支气管哮喘气道炎症表型与Th1/Th2和IgE的相关研究*

努尔阿米娜·铁力瓦尔迪,热依拉·牙合甫，韩利梅，李 新，古力鲜·马合木提

(新疆医科大学第二附属医院呼吸内科，乌鲁木齐 830063)

支气管哮喘是遗传和环境共同作用的结果，随着环境污染的加重，儿童和成人支气管哮喘的患病率逐渐增加，已引起临床和社会的高度重视。病理研究发现[1]，支气管哮喘是多种炎性细胞和炎性介质参与，气道高反应性、呼吸受限可逆、气道重塑的慢性炎症疾病，也是阻塞性肺疾病和呼吸衰竭的重要原因。气道炎症表型是支气管哮喘的重要机制之一，通常根据诱导痰液分为中性粒细胞(Neu)居多型、嗜酸性粒细胞(Eos)居多型、混合型和寡细胞型，近期研究还发现[2]，白三烯表达增多可能也是一个重要的炎症表型。不同的炎症表型可能在发病机制、临床特征以及重要生化标志物表达方面存在一定差异，临床上进行针对性干预有重要意义。因此，该研究重点分析了不同气道炎症表型的支气管哮喘患者的循环血Th1/Th2和IgE水平与临床特征的关系。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2017年6月至2018年12月于本院诊断为支气管哮喘的患者共180例，纳入标准：(1)年龄18～75岁；(2)符合支气管哮喘的诊断标准[3]；(3)近3个月未接受抗哮喘药物治疗，如支气管舒张剂、糖皮质激素、茶碱类；(4)能获得可分析的诱导痰液；(5)取得知情同意，经伦理委员会批准,临床资料完善。排除标准：(1)重症哮喘、哮喘持续状态，合并呼吸衰竭、重症肺炎、肺癌；(2)肝肾功能障碍、自身免疫性疾病。根据诱导痰液Neu和Eos百分比分为Neu组(Neu>65.0%)、Eos组(Eos>1.0%)、混合组(Neu>65.0%且Eos>1.0%)和寡细胞组(Neu<65.0%且Eos<1.0%)，分别50例(27.8%)、98例(54.4%)、21例和11例。Neu组男22例，女28例，平均(42.6±6.7)岁；Eos组男46例，女52例，平均(41.5±6.3)岁；混合组男10例，女11例，平均(43.1±6.5)岁；寡细胞组男5例，女6例，平均(43.2±6.8)岁；性别和年龄组间比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法 入组患者完善相关检查，评估病情，根据哮喘指南推荐进行合理治疗，如吸氧、抗感染、化痰、雾化吸入，药物主要有支气管舒张剂、糖皮质激素、茶碱类等。检测循环血辅助性T细胞1/2(Th1/Th2)和IgE水平，Th1分泌细胞因子血清干扰素-γ(IFN-γ)和Th2分泌白细胞介素-4(IL-4)，抽取清晨外周肘静脉6～8 mL，分装2个抗凝管，1个采用流式细胞术检测Th1/Th2，1个采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测IFN-γ、IL-4和IgE，试剂购自美国Sigma公司，严格按照说明书步骤进行。流式细胞检测主要步骤：取20 μL抗凝外周全血于96孔培养板上培养4 h，于流式管中加入表面标记抗体CD4-FITC，设置同型阴性对照管，避光孵育20 min，300×g离心5 min弃上清；加入胞内抗体IFN-γ-FITC和IL-4-APC，避光孵育50 min；离心洗涤后上机检测。

比较各组患者的临床特征，包括性别、年龄、哮喘病程、严重程度、吸烟、气道感染、过敏性鼻炎(AR)和皮肤点刺试验(SPT)，以及肺功能，包括第1秒用力呼气容积(FEV1)及与用力肺活量的比值(FEV1/FVC)、用力呼气中段流量(MMEF%)、50%用力呼气流量(FEF 50%)和75%用力呼气流量(FEF 75%)。根据标准肺功能检测流程完成，每个患者间隔10～20 min重复测量2次，取平均值。

1.3统计学处理 数据录入采用Excel软件，统计分析采用SPSS20.0软件，计量资料符合正态分布和方差齐性检验，多组间比较采用ANOVA分析和LSD-t检验法作两两组间比较，计数资料作χ2检验；检验水准取双侧0.05，以P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1各组临床特征的比较 Neu组和混合组患者哮喘病程和严重程度明显大于其他两组，吸烟和气道感染率增加；Eos组和混合组患者过敏性鼻炎和皮肤点刺试验阳性率高于其他两组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2.2各组肺功能的比较 4种炎症表型组患者的肺功能FEV1/FVC、FEV1、FEF 50%、FEF 75%、MMEF%比较差异均无统计学意义(P>0.05)。见表2。

2.3各组Th1/Th2、IgE和细胞因子水平的比较 Eos组和混合组的Th1/Th2明显低于Neu组和寡细胞组，IgE水平增加，IFN-γ和IL-4水平升高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表1 各组临床特征的比较

注：与Eos组比较，aP<0.05；与混合组比较，bP<0.05；与Neu组比较，cP<0.05。

表2 各组肺功能的比较

表3 各组Th1/Th2、IgE和细胞因子水平的比较

注：与Eos组比较，aP<0.05；与混合组比较，bP<0.05。

3 讨 论

哮喘是一组高度特异度疾病，约30%～70%有过敏史，远离过敏原和有效的免疫疗法可取得较好的临床疗效[4]。过敏性哮喘的气道组织和细胞以大量浸润Eos和分泌IgE为主要特征，Th2细胞在趋化和激活Eos，刺激B淋巴细胞分泌IgE中发挥主要作用[5-6]。180例哮喘患者中54.4%为Eos型，27.8%为Neu型，是临床中最常见的两种炎症表型，提示气道内的炎症细胞浸润以Eos和Neu为主，Eos反映了气道高反应性和过敏性，与哮喘的主要发生机制相吻合[7]；而Neu则提示气道内过强的感染性炎症，哮喘的促发因素离不开气道内多种病原微生物的感染，如定植菌、获得性病原菌，而且哮喘的维持和进展往往与肺部感染相伴行，抗感染通常也是哮喘的基本疗法[8-9]。

诱导痰液检测Eos水平可帮助判断哮喘控制、预测哮喘失控，在过敏性哮喘儿童中应用有较好的准确性[10]。而且气道Eos含量还与FEV1和对醋甲胆碱反应性有较好的负相关性，对指示气流受限程度和气道高反应性有重要的应用价值[11]。本研究发现Eos组和混合组的Th1/Th2明显小于Neu组和寡细胞组，IgE水平升高，IFN-γ和IL-4水平增加。研究认为[12]，哮喘的发生与机体免疫功能Th1/Th2的平衡障碍有关，以Th1表达下降，Th2升高明显，因此，哮喘患者与健康人群比较，Th1/Th2值显著下降。IgE水平反映机体对过敏刺激的免疫强度，IFN-γ反映Th1细胞活性，IL-4反映Th2细胞活性，T淋巴细胞功能激活进而诱导B淋巴细胞分泌更多的抗体，参与机体的炎性反应和免疫调节[13-14]。

Neu组和混合组患者哮喘病程和严重程度明显大于其他两组，吸烟和气道感染率增加；Eos组和混合组患者过敏性鼻炎和皮肤点刺试验阳性率高于其他两组。气道内Neu浸润增多提示哮喘病情恶化、气道内感染、吸烟等，肺功能下降较明显，多见于大剂量糖皮质激素治疗的重症哮喘、哮喘持续状态患者[15-16]。Neu激活可释放多种酶、细胞因子和炎症介质，参与炎性反应过程[17-18]。各组肺功能指标比较差异无统计学意义。提示，肺功能不能作为鉴别气道炎症表型的依据。哮喘存在不同的炎症表型，但临床特征差异不大[19]。

4 结 论

支气管哮喘患者具有不同的炎症细胞表型，与循环血Th1/Th2和IgE水平以及临床特征有密切联系。研究的目的提示哮喘患者的不同炎症表型可能与临床特征、免疫功能紊乱有关，是否可作为常规临床检查技术，对指导临床用药和改善哮喘预后方面的意义还有待进一步研究。