂对大鼠急性心肌缺血的改善作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 雄性SD大鼠115只，平均体质量(247.3±10.5) g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，动物合格证号：SCXK(京)2006-0001。饲养环境：温度20～25 ℃，湿度40%，自由饮食饮水，每日光照和黑暗各12 h。

1.1.2 实验药物及试剂 注射用丹参(冻干)(哈药集团中药二厂，国药准字Z10970093)；丹参注射液(正大青春宝药业有限公司，国药准字Z33020176)；注射用丹参多酚酸盐(上海绿谷制药有限公司，国药准字Z20050247)；硝酸甘油注射液(北京益民药业有限公司，国药准字H11020289)；垂体后叶素注射液(南京新百药业有限公司，国药准字H32026637)；2%戊巴比妥钠溶液(北京化学试剂公司)；肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司)。

1.1.3 实验仪器 全自动生化分析仪(Sapphire 600型，爱尔兰欧迪诊断公司)；低速冷冻离心机(DDL-5型，上海安亭科学仪器厂)；Medlab®生物信号采集处理系统(medlab-U/4c501H型，南京美易科技有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 动物选择及分组 将115只SD大鼠适应性喂养1周，腹腔注射2%戊巴比妥钠溶液2 mL/kg麻醉，测标准肢体Ⅱ导联心电图1 min，剔除异常心电图大鼠，筛选90只大鼠继续饲养1周。采用随机数字表法将其分为6组，正常组、模型组、注射用丹参(冻干)组、丹参注射液、注射用丹参多酚酸盐组、硝酸甘油注射液组，每组15只。

1.2.2 预给药方法 注射用丹参(冻干)组大鼠予注射用丹参(冻干)4 mg/mL腹腔注射；丹参注射液组大鼠予丹参注射液4 mg/mL腹腔注射；注射用丹参多酚酸盐组大鼠予注射用丹参多酚酸盐1.6 mg/mL腹腔注射；硝酸甘油注射液组大鼠予硝酸甘油注射液0.5 mg/mL腹腔注射。实验药物剂量为成人常用剂量按照人鼠体表面积换算公式换算成等效剂量,各药物临用前用0.9%氯化钠注射液配制成所需浓度，给药容积为10 mL/kg。正常组、模型组大鼠予等容积0.9%氯化钠注射液腹腔注射。均每日1次，连续给药3 d。

1.2.3 大鼠急性心肌缺血模型制备[6]第3 d给药后1 h，各组大鼠均予腹腔注射2%戊巴比妥钠2 mL/kg麻醉，测标准肢体Ⅱ导联心电图作为急性心肌缺血前值。然后注射用丹参(冻干)组、丹参注射液组、注射用丹参多酚酸盐组、硝酸甘油注射液组大鼠腹腔注射垂体后叶素注射液10 U/kg，造成大鼠急性心肌缺血，监测标准肢体Ⅱ导联心电图15 min，采集急性心肌缺血后1、5、10、15 min的心电图为急性心肌缺血后值。

1.3 观察指标及方法

1.3.1 心电图监测[7]测量给药前及给药后各时间段大鼠心电图上J点(mV)及T波(mV)，计算给药前后变化值(△mV)的绝对值。

1.3.2 心肌酶检测 心电图监测后，腹主动脉采血测定血清肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)。

2 结 果

2.1 各组大鼠急性心肌缺血后1、5、10、15 min心电图J点位移变化比较 见表1。

表1 各组大鼠急性心肌缺血后1、5、10、15 min心电图J点位移变化比较

由表1可见，模型组大鼠急性心肌缺血后1、5、10、15 min心电图J点位移变化均高于正常组(P<0.05)，说明急性心肌缺血模型成功；注射用丹参(冻干)组、丹参注射液组、注射用丹参多酚酸盐组、硝酸甘油注射液组大鼠急性心肌缺血后5、10、15 min心电图J点位移变化均低于模型组(P<0.05)；注射用丹参(冻干)组大鼠急性心肌缺血后10、15 min心电图J点位移变化低于丹参注射液组、注射用丹参多酚酸盐组、硝酸甘油注射液组(P<0.05)，丹参注射液组、注射用丹参多酚酸盐组、硝酸甘油注射液组大鼠急性心肌缺血后10、15 min心电图J点位移变化两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)；注射用丹参(冻干)组、丹参注射液组、注射用丹参多酚酸盐组、硝酸甘油注射液组大鼠急性心肌缺血后1、5 min心电图J点位移变化两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。

2.2 各组大鼠急性心肌缺血后1、5、10、15 min心电图T波高度变化比较 见表2。

表2 各组大鼠急性心肌缺血后1、5、10、15 min心电图T波高度变化比较

由表2可见，模型组大鼠急性心肌缺血后1、5、10、15 min心电图T波高度变化均高于正常组(P<0.05)，说明急性心肌缺血模型成功；注射用丹参(冻干)组、丹参注射液组、注射用丹参多酚酸盐组、硝酸甘油注射液组大鼠急性心肌缺血后5、10、15 min心电图T波高度变化均低于模型组(P<0.05)；注射用丹参(冻干)组大鼠急性心肌缺血后10、15 min心电图T波高度变化低于丹参注射液组、注射用丹参多酚酸盐组、硝酸甘油注射液组(P<0.05)；丹参注射液组、注射用丹参多酚酸盐组、硝酸甘油注射液组大鼠急性心肌缺血后10、15 min心电图T波高度变化两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)；注射用丹参(冻干)组、丹参注射液组、注射用丹参多酚酸盐组、硝酸甘油注射液组大鼠急性心肌缺血后1、5 min心电图T波高度变化两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。

2.3 各组大鼠血清CK、CK-MB、LDH比较 见表3。

表3 各组大鼠血清CK、CK-MB、LDH比较

由表3可见，模型组大鼠血清CK、CK-MB、LDH均高于正常组(P<0.05)，说明急性心肌缺血模型成功；注射用丹参(冻干)组大鼠血清CK、CK-MB、LDH均低于模型组(P<0.05)；丹参注射液组、注射用丹参多酚酸盐组、硝酸甘油注射液组大鼠血清CK-MB、LDH均低于模型组(P<0.05)；注射用丹参(冻干)组大鼠血清CK、CK-MB均低于丹参注射液组、注射用丹参多酚酸盐组、硝酸甘油注射液组(P<0.05)；丹参注射液组、注射用丹参多酚酸盐组、硝酸甘油注射液组大鼠血清CK、CK-MB两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)；注射用丹参(冻干)组、丹参注射液组、注射用丹参多酚酸盐组、硝酸甘油注射液组大鼠LDH两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。

3 讨 论

丹参味苦，性微寒，入心、肝经，功效活血祛瘀，通经止痛，清心除烦，凉血消痈[8]。丹参最早载于《神农本草经》，列为上品，“味苦，微寒，无毒。主心腹邪气……寒热积聚，破癥除瘕……”。《妇人明理论》曰“丹参能破宿血，补新血……功类当归、地黄、芎穹、芍药故也”，故有“一味丹参，功同四物”之说。现代药理研究表明，丹参活性成分具有扩张血管、增强心肌耐缺氧能力、清除氧自由基、保护血管内皮细胞、改善微循环及减少高凝、高脂、高黏状态等作用[9-11]，广泛用于治疗心血管疾病。

虽然各种丹参注射液改善心肌缺血的作用和疗效明确，但临床上丹参注射液种类繁多，如何选择应用丹参注射液也是困扰临床医生的难题之一。本实验通过观察3种丹参注射液对大鼠心肌急性缺血的改善作用，为临床应用提供实验依据。丹参类注射剂中主要成分含量分析[12]表明，注射用丹参(冻干)、丹参注射液、注射用丹参多酚酸盐成分主要为水溶性成分，包含丹参素、丹酚酸A、丹酚酸B、原儿茶醛、迷迭香酸、咖啡酸等。但注射用丹参(冻干)中丹酚酸A、丹参素、原儿茶醛等成分含量较高，不含丹酚酸B；注射用丹参多酚酸盐只有丹酚酸B和迷迭香酸2种主要成分，且含量较高；而丹参注射液中含有丹酚酸A、丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B、迷迭香酸和咖啡酸6种成分，但各成分含量都不是很高。因此，本研究结果显示注射用丹参(冻干)组大鼠表现出较好的心电图和心肌酶改善作用，可能与丹酚酸A、丹参素、原儿茶醛等成分含量较高有关。

丹参水溶性成分主要通过舒张冠脉保护内皮细胞，抗血小板聚集，调节能量代谢和活性氧代谢，以及抑制炎性反应、细胞凋亡、钙超载和调控自噬抗心肌缺血及再灌注损伤[13]，可预防衰竭心脏的心肌纤维化、心肌肥大、血流动力学恶化及收缩和舒张功能障碍[14]。本研究涉及到的3种丹参注射剂成分含量最高的为丹参素、丹酚酸A和丹酚酸B，均有一定的扩张冠状动脉血管的作用。有研究发现，丹酚酸A可通过调节高脂血症大鼠血脂总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平，保护内皮屏障功能而减轻游离脂肪酸导致的内皮细胞损伤[15]，并可通过硫氧化还原蛋白/c-jun N-末端激酶(Trx/JNK)信号传导途径抑制心肌细胞凋亡和炎性反应[16]。丹酚酸B主要通过改善内皮细胞分泌功能对抗缺血再灌注损伤，减少大鼠心肌缺血再灌注损伤心肌组织内皮素的含量，提高一氧化氮合酶(NOS)活性，增加一氧化氮(NO)释放，调节内皮素(ET)/NO系统平衡，维持冠脉血管张力[17]；还可通过调节心肌Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性，改善心肌能量代谢，减轻心肌损伤[18]。而丹参素可激活冠脉平滑肌细胞钙激活钾通道，导致钾离子外流，诱发血管内皮细胞超极化因子(EDHF)释放，引起平滑肌细胞膜电位超极化，从而舒张血管平滑肌[19]；还可通过调节自噬，调节ATP合酶功能，促进ATP生成，保护心肌细胞[20]。本研究结果显示，注射用丹参(冻干)在改善心电图的J点位移及T波高度变化方面优于注射用丹参多酚酸盐，可能与丹酚酸A及丹酚酸B的含量不同有一定关系。然而，王国振等[21]研究表明，与单纯应用丹酚酸A、丹酚酸B比较，丹酚酸A、丹酚酸B不同配比对大鼠心肌缺血再灌注性损伤具有更好的保护作用，说明丹酚酸A及丹酚酸B联合应用效果可能更好。3种丹参注射剂对急性心肌缺血大鼠心肌相关生化指标CK-MB、LDH均有一定的改善作用。尤其注射用丹参(冻干)组心肌酶相关指标CK、CK-MB的改善作用优于其他2种丹参注射剂及硝酸甘油注射液。

综上所述，3种丹参注射剂对大鼠急性心肌缺血均有一定的改善作用，注射用丹参(冻干)的改善作用略优于丹参注射液、注射用丹参多酚酸盐，其作用差异可能主要与丹参素、丹酚酸A及丹酚酸B含量不同有关。