高效液相色谱法测定蒙脱石散中香兰素的含量

谢晓丹

（莆田市食品药品检验检测中心 福建莆田 351100）

1 前言

蒙脱石散是临床常用的消化道黏膜保护剂，其主要成分为蒙脱石，辅料为香兰素、葡萄糖、糖精钠等，在食道、胃、十二指肠等病症引起的疼痛症状的辅助治疗中广泛应用，其对消化道内病毒、病菌等有良好的抑制效用，同时还有助于黏膜修复[1]。 其中，香兰素是重要的食品药品添加剂，但需严格控制其含量，食用过量会导致恶心、呼吸困难、呕吐、头痛等。 为保证药品质量，保障患者用药安全，通过有效检测方法准确测定蒙脱石散中香兰素含量具有重要意义[2]。 近年来，随着食品药品检测技术创新和发展，高效液相色谱法（HPLC）作为新型检测技术在中西药有效成分含量测定应用广泛，有着操作便捷、灵敏度高、检测快、准确度高、重现性佳等优势。本文对HPLC 测定蒙脱石散中的有效性成分香兰素进行试验研究，以期为该药的药效和质量评定提供可靠依据。

2 材料及仪器

2.1 材料

香兰素对照品（中国食品药品检定研究院，生产批号：20180519）；蒙脱石散（思密达，博福-益普生制药有限公司，国药准字H20000690）；乙腈（色谱纯，上海吉至生化科技有限公司，生产批号：CX0111180）；磷酸二氢钾（分析纯，苏州恒程化工科技有效公司）；氢氧化钾（分析纯，上海化学试剂有限公司）；超纯水。

2.2 仪器

高效液相色谱仪：Agilent-1200 型，美国安捷伦科技公司，包括G1311A 四元梯度泵、G1313A 自动进样器、G1316A 柱温箱、G1315B 二级管阵列检测器及G1322A 真空脱气机；ChemStationRevA10.02 色谱工作站；电子天平（感量0.1 mg）：MS205DU 型，北京赛多利斯公司。

3 方法

3.1 溶液制备

对照品溶液制备：精确量取香兰素对照品20.0mg，通过流动相超声溶解并定容至50 mL 容量瓶内，充分混合均匀并稀释，制成20 μg/mL 对照品溶液，备用。

供试验品溶液制备：精确量取市场出售的蒙脱石散0.94 g，用流动相溶解，定容至50 mL 容量瓶中，加30 mL 水，充分混合均匀后，先进行超声脱气，然后通过0.45 μm 针头滤膜进行过滤，备用。

3.2 色谱条件

色谱柱为AgillentSB-C18 （4.6 mm×1 500 mm，3.5 μm）；流动相为0.05 mol/L 磷酸盐缓冲液（量取磷酸二氢钾13.6 g 加水溶解并稀释至2 000 mL，再用8 mol/L 氢氧化钾溶液将pH 调至5.0±0.1； 乙腈（97.5∶2.5，V/V）；梯度洗脱，柱温维持在30℃；流速设置为1.0 mL/min；检测波长为279 nm；进样量为10 μL。

3.3 流动相及检测波长选择

将一定浓度对照品溶液于波长200～400 nm 进行紫外光谱扫描，结果表明在279 nm 处有最大吸收，但是考虑在其他波长检测中蒙脱石散内的辅料会影响到半峰宽度，所以本试验确定检测波长为279 nm。

选用不同体积比磷酸二氢钾溶液与乙氰为流动相，发现0.05 mol/L 磷酸二氢钾溶液与乙氰体积比为97.5∶2.5 时，出峰时间短，且色谱峰半峰宽较小。

3.4 方法考察

线性关系分析：吸取对照品溶液1、2、3、4、5、6 mL通过流动相定容至50 mL 容量瓶中，配制成20、40、60、80、100、120 μg/L 浓度的标准品溶液，充分摇匀。然后分别取以上标准品溶液按10 μL 进样，于3.2 色谱条件下测定并记录溶液色谱峰面积，横坐标为浓度（X）、峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线图，再进行线性回归分析[3]。

重复性试验：精确量取同批号蒙脱石散6 份，均为0.94 mg，按照供试验品溶液步骤操作，于3.2 色谱条件下对溶液的香兰素含量进行HPLC 测定。

稳定性试验：精确量取香兰素对照品溶液20 μL，分别在1、2、4、6、10、12、24 h 于3.2 色谱条件下进样，记录保留时间与峰面积，并计算相对标准偏差（RSD）。

精密度试验：精确量取香兰素对照品溶液，配制成20、40、60、100 μg/L 标准溶液，按3.2 色谱条件测定，每一种标准溶液重复进样测定6 次，计算RSD。

回收率试验：精密量取香兰素对照品溶液适量，依照处方量加空白敷料和药物，混合均匀，进行测定计算回收率[4]。

样品有效成分量测定：精确量取蒙脱石散样品3 份，0.94 mg/份，按照供试验品溶液制备操作，测定峰面积，然后代入回归方程计算有效成分含量。

4 结果

4.1 色谱表现

按相应色谱条件测定， 得到对照品与供试验品高效液相色谱图，显示有效成分分离度良好，详见图1和图2。

图1 供试验品色谱图

图2 对照品色谱图

4.2 线性关系

通过测定，在5.40～32.19 μg/mL 内香兰素的浓度和峰面积有良好线性关系，相关系数r＞0.972，回归方程为Y=46342X＋26443（n=6）。

4.3 重复性

对6 份样品溶液进行测定，测得峰面积RSD 为1.35%，表明该检测方法有着良好重复性，详见表1。

表1 HPLC 测定蒙脱石散内香兰素含量重复性

4.4 精密度

于标准曲线项下，平行测定对照品溶液6 次，测得香兰素标准溶液的峰面积RSD 为1.12%，表明该测定方法有着良好精密度。

4.5 回收率

结果显示，蒙脱石散供试验品溶液中的香兰素提取回收率为99.56%～100.44%，详见表2。

表2 HPLC 测定蒙脱石散中的香兰素回收率

4.6 样品有效成分含量

通过测定并代入回归方程计算有效成分平均含量为1.10 mg/g，符合有关规定，详见表3。

表3 蒙脱石散中的香兰素含量

5 讨论

蒙脱石散是一种常见的腹泻治疗药物，适用于成人和儿童急慢性腹泻，常用于胃溃疡、反流性食管炎、急性胃肠炎、小儿病毒性肠炎、慢性功能性腹泻等治疗中[5，6]。香兰素是该药物的主要辅助添加成分，应为口服药物，且常用于小儿，因而需严格控制用量。因香兰素分子含有活泼性醛基，易和醇发生加成反应，出现不易识别的浓度峰，影响含量测定，所以在HPLC 测定中通常需添加一定量的乙腈，以确保检测色谱柱的稳定性，保证检测结果精确性。

本研究通过HPLC 对西药蒙脱石散中的香兰素含量进行测定，结果显示香兰素含量为1.10 mg/g，精密度高，且有良好的重复性、稳定性，符合药物标准成分测定要求。在应用HPLC 检测时，需要设置好色谱条件和流动相，后者需要结合试验条件将pH控制在标准范围，以保证在检测中的分离作用，以便区分香兰素含量检测峰值变化[7]。 另外，进行药物有效成分检测时，要在空白药品中加入标准溶液，用HPLC 色谱测定，不同浓度样品中药物的色谱变化也存在差异，且蒙脱石散中的香兰素的色谱图含量峰值面积也均不相同，在分析时需要结合检查记录，并通过不同浓度峰面积变化比较，实现蒙脱石散提取物中有效成分含量的回收分析。 在香兰素含量试验测定中，为保证检测结果的准确性，基于HPLC 检测的原理，还有柱切法、反相色谱法等检测方法，可以实现药物有效成分含量的测定。 但由于仪器设备的要求和操作复杂度较高，在实际检查中应用较少。

综上所述，使用HPLC 对临床广泛应用的腹泻制剂蒙脱石散中的香兰素进行测定有着良好高精密度、重复性及稳定性，符合临床药物检测要求，可作为首选检测方法，保证药物的药效和质量。