石榴花化学成分的研究

周彩虹，金 晨，赵艳红，熊 瑶，李 彤，张 凌*

（1.江西中医药大学药学院，江西 南昌 330004； 2.江西中医药大学现代中药制剂教育部重点实验室，江西 南昌 330004）

石榴花又名榴花，酸石榴花，有大红、桃红、橙黄、粉红、雪白等颜色，以火红色最多。石榴花为石榴科石榴属植物石榴Punica granatumL.的干燥花瓣，是维吾尔族常用药材，维语名阿娜尔、古丽娜。石榴在5～7 月开花，花期长，开花量大，不能结果的钟状花和部分筒状花会自然脱落，因此石榴花资源丰富，极具开发价值［1］。维医认为，其性质二级干寒，具有收敛止泻、止汗止血的作用，常用于腹泻日久；外用于治疗出血不止、口舌生疮、脱肛痔疮、口臭牙疼、皮肤瘙痒。另外，这种花还被用于治疗早生白发的年轻人。

石榴花被收载于1999 年版《卫生部药品标准·维吾尔药分册》、2005 年版《中华本草·维吾尔药卷》［2］。现代药理研究表明，石榴花提取物在抗炎、保肝、治疗糖尿病及其并发症、预防心血管疾病等方面有较好功效［3］，因此研究其化学成分及药效物质基础极为重要，但是目前关于其化学成分的研究较少，其有效成分以多酚、黄酮为主［4］，主要存在于乙酸乙酯和正丁醇部位［5］。本课题组前期建立了不同产地古丽娜的HPLC 指纹图谱，为构建其质量评价体系提供参考［6］，同时在石榴花乙酸乙酯部位中首次分离得到8-甲雷杜辛，7-羟基-4′，6-二甲氧基异黄酮、刺芒柄花素、三粒小麦黄酮、蒲公英萜酮、D-半乳糖醇等［7］。本实验用60%乙醇提取石榴花，在石油醚、正丁醇部位分离得到12 个化合物，其中1～4、7～12 为首次从该植物中分离得到，1～3、7～12 为首次从石榴属植物中分离得到。

1 材料

Mercury 600 型核磁共振仪（美国Varian 公司）；Agilent 1260 型高效液相色谱仪（美国Agilent 公司）；RE-201 型旋转蒸发器、ZF7三用紫外分析仪（杭州瑞佳精密科学仪器有限公司）；HC-150T2 型高效多功能粉碎机（永康市绿可食品机械有限公司）；电热恒温鼓风干燥箱（上海精密实验设备有限公司）；HH-6 型数显恒温水浴锅（国华电器有限公司）；AB104-N 型电子天平（万分之一，瑞士Mettler-Toledo 公司）。柱色谱硅胶、薄层色谱硅胶G、D101 型大孔吸附树脂（青岛海洋化工厂）。CMC-Na 黏合剂（国药集团化学试剂有限公司）；显色剂10%硫酸-乙醇（自制）；Sephadex LH-20 凝胶（美国GE 公司）。氘代试剂（美国CIL 公司）；甲醇（色谱纯，西陇科学股份有限公司）；其他试剂均为分析纯。

石榴花购于新疆和田、喀什、叶城等地，经新疆医科大学兰卫教授鉴定为石榴科植物石榴Punica granatumL.的干燥花瓣。

2 提取与分离

取8 kg 干燥花瓣，用高效多功能粉碎机粉碎，60%乙醇60 ℃加热回流提取2 次，每次60 min，提取液用纱布过滤，合并滤液，减压浓缩得总浸膏。用适量水将总浸膏超声混悬，分别用等体积的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取至无色，回收溶剂得正丁醇部位浸膏（867.7 g）和石油醚部位浸膏（43.9 g）。

正丁醇萃取部位浸膏经AB-8 大孔树脂，以乙醇-水（5%、30%、40%、60%、90%）梯度洗脱得到5 个馏分Fr.1～Fr.5。馏分Fr.4（273.34 g）过硅胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇（100∶1～0∶1）梯度洗脱，得6 个馏分Fr.4.1～Fr.4.6。其中Fr.4.4 经中压ODS、反相柱色谱、Sephadex LH-20分离，再经半制备柱色谱［甲醇-水（25∶75）］，重结晶，得化合物1（9.25 mg）、5（8.00 mg）；Fr.4.3 经Sephadex LH-20，洗脱剂为甲醇，经薄层色谱检识，合并得7 个馏分Fr.4.3.1～Fr.4.3.7，Fr.4.3.3 过硅胶柱，经二氯甲烷-甲醇（8∶1）洗脱，重结晶，得化合物 2（10.31 mg）、6（6.13 mg）；馏分Fr.5（37.13 g）经硅胶柱，二氯甲烷-甲醇（120∶1、60∶1、30∶1、10∶1、5∶1、0∶1）洗脱，经薄层色谱检识，合并得8 个馏分Fr.5.1～Fr.5.8，Fr.5.3 经Sephadex LH-20，得化合物12（8.24 mg）；Fr.3（125.65 g）经中压ODS，以甲醇-水（5∶95、30∶60、50∶50、80∶20、0∶100）梯度洗脱，得5 个馏分Fr.3.1～Fr.3.5，Fr.3.3 经半制备柱色谱［甲醇-水（30∶70）］，得化合物3（20.68 mg）、4（45.75 mg）。石油醚萃取部位（43.9 g）经硅胶柱，以石油醚-乙酸乙酯（200∶1、150∶1、100∶1、80∶1、50∶1、25∶1、10∶1、5∶1、0∶1）梯度洗脱得10 个馏分Fr.6～Fr.15，再经石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，反复过硅胶柱，重结晶得化合物7（4.38 mg）、8（5.57 mg）、9（6.01 mg）、10（12.10 mg）、11（15.28 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：白色粉末，FeCl3显色呈阳性，表明有酚羟基存在。ESI-MSm／z：635.1［M-H］－，分子式C27H24O18，根据其不饱和度和含氧个数推测该化合物为鞣质类。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.16（2H，s，H-galloyl），7.11（2H，s，H-g-alloyl），7.07（2H，s，H-galloyl）为苯环上质子信号，为6 个两两对称的质子，推测其为没食子酸鞣质且为3 个没食子酰基，5.79（1H，d，J＝8.2 Hz，glc-H-1），5.23（1H，t，J＝9.6 Hz，glc-H-4），4.45（1H，dd，J＝12.4，2.3 Hz，glc-H-6），4.23（1H，dd，J＝12.4，4.9 Hz，glc-H-6），4.06（1H，m，glc-H-5），3.85（1H，t，J＝9.3 Hz，glc-H-3），3.66（1H，m，glc-H-2）为糖上的氢信号；13C-NMR（151 MHz，CD3OD）δ：166.9，167.4，168.1（3×galloyl-CO）为3 个没食子酰基上的羰基碳信号，146.4，146.5，146.5（3×galloyl-C-3，5），139.9，140.1，140.1（3×galloyl-C-4），120.5，121.0，121.2（3×galloyl-C-1），110.3，110.4，110.6（3×galloyl-C-2，6）为没食子酰基上的苯环碳信号，63.6（glc-C-6），71.9（glc-C-4），74.1（glc-C-2），74.4（glc-C-3），76.0（glc-C-5），95.8（glc-C-1）为糖上碳信号。以上数据与文献［8］基本一致，故鉴定为β-1，4，6-三-O-没食子酰基葡萄糖。

化合 物2：黄色晶体。ESI-MSm／z：347.1［M-H］＋，分子式C17H16O8。1H-NMR（600 MHz，DMSO-d6）δ：7.30（1H，s，H-7），4.41（1H，dd，J＝7.8，2.0 Hz，H-8），4.06（1H，dt，J＝10.8，6.7 Hz，H-1a′），3.98（1H，dt，J＝10.8，6.5 Hz，H-1a′），2.99（1H，dd，J＝18.6，7.8 Hz，H-9a），2.43（1H，dd，J＝18.6，2.1 Hz，H-9b），1.51（2H，m，H-2′），1.22（2H，m，H-3′），0.82（2H，t，J＝7.4 Hz，H-4′）；13C-NMR（151 MHz，DMSO-d6）δ：13.5（C-4′），18.5（C-3′），29.9（C-9），37.1（C-2′），40.8（C-8），64.3（C-1′），108.0（C-7），113.0（C-7a），115.0（C-3a），138.6（C-3），140.3（C-6），143.7（C-4），145.7（C-2），149.6（C-5），160.2（C-1），171.9（C-11），193.0（C-10）。以上数据与文献［9］基本一致，故鉴定为butylbrevifolin carboxylate。

化合物3：淡黄色针状结晶，FeCl3显色呈阳性，表明有酚羟基存在。1H-NMR（600 MHz，DMSO-d6）δ：10.89（1H，s），10.12（1H，s），10.06（1H，s）为3 个酚羟基信号，7.30（1H，s）为芳氢信号，4.42（1H，dd，J＝7.8，2.1 Hz），2.97（1H，dd，J＝18.7，7.8 Hz），2.46（1H，dd，J＝4.1，2.1 Hz）呈现ABX 系的信号，3.62（3H，s）表明分子中有CH3O-片断；13C-NMR（151 MHz，DMSO-d6）δ：37.0（C-10），40.6（C-9），108.1（C-7），113.0（C-3a），115.0（C-7a），138.4（C-3），140.3（C-5），143.6（C-4），145.8（C-2），149.7（C-6），160.1（C-8），172.5（C＝O），193.0（C-11）。以上数据与文献［10］基本一致，故鉴定为短叶苏木酚酸甲酯。

化合 物4。黄色晶体，ESI-MSm／z：247.0［M＋H］＋，分子式C12H8O6。1H-NMR（600 MHz，DMSO-d6）δ：7.29（1H，s，Ar-7），3.16，2.50（各2H，t，环戊烯酮环上-CH2-CH2-）；13C-NMR（151 MHz，DMSO-d6）δ：23.9（C-8），33.0（C-9），108.0（C-7），113.2（C-7a），115.5（C-3a），140.2（C-3），141.4（C-6），144.2（C-4），145.0（C-2），149.3（C-5），160.6（C-1），195.5（C-10）。以上数据与文献［11］基本一致，故鉴定为短叶苏木酚。

化合物5：白色粉末，FeCl3显色呈阳性，表明有酚羟基存在。ESI-MSm／z：483.1［M-H］－，分子式C20H20O14，根据其不饱和度和含氧个数推测该化合物为鞣质类或黄酮苷类。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.14（2H，s，H-galloyl），7.08（2H，s，H-galloyl）为苯环上质子信号，为4 个两两对称的质子，推测其为没食子酸鞣质且有2 个没食子酰基，5.69（1H，d，J＝7.4 Hz，glc-H-1），4.56（1H，dd，J＝12.1，2.1 Hz，glc-H-6），4.41（1H，dd，J＝12.1，5.0 Hz，glc-H-6），3.74～3.71（1H，m，glc-H-5），3.53～3.51（3H，m，glc-H-2，3，4）为糖上氢信号；13C-NMR（151 MHz，CD3OD）δ：167.1，168.4（2×gallyol-CO）为2 个没食子酰基的羰基碳信号；110.3，110.7（2×galloyl-C-2，6），120.7，121.4（2×galloyl-C-1），140.0，140.5（2×galloyl-C-4），146.6，146.6（2×galloyl-C-3，5）为没食子酰基上的苯环碳信号，64.6（glc-C-6），71.3（glc-C-4），74.2（glc-C-2），76.6（glc-C-5），78.2（glc-C-3），96.1（glc-C-1）为糖上碳信号。以上数据与文献［12］基本一致，故鉴定为β-1，6-二-O-没食子酰基葡萄糖。

化合物6：黄棕色针状结晶。ESI-MSm／z：301.0［M-H］－，分子式C14H6O8。1H-NMR（600 MHz，DMSO-d6）δ：10.71（2H，d，-OH），7.46（1H，s，H-3）；13C-NMR（151 MHz，DMSO-d6）δ：107.7（C-3，3′），110.3（C-2，2′），112.3（C-1，1′），136.4（C-5，5′），139.6（C-4，4′），148.1（C-6，6′），159.2（C-7，7′）。以上数据与文献［13］基本一致，故鉴定为鞣花酸。

化合物7：黄色针状结晶，FeCl3显色呈阳性，表明有酚羟基。ESI-MSm／z：283［M-H］－，分子式C16H12O5，根据其不饱和度推测该化合物存在多个环状结构，可能为黄酮类。1H-NMR（600 MHz，DMSO-d6）δ：12.87（H，s，5-OH），8.23（1H，s，H-2），7.48（2H，d，J＝8.7 Hz，H-2′，6′），6.98（2H，d，J＝8.7 Hz，H-3′，5′），6.24（1H，s，H-8），6.08（1H，s，H-6），3.78（3H，s，4′-OCH3）；13C-NMR（151 MHz，DMSO-d6）δ：55.0（4′-OCH3），94.23（C-8），100.0（C-6），112.2（C-10），113.5（C-3′，5′），121.4（C-1′），123.3（C-3），130.0（C-2′，6′），153.3（C-2），157.7（C-9），158.9（C-4′），161.7（C-5），171.7（C-7），179.2（C-4）。以上数据与文献［14］基本一致，故鉴定为鹰嘴豆芽素A。

化合物8：淡黄色结晶。ESI-MSm／z：299.1［M＋H］＋，分子式C17H14O5。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：7.99（1H，s，H-5），7.97（1H，d，J＝1.9 Hz，H-2），7.50（2H，d，J＝8.8 Hz，H-2′，H-6′），7.05（1H，d，J＝8.9 Hz，H-6），6.98（2H，d，J＝8.8 Hz，H-3′，H-5′），4.08（3H，s，8-OCH3），3.84（3H，s，4′-OCH3）；13CNMR（151 MHz，CDCl3）δ：55.5（4′-OCH3），62.1（8-OCH3），113.9（C-6），114.1（C-3′，C-5′），119.2（C-10），122.3（C-5），124.0（C-1′），124.9（C-3），130.3（C-2′，C-6′），134.0（C-8），150.1（C-9），151.6（C-2），153.1（C-7），159.8（C-4′），175.9（C-4）。以上数据与文献［15］基本一致，故鉴定为retusin-8-methylether。

化合物9：白色无定型粉末（三氯甲烷）。ESI-MSm／z：425.3［M-H］－，分子式C30H50O。1HNMR（600 MHz，CDCl3）δ：5.53（1H，dd，J＝8.2，3.2 Hz，H-15），3.19（1H，dd，J＝11.4，4.4 Hz，H-3），2.03（1H，dt，J＝12.9，3.3 Hz，H-16a），1.91（1H，dd，J＝14.6，3.2 Hz，H-16），1.09（3H，s，25-CH3），0.98（3H，s，24-CH3），0.95（3H，s，23-CH3），0.92（3H，s，26-CH3），0.90（6H，d，J＝1.9 Hz，27-CH3，29-CH3），0.82（3H，s，30-CH3），0.80（3H，s，28-CH3）；13C-NMR（151 MHz，CDCl3）δ：15.6（C-25），15.6（C-24），17.6（C-11），18.9（C-6），21.5（C-30），26.1（C-27），27.3（C-2），28.1（C-23），28.9（C-20），30.0（C-28），30.1（C-26），33.2（C-22），33.5（C-29），33.8（C-21），35.0（C-7），35.9（C-12），36.8（C-16），37.7（C-13），37.8（C-10），37.9（C-17），38.1（C-1），38.9（C-8），39.1（C-4），41.4（C-19），48.9（C-9），49.4（C-18），55.7（C-5），79.2（C-3），117.0（C-15），158.2（C-14）。以上数据与文献［16］基本一致，故鉴定为蒲公英赛醇。

化合物10：白色针状结晶，溶于氯仿，在UV 365 nm 下显浅暗斑，UV 254 nm 下无暗斑无荧光。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：5.35（1H，m，H-6），3.52（1H，m，H-3），1.01（3H，s，19-CH3），0.92（3H，m，21-CH3），0.86（3H，m，29-CH3），0.83（3H，d，J＝2.4 Hz，26-CH3），0.81（3H，d，J＝6.7 Hz，27-CH3），0.68（3H，s，18-CH3）；13C-NMR（151 MHz，CDCl3）δ：12.0（C-18），12.1（C-29），18.9（C-21），19.2（C-27），19.6（C-19），20.0（C-26），21.2（C-11），23.2（C-28），24.5（C-15），26.2（C-23），28.4（C-16），29.3（C-25），31.8（C-2），32.0（C-7），32.1（C-8），34.1（C-22），36.3（C-20），36.7（C-10），37.4（C-1），39.9（C-12），42.4（C-13），42.5（C-4），46.0（C-24），50.3（C-9），56.2（C-17），56.9（C-14），72.0（C-3），121.9（C-6），140.9（C-5）。以上数据与文献［17］基本一致，故鉴定为谷甾醇。

化合物11：无色针晶（三氯甲烷）。EI-MSm／z：654.2［M＋H］＋，分子式C45H80O2。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：5.35（1H，d，J＝5.0 Hz，H-6），3.53（1H，m，H-24），2.35（2H，t，H-4），2.27（2H，m，H-2′），1.00（3H，s，H-19），0.92（3H，m，H-12），0.88（3H，m，H-16′），0.84（3H，s，H-26），0.82（3H，m，H-16′），0.80（3H，s，H-27），0.68（3H，s，H-18）；13CNMR（151 MHz，CDCl3）δ：12.0（C-18），12.1（C-29），14.3（C-16′），18.9（C-21），19.2（C-27），19.6（C-19），20.0（C-26），21.2（C-11），22.9（C-15′），23.2（C-28），24.5（C-15），24.9（C-3′），26.2（C-23），28.4（C-16），29.2（C-25），29.3（C-4′，C-5′），29.4（C-6′），29.5（C-7′），29.6（C-8′），29.8（C-9′），29.8（C-10′～13′），31.8（C-2），32.0（C-14′），32.1（C-8），32.1（C-7），34.0（C-22），34.1（C-2′），36.3（C-20），36.7（C-10），37.4（C-1），39.9（C-12），42.4（C-4），42.5（C-13），46.0（C-24），50.3（C-9），56.2（C-17），56.9（C-14），72.0（C-3），121.9（C-6），140.9（C-5），178.7（C-1′）。以上数据与文献［18］基本一致，故鉴定为β-谷甾醇棕榈酸酯。

化合物12：无色无定形固体粉末（甲醇）。EI-MSm／s：713.3［M］＋，分子式C40H75NO9。1HNMR（600 MHz，CD3OD）δ：5.76（1H，dt，H-5），5.38（1H，m，H-2），4.28（1H，dd，H-3），3.89（1H，d，J＝1.8 Hz，H-2′），3.87（1H，d，J＝1.5 Hz，H-1），3.72（1H，dd，J＝10.4，3.8 Hz，H-6＂），3.40～3.34（1H，m，H-5＂），3.31～3.27（1H，m，H-4＂），3.31～3.27（1H，m，H-3＂），3.20（1H，dd，J＝9.2，7.8 Hz，H-2＂），2.17～ 2.12（2H，m，H-6），2.12～2.03（2H，m，H-9′），2.02～1.97（2H，m，H-6′），1.75～1.69（1H，m，H-3′），1.58～1.54（2H，m，H-4′），1.25（20H，br，H-7～16），1.39～1.25（2H，m，H-17），1.39～1.25（2H，m，H-5′），1.39～1.25（2H，m，H-18），1.25（6H，br，H-10′～12′），1.25（2H，br，H-13′），1.25（2H，br，H-14′），0.91（3H，t，J＝6.9 Hz，H-19），0.91（3H，t，J＝6.9 Hz，H-15′）；13C-NMR（151 MHz，CD3OD）δ：14.5（C-19，C-15′），23.8（C-14′），23.8（C-18），26.1（C-4′），27.9（C-9′），28.3（C-6′），30.3～30.9（C-7-16，C-5′，C-10′～ 12′），33.1（C-13′），33.1（C-17），33.7（C-6），35.9（C-3′），54.6（C-2），62.7（C-6″），69.7（C-1），71.6（C-4″），72.9（C-3），73.1（C-2′），75.0（C-2″），77.9（C-3″），78.0（C-5″），104.7（C-1″），129.9（C-7′），131.2（C-4），132.0（C-8′），134.4（C-5），177.2（C-1′）。以上数据与文献［19］基本一致，故鉴定为crispin A。