FSH剂量及应激对文山牛超数排卵效果的影响

文│朱芳贤 赵俊金（全国畜牧总站）

陆灵勇 陈永波（云南省文山壮族苗族自治州畜牧站）

农胜虎 何永定（云南省文山壮族苗族自治州广南县畜牧技术推广工作站）

冯光杰 念博悠（云南谷多农牧业有限公司）

文山牛是经过长期选育的特色地方牛品种，具有适应性强、抗病力强、耐粗饲和肉质优良等特点，其体型优美，也是斗牛等文化活动的素材，养殖文山牛是当地主要经济来源之一。开展文山牛保种胚胎收集保存工作，以避免养殖过程中环境变化，以及杂交、近交等因素造成的优良基因流失，同时也是更好节约保种成本。胚胎保存了品种的全部基因，可很快恢复遗传资源，与其他方法相比具有突出的优越性，本文分析了促卵泡素（FSH）剂量及应激对文山牛超数排卵效果的影响，为提高文山牛良种扩繁技术提供参考，对提高云南省乃至西南地区牛品质，提高牛养殖效益具有重要意义。

一、材料与方法

1.供体牛。2016年9～12月，从国家文山牛核心育种群中选择产犊后37天以上，年龄3～10岁，体重300～450千克的母牛，白天放牧，夜晚舍内补饲。

2.主要药品与器械。黄体酮阴道缓释剂（CIDR）1.9克/支，新西兰DEC国际有限公司生产；FSH 400毫克/支，加拿大（CAN）Follitropin生产；日本产FSH 10AU×5支；氯前列烯醇（PG）0.2毫克/2毫升/支，上海市计划生育科学研究所生产；普鲁卡因40毫克/2毫升/支，北京市永康药业有限公司生产；促黄体素释放激素A3（促排3号）20微克×10支，宁波三生药业有限公司生产；体视显微镜；美国AB公司生产的牛用二通式冲卵管；集卵杯。

3.试验设计。应激组分Ⅰ组和Ⅱ组，经历气温骤变，Ш组为正常组没有经历气温骤变，也是剂量对比试验的Ш组，这三组都给予相同的日本产FSH 20.0AU剂量；不同FSH剂量试验为Ш组和Ⅳ组，Ш组15头；Ⅳ组给予日本产FSH 22AU，6头。各试验组采用的超数排卵程序是第0天放CIDR栓，第9天开始注射FSH，间隔12小时注射FSH 1次，FSH注射量递减，第5次注射FSH时同时注射0.2毫克PG，第7次注射FSH时撤掉CIDR栓；同时在放CIDR和配种时各注射维生素ADE注射液3毫升，撤栓时用0.9%生理盐水冲洗阴道，配种时注射促排3号15微克。详细超数排卵程序见表1。

表1 超数排卵程序

4.供体母牛配种。观察到供体母牛第1次站立发情后12小时后配种，连续配种2～3次，间隔10～12小时。

5.胚胎的采集与质量鉴定。第7天采用非手术法收集胚胎，发情日为0天。每侧用含1%血清的杜氏磷酸盐缓冲液（PBS）400～500毫升冲洗子宫角。子宫回流液静置3～5分钟后在实体显微镜下捡出卵子或胚胎，并保存在保存液中。按《NY/T1674牛羊胚胎质量检测技术规程》进行胚胎鉴定分级。

6.数据处理。使用SPSS软件对各组数据进行单因素差异显著性分析。试验数据以“平均值±标准差”表示，超数排卵有效而冲卵失败的个体不作为分析对象。

二、结果与分析

1.文山牛超数排卵效果。21头正常情况下的文山牛，只均黄体数11.62个，只均获卵数8.62枚，只均获有效胚5.67枚，见表3。

2.应激对超数排卵效果的影响。应激Ⅱ组27日发情，28日配种，之前3天最高温度26～27℃，温差仅1℃，应激Ⅰ组29日发情，30日配种，发情日发生气温骤变，最高温度由26℃降到16℃，温差达10℃。由表2可知，应激Ⅰ组只均黄体数比应激Ⅱ组少2.83个（P＜0.05），比正常组（Ш组）少3.00个（P＜0.05），应激Ⅱ组只均黄体数和正常组没有差异（P＞0.05）；应激Ⅰ组只均回收卵数比应激Ⅱ组少3.26个（P＜0.01）、卵子回收率低14%，比正常组少3.13个（P＜0.01）、低11%，应激Ⅱ组只均回收卵数和卵子回收率低与正常组没有差异（P＞0.05）；应激Ⅰ组只均有效胚数比应激Ⅱ组少3.13个（P＜0.01）、有效胚率低31%，比正常组少3.80个（P＜0.01）、低47%，应激Ⅱ组只均有效胚数比正常组少0.67个（P＞0.05）、卵子回收率低16%。

3.不同F S H 剂量超数排卵效果的比较。由表3可见，Ⅳ组（22.0AU）效果最佳，只均黄体数、只均回收卵数、卵子回收率、只均有效胚数、有效胚率分别为14.0个、10.33个、75%、7.83枚和76%，Ⅳ组只均黄体数、只均回收卵数、卵子回收率高于Ш组（P＞0.05），Ⅳ组只均有效胚数、有效胚率高于Ш组（P＜0.05）。

三、讨论

1.文山牛超数排卵效果。牛的超数排卵受不同品种和饲养管理等因素影响。朱化彬（2014）报道，美国2002—2011年奶牛和肉牛每次超数排卵获得可移植胚胎数量平均为6.1～6.7枚/次。中国引入肉牛品种体内胚胎每头平均有用胚胎在5.7～7.0枚。地方品种由于环境、个体差异大，超数排卵效果差异大，每头平均有用胚胎在2.0～5.0枚。王木等（2006）报道南阳黄牛头均有用胚数2.89枚，朱芳贤等（2016）报道雷琼牛头均有用胚数3.24枚，乔利敏等（2008）报道晋南牛头均有用胚胎为3.90枚，李金辉等（2007）报道秦川牛有用胚4.20枚，王新庄等（2010）报道郏县红牛头均有用胚数为4.28枚，胡在钜等（2013）报道广西南丹黄牛头均有用胚数4.40枚，朱芳贤等（2015）报道复州牛头均有用胚数4.62枚。本试验中，21头次文山牛在正常气候、放牧加补饲条件下获得了头均有用胚数5.67枚，高于雷琼牛、广西南丹黄牛两品种，这三个同属于含瘤牛血统的品种，都属于小型牛品种，试验中考虑文山牛有放牧加补饲等稍好饲养管理条件，与雷琼牛相比，加大FSH剂量，得到比雷琼牛好的效果，说明除品种外饲养管理条件也是影响超数排卵效果的关键因素。

2.应激对超数排卵效果的影响。桑润滋等（2011）报道气温突然降低10℃以上使美利奴超细毛羊平均获胚数降低0.8枚，头均可用胚数降低2.7枚，可用胚率降低27.1%，认为影响明显，其原因是环境突然改变造成机体应激反应，使母羊体内相关的生殖激素的分泌发生改变，使下丘脑—垂体—肾上腺皮质激素（HPA）轴兴奋，使CRH分泌增加，促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）对促性腺激素释放激素（GnRH）分泌有抑制作用，进而影响黄体素（LH）和FSH的分泌，最终影响超排效果。本次试验中气温突然降低10℃，使文山牛平均黄体数降低3.00个，平均获卵数降低3.13个，卵子回收率降低11%，头均可用胚数降低3.80枚，可用胚率降低47%。云南潮湿，温度有变化时感觉明显，有“雨后便是冬”的感觉，试验中应激Ⅰ组和Ⅱ组经历的气温差异的间隔虽然只差1天，超数排卵效果有明显差异。可能是Ⅱ组在气温变化前已经完成激素更替及分泌量变化，所以排卵多，形成黄体多，最终有效胚胎也多。与Ⅱ组相比，Ⅰ组的牛发情表现不明显，活动和爬跨少，内部可能也表现为FSH和LH的更替及分泌量受影响，最终造成卵巢排卵少形成黄体少的结果。试验中Ⅱ组有效胚率还是低于整个处理过程中都没有受过应激的正常组（Ш组），尽管平均黄体数和获卵数没有差别，可能是Ⅱ组受气温突然改变影响，其黄体发育也受影响，黄体酮分泌减少，胚胎发育受阻，有效胚减少。

表2 应激对超数排卵效果影响

表3 不同剂量超数排卵效果的比较

3.不同FSH剂量超数排卵效果的比较。本次超数排卵试验是生产活动，根据经验只做了2个剂量组，结果是22 AU组只均有效胚数、有效胚率高于20 AU组（P＜0.05），初步说明对于文山牛日本产FSH剂量22 AU优于20AU，当然最佳剂量待进一步的试验。结果说明超数排卵中适宜FSH剂量是取得好的超数排卵效果的关键因素之一。

四、小结

超数排卵中，气温发生气温骤变带来的应激影响效果，建议超排工作中要关注天气预报，同时尽量避开一些“节气”，通常节气都有气温变化。

超数排卵中各种激素更替及量变化是很大，所以注射间隔时间要固定在10～12小时，剂量一定要准确，注射时漏了要适当补足（稍多点）。

利用胚胎和冻精达到基因保种的目的，是目前优良畜禽品种现代保种的好方法。与活体保种相结合，具有良好效果及具大优势。