乳腺癌组织雄激素受体表达与临床相关病理特征分析

马少君，樊民义，康晓丽，樊国峰，周理乾，李文生

（陕西省人民医院 a.放射科；b.病理科，西安 710068）

乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤，已成为女性患者肿瘤相关死亡的主要原因，在我国乳腺癌是女性发病率第一的恶性肿瘤，增长率及死亡率呈连年攀升态势[1-2]。乳腺癌的病因包括遗传、环境和激素因素的综合作用，这些因素共同改变了正常的乳腺组织，导致肿瘤性改变[3]。激素因子通过复杂的下游信号分子作用，通过性类固醇受体和生长因子传递。雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、表皮生长因子受体-2 (HER-2)在乳腺癌中的表达已被广泛研究，目前针对这些受体的靶向治疗结合放疗、放疗和化疗联合治疗是目前较有效的治疗方法[4]。雄激素受体（androgen receptor，AR）属于核类固醇激素受体家族，它起着细胞内转录因子的作用,特异性合区与受体结合，引起构象变化、二聚作用和随后受体转位进入细胞核。然后二聚体与DNA内的激素受体元件(HRE)结合，产生一系列调节转录变化，其功能与组织类型不同[5]。AR受体在乳腺癌细胞中表达的临床相关性、其在肿瘤转化中的作用以及其对预后的影响已成为一个活跃的研究领域,许多研究显示AR在乳腺癌表达约60%～80%，可因样本大小不同以及AR表达强度的不同截点存在差异[6-9]。有学者报道了AR在乳腺癌癌细胞中的表达与提高整体存活率和无病存活率之间存在重要关联[10-15]，本研究旨在探讨AR表达与其他临床病理参数的相关性，如年龄、绝经状态、 组织学分级、肿瘤大小 、ER，PR，HER-2表达、腋窝淋巴结、Ki-67 指数，以及AR表达对患者预后的影响，期待能够为临床医生提供更多的信息，有助于制定有效乳腺癌的治疗计划和评估患者预后。

1 材料与方法

1.1 研究对象 2012年1月～2016年12月在我院治疗并经病理确诊的女性乳腺癌患者190例，其中 AR阳性（AR+）乳腺癌患者38例，年龄25～86岁，中位年龄52岁；AR阴性（AR-）乳腺癌患者152例，年龄27～82岁，中位年龄54岁；所有患者均为新发病例且病历资料完整，均为单侧原发性乳腺癌。病理组织学分类按照 2012 年世界卫生组织（WHO）《乳腺肿瘤组织学分类》第四版进行。

1.2 试剂和主要仪器

1.2.1 试剂：AR，ER，PR检测试剂均购自福州迈新生物技术开发公司，为即用型试剂盒，用已知阳性切片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。

1.2.2 仪器：荧光显微镜，漩涡混合器，电热恒温培养箱，烤片机，恒温水浴箱。

1.3 免疫组化检测方法 ①所有标本经10g/dl中性甲醛固定、常规脱水、二甲苯透明、石蜡包埋切片。②免疫组化检测乳腺癌组织中 AR，ER，PR，Ki-67，HER2 蛋白的表达，ER，PR结果判定：≥10%的癌细胞核呈棕黄色染色判定为ER，PR阳性表达；染色结果±判定HER-2 为阴性，+++为阳性，++用荧光原位杂交(FISH)进行验证。AR结果判定：肿瘤细胞胞质或胞核出现棕黄色颗粒为 AR 阳性表达，＜10%为阴性（-）；10% ～25%为弱阳性（+）；25% ～50%为阳性（++）；＞50%为强阳性（+++）；Ki-67指数高表达为≥14%，Ki-67指数低表达为＜14%。③免疫组化采用 Envision 二步法，操作过程按试剂盒说明书进行。

1.4 随访 采用门诊复查登记、电话联系等方式对患者随访，随访内容主要为患者是否生存及复发转移，主要观察指标总生存时间(overall survival，OS)。OS定义为从诊断之日起至任何原因导致的死亡或末次随访时间。随访截止日期为2016年12月30日。

图1 免疫组织化学检测 AR 在乳腺癌中的表达情况 （×400）

1.5 统计学分析 采用SPSS20.0 统计软件进行数据分析，组间差异比较采用χ2检验及Fisher精确概率法，用 Kaplan-Meier 法绘制生存曲线，用 Logrank 检验比较生存时间,以P ＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 AR 的表达情况 190例患者中AR表达阳性患者152例，阳性率80%。三阴型乳腺癌TNBC AR表达阳性患者17例，阳性率38.6%（17/44）。免疫组化染色结果AR表达阴性无胞核着色，见图 1A。AR表达阳性可见较多胞核着黄褐色颗粒，见图 1B。

2.2 AR 表达乳腺癌患者的预后分析 120例乳腺癌患者完成五年随访，其中30例死亡。在总体生存分析中，AR阳性病例的预后明显好于AR阴性病例(P=0.022)，见图2。

图 2 Kaplan-Meier 曲线分析 AR 基因表达与乳腺癌患者总生存率的关系

表1 AR表达与临床病例特征相关性[n（%）]

2.3 AR在乳腺癌组织中的表达与临床特征之间的关系 见表1。在190例乳腺癌患者中，AR的阳性表达率为80.0%(152/190) ；组织学分级 Ⅰ/Ⅱ级的患者 AR阳性表达率（84.5%）高于Ⅲ级（66.7%），差异有统计学意义（P＜0.05）, AR 表达与组织学分级呈负相关，多见于较低组织学分级；ER 阳性患者AR阳性表达率（90.3%）高于 ER 阴性组（60.6%），差异有统计学意义（P＜0.05），PR 阳性者的 AR 阳性表达率（90.7%）高于PR 阴性组（65.9%），差异有统计学意义（P＜0.05），AR 表达与ER 及PR 呈负相关；Ki-67 指数＜14%患者AR阳性表达率（90.3%）高于Ki-67指数≥14%患者（75.4%），差异有统计学意义（P＜0.05），AR表达与Ki-67指数呈负相关，多见于Ki-67 指数＜14%患者；Non-TNBC 组患者AR阳性表达率（88.8%）高于TNBC组患者（38.6%），差异有统计学意义（P＜0.05）。在不同年龄、月经状态、肿瘤大小、腋窝淋巴结、HER-2及血管浸润分组中，AR阳性表达差异均无统计学意义（P＞0.05）。

3 讨论

AR属于核受体超家族成员，广泛分布于人体大部分组织和器官，AR是一种在结构上与ER a相关的类固醇激素受体，具有介导雄性激素的作用[16]。AR位于人类X染色体长臂上的AR基因编码区(q11-12)[17]。在无激素作用时，AR位于细胞中，并且至少与3种热休克蛋白(HSPgO，HSP70，HSP56)结合保持稳定。当被激活时，AR通过隔离共激活因子、辅抑制因子和转录调节因子来取代ER并抑制ER靶基因。因此，AR在与配体雄激素结合后，构象发生转变，引起热休克蛋白的解离，AR被转移到细胞核中，促进靶基因的转录[18]。

近年研究表明AR在乳腺癌中的表达率各不相同，多数表达率为 35% ～90%[19-20]，本研究190例乳腺癌患者AR阳性表达率为 80%，与报道结果相近。而高仁里等[21]研究的200例乳腺癌组织的免疫组化结果显示 AR阳性率为56.5%，与本研究结果差异较大，可能与研究样本大小及所使用的免疫组化实验方法不同有关。屠世晔等[22]研究中AR阳性表达率在Luminal A 型、Luminal B型及HER-2过表达型乳腺癌分别为 97.2%，100.0%和 100.0%，而在TNBC中的AR阳性表达率为26.9%，差异具有统计学意义。本研究Non-TNBC中 AR 的阳性表达率为88.8%，TNBC中AR 的阳性表达率为38.6% ，差异有统计学意义。本研究结果与上述研究结果基本相符。

目前已有一些关于AR 与乳腺癌患者临床病理特征及预后之间关系的报道，RIVA等[23]的研究表明，AR在乳腺癌中的高表达往往关联较好的临床病理指标及预后，诸如较低的转移率、较低的瘤细胞增生指数及组织学分级、较高的五年生存率等。多项报道显示AR阳性表达率与 ER 表达呈正相关或与ER，PR 表达呈正相关[24-26]。本研究显示AR表达与组织学分级呈负相关，多见于低组织学分级Ⅰ/Ⅱ级；ER 阳性者的AR阳性表达率（90.3%）高于 ER阴性组（60.6%），差异有统计学意义（P＜0.05），PR阳性者的AR阳性表达率（90.7%）高于PR阴性组（65.9%），差异有统计学意义（P＜0.05），AR 表达与ER 及PR呈负相关。Ki-67 指数＜20%的 AR表达率（90.3%）高于Ki-67 指数≥14%组（75.4%），差异有统计学意义（P＜0.05）。AR 表达与Ki-67 指数呈负相关，多见于Ki-67 指数＜14%组。本研究结果显示，与 AR低表达患者相比，AR高表达患者具有更高的总生存率( P=0.022)，这些结论与上述研究基本一致。多数学者认为ER在乳腺癌的阳性表达对患者的预后有积极作用，本研究AR与 ER、PR阳性表达呈正相关，AR可能是乳腺癌恶性程度低、预后好的一个重要指标。

多数研究显示发病年龄是一个重要的预后及预测因子，乳腺癌的发病与年龄呈负相关，发病越早，预后越差[27]，而本研究表明,患者年龄与AR的表达水平无相关性，结论不一致可能是由于样本量较小所致。本研究发现AR和 HER-2表达状态之间没有显著相关性(P=0.054)，相反，在许多研究中AR表达与HER-2阴性相关[24，28-29],结论不一致亦可能是由于样本量较小，有待较大样本研究。在本研究中，未发现绝经状态与AR表达之间有显著的相关性，而在埃及的一项研究中[16]，发现绝经后患者AR的表达明显增加。淋巴结状况、肿瘤大小及血管浸润在本研究中未显示与AR表达存在关联，与多数研究相符。

综上所述，AR在乳腺癌中具有较广泛的表达，与多种临床病理因素存在相关性,并且通常都与较好的临床预后相关。AR可能是乳腺癌的预测指标及预后重要因素,可为乳腺癌进行靶向治疗提供依据。