血浆微RNA-27b-3p、PGR、CA15-3及CEA联合检测在胃癌早期筛查及评估中的应用*

卞晨璐 徐磊霞 周锋

胃癌是临床常见的消化道肿瘤，多数患者起病较隐匿，早期症状不典型，极易造成胃癌的进展[1]。目前临床上对于胃癌的早期筛查尚未形成统一标准，绝大多数患者在发现胃癌时均已发展为进展型胃癌[2]。所以在临床上及时寻找胃癌敏感性指标，对于患者的癌细胞早期发现及癌症进展均具有积极意义。血浆微RNA-27b-3p（micro RNA-27b-3p，miR-27b-3p）是由19～22个核苷酸组成的单链小分子RNA，主要通过患者的靶基因的翻译作用，进而对患者的细胞增殖、分化、凋亡等过程进行调控。胃蛋白酶原比值（pepsinogen ratio，PGR）主要通过患者胃肠道胃蛋白酶原的比值对患者的胃癌侵润情况进行分析[3]。癌抗原15-3（CAl5-3）阳性表达可能是胃癌变细胞的标志之一，同时患者的胃癌进展情况呈现正相关[4]。血清癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）是早期癌症的重要指标，对于胃癌的进展及治疗效果具有显著指示作用。本文通过对血浆微RNA-27b-3p、PGR、CA15-3及CEA联合检测在胃癌早期筛查及恶性程度评估中的临床应用进行分析，为临床治疗提供科学依据。

对象与方法

1 基本资料 选取2012年2月～2013年2月的100例在本院住院的胃癌手术患者为研究对象，研究组患者TNM分期（第八版），Ⅰ期患者36例，Ⅱ期患者63例，在五年随访期间，研究组患者有8例应变更联系方式等原因失访，失访率为8%，平均随访时间为（58.72±10.22）月；另选本院同期体检正常者92例为对照组。两组研究对象的性别、年龄、BMI之间的差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。研究内容经本院伦理委员会审核通过，所有研究对象均对内容知情并签署知情同意书。

表1 两组患者一般资料比较

纳入标准：①符合胃癌诊断标准[5]；②预计生存时间＞6个月；③KPS[6]评分均≥70分；④对本次研究使用药物无用药禁忌；⑤患者知情且同意本研究方案。排除标准：①心、肝、肾功能严重不全者；②存在交流障碍的患者；③血常规异常患者；④不配合本研究方案患者。

2 研究方法 所有患者均进行临床资料收集，分别对患者的TNM肿瘤分期、肿瘤位置、体积、分化程度、转移情况、浸润情况、病理类型、生存情况进行统计。于入组后清晨空腹抽取外周静脉血5 mL，3 000 r/min离心10 min取上清，-80℃储存。使用miRNeasy SERUM/Plasmakit仪器对患者血浆RNA进行提取，使用TRIzol SL（ambion）试剂对患者的血浆RNA进行提取，最后使用实时荧光定量PCR分析仪对患者的RNA-27b-3p水平进行定量分析。采用双抗体夹心ELISA法对患者血清PGR、CA15-3及CEA水平进行检测，试剂盒均购自美国Gene May 公司，操作流程严格按照说明书进行。

3 统计学处理 应用SPSS16.0软件。计量资料以（±s）表示，组间比较采用t检验，计数资料以率表示，采用Pearson χ2检验，对单因素分析有统计学意义的，进一步行Logistic回归分析，P＜0.05表示差异有统计学意义。

结 果

1 两组RNA-27b-3p、PGR、CA15-3及CEA水平对比 研究组患者RNA-27b-3p、CA15-3及CEA水平均高于对照组，PGR低于健康人群，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

2 胃癌患者临床病理特征与RNA-27b-3p、PGR、CA15-3及CEA水平相关性 研究组患者中，不同性别、年龄、肿瘤位置、大小、浸润深度、TNM分期、病理类型患者的血清RNA-27b-3p、PGR、CA15-3及CEA水平之间的差异无统计学意义（P＞0.05）。淋巴结转移超过12枚、肿瘤复发及5年随访死亡患者的血清RNA-27b-3p、CA15-3及CEA水平明显升高，PGR水平明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

3 Spearman相关性分析 通过对观察组患者的RNA-27b-3p、PGR、CA15-3及CEA水平与淋巴结转移、肿瘤复发及随访死亡情况进行相关性分析，患者血清RNA-27b-3p、CA15-3及CEA水平越高，PGR越低，患者淋巴结转移情况、肿瘤复发情况及随访死亡情况越高。见表4。

表2 两组研究对象临床资料对比

表3 胃癌患者临床病理特征与RNA-27b-3p、PGR、CA15-3及CEA水平相关性

表4 RNA-27b-3p、PGR、CA15-3及CEA水平与淋巴结转移、肿瘤复发及随访死亡情况进行相关性

4 患者五年生存情况危险因素Logistic回归分析 血清RNA-27b-3p、PGR、CA15-3及CEA均为结肠癌患者五年生存的独立危险因素，见表5。

表5 患者五年生存情况危险因素Logistic回归分析

讨 论

胃癌是全球常见的消化道肿瘤之一，据研究显示[7]，超过70%的胃癌患者发生在发展中国家，其中亚洲东部地区的胃癌发病率占比超过50%[8]，而我国的胃癌发病率和死亡率均占全世界的50%以上[9]，患者的疾病负担较高，是我国癌症防治的重点疾病之一。在临床上，胃癌患者一旦确诊，基本上处于中晚期进展性胃癌，给患者造成严重的心理负担[10]。所以，及时对早期胃癌患者的临床诊断，对于患者的治疗及预后均具有积极意义。但是目前对于患者胃癌的进展检测方式仅局限于病理活检和放射性检查，包括核磁共振及CT检查，病理活检对于患者而言，损伤和机体耐受程度较差，而放射性检查方法，不仅对患者造成了更大的射线损伤，同时给患者造成了巨大的经济负担。所以，及时寻找科学有效的胃癌进展性血清学指标，对于患者的治疗及病情判断具有积极作用。

本研究中，RNA-27b-3p是胃癌的体异性生物指标，通过对患者癌细胞的增殖、分化等的促进作用，患者胃癌进展迅速，与健康人群相比，研究组患者的RNA-27b-3p水平明显升高，通过对不同分期、浸润程度、复发情况及五年生存情况的分析，患者的RNA-27b-3p水平升高，也可作为胃癌的独立危险因素，其表达水平与胃癌进展呈现正相关。分析认为，RNA-27b-3p基因处于人体9号染色体[11]，患者的该基因位于肿瘤相关脆性位点，对于肿瘤的形成和增殖分化具有积极作用。崔业佳[12]等对胃癌患者的miR-27b-3p表达水平的分析指出，其与胃癌的进展相关，与本文相互印证。CA15-3最早是在乳腺癌患者中被发现，但近年来发现，当患者发生恶性肿瘤及肿瘤进展期，患者的CA15-3在细胞胞浆内大量堆积，同时促进患者的淋巴结转移，CEA表达水平于患者胃癌癌细胞对胃壁的浸润程度相关。而在本研究中，与健康人群相比，研究组患者的CA15-3、CEA水平明显高于对照组，而在胃癌患者中，随着患者的癌症进展，患者的CA15-3、CEA水平明显上升。郭佳[13]等在对胃癌患者的研究中发现，CEA水平与患者的肿瘤分期、淋巴转移及远端转移相关，与本研究相互印证。PGR是胃蛋白酶原Ⅰ与胃蛋白酶原Ⅱ的比值，胃蛋白酶原Ⅰ主要由胃底腺主细胞和颈粘液细胞分泌，而胃蛋白酶原Ⅱ除上述细胞外[14]，其分泌细胞还来自患者的幽门腺和十二指肠腺，当患者的病灶部位发生严重癌症甚至进展，患者的粘膜完整性遭到破坏，患者的胃蛋白酶Ⅰ与胃蛋白酶原Ⅱ分泌紊乱，造成PGR异常降低。本研究中，PGR也是恶性肿瘤及肿瘤进展期的重要危险因素之一，随着患者的癌症进展，患者的PGR异常升高。罗兴利[15]等对胃癌患者的增殖和分化研究中发现，PGR表达水平与患者的胃癌进展呈现负相关，与本文研究一致。

综上所述，RNA-27b-3p、CA15-3及CEA与胃癌进展呈现正相关，PGR水平与胃癌进展呈现负相关，RNA-27b-3p、PGR、CA15-3及CEA对胃癌的筛查及进展具有积极意义。