宫颈癌患者血清叶酸受体-1表达水平及早期诊断价值

李九龙,刘 林,张 湘,李惠惠,张玲琳,刘 华,刘 欣,钟晓武,龙 璠

(1.南充市第五人民医院检验科，四川南充 637100;2.川北医学院转化医学研究中心,四川南充 637100)

近年来我国宫颈癌发病率呈逐年递增趋势，调查显示，宫颈癌患者浸润癌发病年龄44～45岁，原发性癌为30～35岁[1]。大量研究证实[2]90%宫颈癌伴有持续高危型人类乳头瘤样病毒(HPV)感染。随着宫颈细胞学不断发展，部分宫颈癌及癌前病变患者得以及时发现，并进行积极治疗，使宫颈癌发病率和病死率在一定程度上有所降低。但由于宫颈癌发病隐匿，仍有部分患者确诊时已进入中晚期，错失最佳治疗时机，导致患者预后较差。因此宫颈癌的早期诊断和病情监测对于制定合理的治疗方案具有重要意义。目前宫颈癌的治疗方案主要基于宫颈液细胞学检测，但不同病理分期在预测宫颈癌生物学行为存在一定局限性，故寻找有价值的早期诊断宫颈癌的肿瘤标志物一直是临床研究的热点。叶酸受体-1(FOLR1)是糖基化磷脂酰基醇偶联的糖蛋白，相对分子质量38～40×103，由FOLR1基因编码，对叶酸在DNA合成、细胞代谢增殖分裂发挥出重要作用。研究发现[3]FOLR1可从肿瘤脱落的游离受体通过自身孔道进入血液系统，提示血清FOLR1可成为早期肿瘤标志物，在宫颈癌诊断、病情监测方面具有潜在价值，但临床缺乏相应研究。本研究利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清FOLR1表达水平，进一步探讨FOLR1对宫颈癌早期诊断价值，现将研究成果总结如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集2017年1月至2019年1月在南充市第五人民医院门诊行宫颈脱落细胞学检查136例HPV感染患者临床资料，在阴道镜直视下取宫颈组织进行病理组织学确诊，分为宫颈上皮内瘤变组58例和宫颈癌组78例。纳入标准：(1)所有患者均为首次诊断为宫颈病变；(2)近3月内未进行宫颈疾病相关治疗；(3)近1个月未服用B族维生素；(4)术前均未行内分泌、放化疗等抗癌治疗；(5)所有患者术前均签署知情同意书。排除标准：(1)妊娠或哺乳期妇女；(2)宫颈锥切史；(3)合并严重肝肾功能异常者；(4)合并其他肿瘤病史；(5)生殖道炎症或其他妇科合并症。另选择同期52例医院体检的健康女性作为健康对照组，年龄20～60岁，平均(41.8±7.7)岁。排除其他良恶性肿瘤、自身免疫性疾病。本研究经医院伦理委员会审核批准。

1.2方法

1.2.1样本采集 宫颈上皮内瘤变组和宫颈癌组于术前清晨空腹抽取肘静脉血3 mL，以2 500 r/min高速离心15 min，静置10 min后抽取上层血清，置于-70 ℃冰箱内保存备用。对照组于体检当日抽取肘静脉血3 mL，样本处理方式同宫颈癌组。采用酶联免疫吸附试验检测2组血清FOLR1表达水平，检测设备为美国MD SpectraMax M5多功能酶标仪，试剂盒购自于武汉博士德生物工程公司，试验操作严格按照检测试剂盒说明书执行。

1.2.2资料收集 收集3组研究对象临床资料，包括年龄、体质量指数、病理类型、组织分化、肿瘤分期、孕次、流产史、肿瘤家族史等。并将血清FOLR1表达与宫颈癌组临床病理资料进行分析。

2 结 果

2.13组研究对象血清FOLR1含量比较 宫颈癌组血清FOLR1含量明显高于宫颈上皮内瘤变组、健康对照组，差异具有统计学意义(t=8.214、8.587,P<0.001)，而宫颈上皮内瘤变组与健康对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

2.23组研究对象临床资料比较 3组研究对象在年龄、FOLR1、HPV感染、16型HPV感染比较，差异具有统计学意义(P<0.05)；而在孕次、流产史、肿瘤家族史比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

2.3血清FOLR1含量与宫颈癌患者病理参数关系 根据宫颈癌患者血清FOLR1含量中位数271.68 ng/L将患者分为高表达组42例和低表达组36例。血清FOLR1含量与年龄、病理类型、组织分化、FLGO分期、 淋巴结转移有关，差异有统计学意义(P<0.05)；血清FOLR1含量与孕次、流产史、肿瘤家族史无关，差异无统计学意义(P>0.05)，见表3。

2.4血清FOLR1鉴别宫颈病变的诊断效能 血清FOLR1鉴别宫颈癌和宫颈上皮内瘤变的AUC为0.884，根据最大约登指数(0.605)确定最佳界值为201.13 ng/L，灵敏度为81.03%，特异度为79.49%。血清FOLR1鉴别宫颈癌和健康对照组的AUC为0.946，根据最大约登指数(0.769)确定最佳界值为187.53 ng/L，灵敏度为84.62%，特异度为92.31%，见表4、图1。

表1 3组研究对象血清FOLR1水平比较

注：与宫颈上皮内瘤变组比较,*P<0.05；与健康对照组比较,#P<0.05。

表2 3组研究对象临床资料比较

表3 血清FOLR1含量与宫颈癌患者临床资料关系(n)

续表3 血清FOLR1含量与宫颈癌患者临床资料关系(n)

表4 血清FOLR1对宫颈上皮内瘤变、宫颈癌的诊断效能

图1 血清FOLR1诊断宫颈病变的ROC曲线

3 讨 论

宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，发病率约占妇科肿瘤的12%左右，仅次于乳腺癌居于第二位[4]。研究显示[5]叶酸与胃癌、结肠癌、宫颈癌等多种肿瘤发生发展相关，叶酸是S-腺苷蛋氨酸主要成分，而S-腺苷蛋氨酸是维持机体甲基正常代谢提供者。研究证实[6]机体低甲基化发生与叶酸缺乏有关，适量补充叶酸可逆转宫颈癌前病变，及时抑制恶性病变，提示叶酸在细胞增殖、分裂及组织生长方面发挥重要作用。研究发现[7]宫颈癌是多因素导致慢性发病过程，其中HPV持续感染是常见的感染类型。HPV与宫颈癌研究表明[8]，肿瘤细胞组织中叶酸缺乏可降低甲基化水平，导致宫颈癌的发生。本研究结果显示，宫颈癌的发生与HPV持续感染存在协同关系。有学者研究发现[9]HPV16型感染且叶酸浓度低宫颈上皮内瘤变患者明显增大癌变风险，提示这与叶酸缺乏可协同HPV增大宫颈癌病变的风险。

FOLR1为一种膜蛋白，可与GPI偶联细胞膜，能够内吞介导叶酸进入细胞，对叶酸及衍生物具有高度亲和力[10]。研究显示[11]FOLR1在恶性肿瘤上调是因为肿瘤细胞快速生长导致叶酸的代谢需求增加，表明FOLR1在细胞代谢、修复合成DNA及肿瘤细胞增殖分裂中发挥重要作用。本研究首次观察血清FOLR1与宫颈癌患者临床病理资料，结果发现血清FOLR1表达水平与年龄、病理类型、组织分化、FLGO分期、 淋巴结转移有关，与曾正莲等[12]报道的FOLR1蛋白表达与宫颈癌患者临床病理资料的关系一致。说明血清FOLR1与宫颈癌发生发展有关，可以作为患者早期诊断的指标。研究发现[13]FOLR1在正常组织中呈低表达，而在特定上皮组织来源的恶性肿瘤中呈高表达，如非黏液性卵巢癌、原发肾癌、子宫内膜癌、乳腺癌、鼻咽癌、胰腺癌等，并且与肿瘤发生、发展过程密切相关。王皓洁等[14]发现将近78%的Ⅰ～Ⅱ期宫颈癌患者FOLR1呈高水平表达，这与FOLR1中晚期患者中比例相当，但晚期患者的FOLR1表达水平更高。本研究进一步检测血清FOLR1表达水平，结果证实宫颈癌患者血清FOLR1水平明显高于宫颈上皮内瘤变组和健康对照组，表明FOLR1可能在宫颈癌发生发展中发挥重要作用，这与苏敏君等[15]报道相一致。而血清FOLR1水平在早期宫颈癌患者快速升高，并且随着FIGO肿瘤分期而增高，进一步表明FOLR1水平上调可能发生在宫颈癌疾病早期，提示血清FOLR1有作为检测宫颈癌病变的潜在价值。本研究利用ROC曲线分析血清FOLR1对宫颈癌的早期诊断价值，结果发现血清FOLR1鉴别宫颈上皮内瘤变的AUC为0.884，诊断宫颈癌AUC为0.946，说明血清FOLR1有望成为宫颈癌早期筛查和病情监测的肿瘤标志物之一。

4 结 论

宫颈癌患者血清FOLR1水平明显升高，高水平表达FOLR1与患者年龄、病理类型、组织分化、FLGO分期、淋巴结转移有关，血清FOLR1可作为宫颈癌早期诊断指标之一。