气质联用法检测对甲苯磺酸酯类杂质

刘 成，张书玉，袁艳丽，蔡英杰，李新丽

(江苏省理化测试中心，江苏 南京 210042)

消旋卡多曲作为一种新作用机制的抗腹泻药，直接抑制肠道过度分泌，快速改善腹泻症状，能明显缩短病程、减少患儿的痛苦，适用于成人及1月以上婴儿和儿童的急性腹泻[1]。消旋卡多曲生产工艺线路长，在药物生产过程中使用了对甲苯磺酸盐、甲醇、乙醇和异丙醇等有毒有害试剂，产品中容易有对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸乙酯、对甲苯磺酸异丙酯等杂质的残留。由于对甲苯磺酸酯类被视为潜在基因毒性杂质，可与DNA发生烷基化反应[2-3]，从而可能成为引发癌症的诱因[4-5]，因此要严格控制消旋卡多曲中对甲苯磺酸酯类的含量。本试验采用气相色谱质谱联用技术检测消旋卡多曲中对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸乙酯和对甲苯磺酸异丙酯的含量，为消旋卡多曲药物生产中杂质的检测提供技术依据。

1 实 验

1.1 仪器与试剂

Agilent 7890B-5977A GC/MS气相色谱-质谱联用仪，美国安捷伦；BT25S电子天平，德国赛多利斯。

消旋卡多曲，对甲苯磺酸甲酯(分析纯，纯度≥99%)，对甲苯磺酸乙酯(分析纯，纯度≥99%)，对甲苯磺酸异丙酯(分析纯，纯度≥99%)。

1.2 色谱质谱条件

色谱柱：HP-5ms，固定相为5%苯基-甲基聚硅氧烷气相毛细管柱(长：30 m，内径：0.25 mm，膜厚：0.5 μm)。

载气：氦气。流速：0.8 mL/min。进样口温度：300 ℃。

程序升温：初始柱温80 ℃，保持2 min，以20 ℃/min的速度升到160 ℃，以3 ℃/min的速度升到180 ℃，再以20 ℃/min的速度升到320 ℃，保持15 min。

质谱检测参数：电子轰击(EI)离子源，电离能量70 eV，离子源温度230 ℃，SIM扫描模式，分别选择质荷比(m/z)为65、91、92、107、155、172、186的离子进行检测。

1.3 标准溶液配制

稀释剂：乙腈。供试品溶液：取本品适量，精密称定溶于乙腈中。标准储备液：分别精密称取对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸乙酯和对甲苯磺酸异丙酯标准样品，用乙腈稀释至浓度为10 μg/mL。分别精密量取对照品贮备液50、100、200、300、400、500 μL于10 mL容量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，得线性溶液，浓度为0.05、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50 μg/mL。取上述线性溶液各 1 μL进样，记录色谱图。

2 结果与讨论

2.1 专属性验证

配制对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸乙酯、对甲苯磺酸异丙酯混合标准溶液，进样。专属性考察结果表明，各目标峰(见图1)之间分离度良好，无其他分子量相同的杂质干扰测定，该方法专属性强。

图1 对甲苯磺酸酯类杂质混合标准溶液的总离子流谱图

2.2 检出限

表1 检测限试验结果

取标准溶液适量逐级稀释成0.005 μg/mL的溶液并进样，连续进样3针，记录离子流图，计算得信噪比(S/N)(见表1)。试验数据显示：对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸乙酯和对甲苯磺酸异丙酯检出限浓度分别为0.05 mg/kg、0.067 mg/kg和0.070 mg/kg。

2.3 线性范围

分别配置不同浓度的混合标准溶液，与样品空白溶液同时进行测定，以各组分的峰面积与其对应的质量浓度绘制标准曲线，试验结果表明，对甲苯磺酸甲酯在0.050～0.50 μg/mL浓度范围内线性方程：y=6.366×105x+9159，相关系数：r=0.9992；对甲苯磺酸乙酯在0.05～0.50 μg/mL浓度范围内线性方程：y=2.915×105x-405.3，相关系数：r=0.9991；对甲苯磺酸异丙酯在0.05～0.50 μg/mL浓度范围内线性方程：y=9.753×104x+200.9，相关系数：r=0.9995。

2.4 方法精密度和准确度

分别配制相当于进样浓度0.10 μg/mL、0.40 μg/mL的加标供试品溶液，平行进样6次检测，计算各目标化合物的含量，回收率及回收率的RSD。确定该色谱方法的测定结果与真实值(加入量)的差异，从而确认该方法是否可以获得准确的测试结果。三种化合物的准确度测试结果见表2。对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸乙酯和对甲苯磺酸异丙酯平均回收率分别为93.0%、94.0%、94.3%。各基因毒性杂质的精密度结果分别为对甲苯磺酸甲酯3.5%，对甲苯磺酸乙酯2.7%，对甲苯磺酸异丙酯2.6%，测定结果的RSD 均≤10.0%。各杂质的加标回收试验结果良好。该方法准确度和精密度良好。

表2 对甲苯磺酸酯类准确度测试结果

2.5 样品检测

消旋卡多曲供试品溶液：精密称定供试品各1 g(精确到0.0001 g)，置于10 mL的量瓶中，摇匀，进样测试。结果见表3。

表3 样品检测结果

3 结 论

本试验用气相色谱-质谱联用法测定消旋卡多曲中的对甲苯磺酸甲酯、对甲苯磺酸乙酯、对甲苯磺酸异丙酯，本方法前处理简单、所得数据准确,可用于消旋卡多曲中基因毒性杂质的定量。