水产品中氟喹诺酮类药物残留检测技术研究进展

尹华丁，张 蕾，丁亚平，张梦雪，赵永坡

（1.石家庄市畜产品和兽药饲料质量检测中心 050000；2.石家庄市农林科学研究院 050000）

随着我国居民生活水平的提高，水产品已经是居民餐桌日常的食物，水产养殖也日益发达。 水产品具有高蛋白、低脂肪的特点，是一类适合人类饮食的食物。 但是，近年来随着养殖业的发展，兽药残留成为了影响水产品质量安全的重要问题。 氟喹诺酮（fluoroquinolones，FQs）类兽药具有广谱抗菌，杀菌效果好，成本低等优点，近年来在水产养殖业得到了广泛的使用，较为常见的药物有环丙沙星、恩诺沙星等。 过分的滥用导致了水体受到污染，水产品中药物残留超标，被人类食用后可以造成人体内分泌系统、消化系统等的损伤。 因此，建立灵敏度高、操作简便、高通量的检测方法势在必行， 本文介绍了几种针对水产品中氟喹诺酮类药物的检测方法。

1 胶体金法

胶体金免疫层析法一般用于大量样品的初筛工作，该方法特异性高，灵敏度较高，操作简单，检测所需时间短。 宗婧婧等采用胶体金免疫层析法检测水产品中15 种喹诺酮类药物，样品用0.1%甲酸乙腈溶液提取，正己烷除脂，胶体金试纸条检测，检测时间约为3～5min，恩诺沙星、环丙沙星等15 种喹诺酮类药物检出限在0.3～5μg/kg，检测结果与液质联用法验证结果一致[1]。

2 酶联免疫法

酶联免疫法可作为半定量检测方法，具有快速、灵敏、高通量等优点，操作方法简单，特异性好，适合于基层检测站使用。 郑晶等运用酶联免疫分析方法测定鳗鱼中恩诺沙星残留， 最低检测限为3μg/kg。 向样品中分别添加25、50、100μg/kg 3 个浓度水平的恩诺沙星，平均回收率分别为74.5%、76.6%和66.5%。 特异性试验结果表明与喹诺酮类中的其它药物以及其他类抗生素均无交叉反应[2]。

王强等建立了检测水产品中6 种氟喹诺酮类药物残留的直接竞争酶联免疫吸附分析方法，针对环丙沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、培氟沙星、沙拉沙星和双氟沙星6 种氟喹诺酮类药物的检测限(LOD)均不超过0.5ng/mL，对虾、鳗鲡和鲫鱼三种水产样品中添加5.0、10.0 和20μg/kg 时，加标回收率为70.4%～104.1%[3]。

杨金易等建立了水产品中3 种喹诺酮类(恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星)兽药多残留的新型QuEChERS 前处理技术结合酶联免疫快速检测的分析方法， 样品批内和批间平均回收率分别为94.10%、93.70%[4]。

3 高效液相色谱法

高效液相色谱-荧光检测器法是较为常用的检测氟喹诺酮类药物的实验室检测方法。 兰承兴等针对农业部783 号公告-2-2006 的方法进行了改进， 针对流动相比例， 洗脱体积等进行优化， 实现了在10～40μg/kg 加标浓度下， 回收 率为72.40%～83.68%，优化后的方法回收率高，重复性和分离效果好[5]。

贺江等采用固相萃取—超高效液相色谱法测定水产品中6种氟喹诺酮类药物残留， 固相萃取技术在兽药残留检测中已经得到了越来越多的应用，其具有操作简便，回收率高的特点，逐渐取代了液液萃取的操作；超高效液相色谱法分离度更好，能够在更短的时间完成分析。 该方法添加回收率为63.69%～90.83%，最低检出限为0.5～1.8μg/kg[6]。

4 高效液相色谱-串联质谱法

液质联用法检测兽药残留一般作为确证方法， 能够有效地进行定性以及定量，MRM 方式作为成熟的质谱检测方式， 已经是近年来最为常用的实验室检测方法。 梁晶晶等采用高效液相色谱-串联质谱法快速测定水产品中19 种喹诺酮类药物残留，应用PRiME HLB 净化技术作为前处理方式， 对样品的净化、浓缩、液相色谱分离及串联质谱等相关检测参数进行了优化，各组分在各自浓度范围内线性关系良好， 平均回收率为72.1%～119.9%，检出限均为0.5μg/kg，定量下限均为1.5μg/kg[7]。

质谱法还有一种更加具有优势的定量方法-内标法。采用同位素内标来定量，可以忽略基质效应造成的影响，大大提高回收率。 周伟光等建立了超高压液相色谱-串联质谱方法快速检测水产品中9 种氟喹诺酮类药物残留量的方法。9 种氟喹诺酮类药物在2.5μg/kg、5.0μg/kg、10.0μg/kg 3 个 加 标 浓 度 下 平 均 回 收 率75%～110%[8]。

5 高效液相色谱-高分辨质谱法

高分辨质谱在兽药残留检测领域主要使用的是四极杆-飞行时间质谱（Q-TOF），其特点是通量高，能够一次检测多种化合物，而且对于未知目标物能够进行很好的定性分析，在定量方面检出限也能满足一般的需求。 章红等采用QuEChERS 方法作为预处理， 四极杆-飞行时间质谱法建立了典型水产品中的15 种喹诺酮类药物残留的快速筛查方法。 15 种喹诺酮类残留药物检出限为0.5～1.5μg/kg，方法平均回收率在72.3%～102.1%[9]。

6 毛细管电泳法

除以上的速测以及实验室检测方法外， 常用的水产品中氟喹诺酮类药物残留检测方法还包括毛细管电泳法， 陈宗保等建立了一种利用改性纳米金粒子富集与毛细管电泳-电化学发光(CE-ECL) 法测定水产品中4 种氟喹诺酮类药物残留的分析方法，该方法用于鳗鱼样品的分析，回收率为94.5%～112%[10]。

7 结语

国内水产养殖越来越发达， 养殖用药也成为了困扰水产品质量安全的一大问题，尤其是氟喹诺酮类药物疗效较好，成本低廉，目前已经被广泛用于水产养殖治疗过程中。 但是由于药物残留危害巨大，已经引起了广泛的重视，我国也专门针对此类药物出台了相应规范。 由此引发的残留检测也受到了空前的重视，各种速测方法、实验室确证方法层出不穷，其中胶体金法、酶联免疫法前处理简单，适合大批量样品做快速筛查，但准确度有所欠缺。 高效液相色谱法是最为常用的检测方法，灵敏度较高，但是由于色谱柱分离性能受到基质影响较大，定性能力有较大缺陷。液相色谱-串联质谱联用法和液相色谱-高分辨质谱联用法作为近年来常用的实验室确证检测方法， 拥有较高的定性能力和定量能力，是较为理想的实验室检测方法，但由于设备昂贵，限制了基层检测机构的使用。 毛细管电泳法分离度高，成本较低，但检出限较高。 在实际检测中，要根据样品数量，检测样品的基质，实验室设备等条件选择合理的检测方法。